药品质量标准研究中常见问题浅析

药品检验与药品质量标准制订中常见问题浅析,中山大学药学院 徐新军E-mail: TEL:3943304113924061779,2,药品质量标准建立的原则与策略,总责保证药品使用过程中的安全、有效基本策略通过临床试验确定药品的安全、有效；通过对药品的各项理化指标的分析，确定药品是在受控的生产条件下生产的； 例:克林霉素素磷酸酯葡萄糖注射液(欣弗), 亮菌甲素注射液生产的药品与临床试验的药品的理化特性一致。,3,药品质量标准是药品质量管理人员、监督检验人员判断药品质量合格与否的 法律/法规性文件，具有高度的权威性和严肃性。 不能随意更改：修改必需依照一定的法律程序；必需强制执行：在质量标准未修改前，即便现行质量标准有一定的缺陷，也必需执行；（良法与恶法）,药品质量标准的地位,4,良法与恶法,张维迎：法律有所谓实证法与自然法之争。从实证法看，所有由国家颁布的法律都是合法的；但从自然法看，只有符合人性和公共价值的法律才是合法的。或者说，法律有恶法与良法之别。为什么普通法体系被公认为最有效率的法律体系？就是因为它有不断适应变化的能力，一旦出现新的问题，老的法律的伸展性很大。,5,中世纪的大神学家奥古斯丁和托马斯阿奎那都曾经表述过“恶法非法”的理论思想。良法的标准界定为三种，即“价值标准”、 “形式标准”与“程序标准”， “依法治国在实质上是依良法治国”的命题。树立良法治国观,摒弃“清官之治”和“贤人之治”人治观念.西方法学中有关“恶法亦法”与“恶法非法”理论争议的核心问题在于，“恶法”是否具有法律的性质与效力。,6,药品质量标准的特点,整体性严谨性各项目、指标即相互补充，又相对独立；每项检验仅规定一项方法为法定方法；文字严谨科学性限度的合理性方法的可操作性简洁性检验方法易普及推广,7,药品质量标准的组成,药品质量标准中的各项具体的质控项目、分析方法和质控限度构成了药品质量标准的主体；质控项目、限度的合理性及检验方法的可操作性直接影响着质量标准的可执行性。,可以说药品的质量标准是其药学研究的结晶。只有将其药学研究的全部信息融会贯通，并取其精华，才能制定出合理的质量标准。,8,目的,药品质量控制水平的高低,直接影响能否保证上市药品的安全有效. 例: 氧氟沙星,亮“药品的质量是生产出来的，而不是检验出来的”的再认识,检验只是事后监督.前车之覆，后车当鉴。通过对具体事例的剖析，提高对质量标准重要性、严肃性、科学性的认识，在类似的操作中，避免重蹈覆辙。,9,内容,1 性状检查项下的问题2 鉴别项下易出现的问题3 检查项下常见问题4 含量测定项应注意的问题5 药物稳定性研究中应注意的问题6 关于包衣片去除包衣7 内标法在液相色谱应用中的局限性8 对照品使用中应注意的问题9 RP-HPLC中色谱条件的选择10 仿制药并不是标准的仿制,10,一、 性状检查项下的问题,英、美药典性状不作法定规定，标准中无性状项。性状的描述有一定的主观性，有些临界值很难判断，如白色与类白色（略带其他颜色如淡黄色、淡粉红色）、深棕色与褐色。性状如与质量有极大关系，最好在检查项下拟定相应能反映质量的检查项。熔点、吸收系数、旋光度、炽烧残渣、溶液颜色等。USP：Clarity and color of solution,性状:对药品色泽和外表感观的规定。,11,（1）钙片：光滑、平整 （汕头某药厂） （2）头孢氨苄：略带粉红（进口）（3）盐酸小檗碱片性状不合格（肇庆某药厂） 小檗碱片为黄色，片面有印迹，认为有斑点，掰开来看，黄色均匀。（4）进口药品间苯三酚冻干粉片的形状判定 表面有一明显突起块，该品标准符复核起草说明中，对其性状要求表面光滑，由于冻干片是药品与敷料的溶液冻干后直接形成，未经压制，表面很难光滑，仍以合格发。,示例,性状的判定应与生产实际与剂型相结合颜色定出合适的色级幅度,设计标准色卡,1、性状检查的局限性,12,2、警惕运输与贮存不当造成的性状不合格,例1：金霉素软膏流通领域抽检的样品膏体颜色由规定的深黄色变为棕褐色，厂家留样符合规定。例2：华北制药一批青霉素V涉嫌劣药案 青霉素V性状不合格 ，颜色由规定的白色或类白色变为黄色 。,合理避责,13,新闻回放,二季度药品质量公告公布 感康被检测出不合格 2005年07月26日11:06 京华时报本报讯 (记者 郭莹) 昨天，市药监局发布2005年第二季度药品质量公告，全市二季度共完成抽验药品3117批次，其中不合格批次为19个，不合格率为0.61%。(性状不合格12批,其中药材8批),复方氨酚烷胺片(感康) 性状不合格清咽舒茶 性状不合格 盐酸氯丙嗪注射液 性状不合格龙胆 饮片 性状不合格酸枣仁 性状不合格木瓜（2） 性状不合格五加皮 性状不合格清半夏 性状不合格头孢氨苄 性状不合格石槲 性状不合格山药 性状不合格,19批中，9批药材，3批成药不合格,假药 劣药,？,？,成本效益？,14,2、药材细粉化或微粉化后，中药制剂显微鉴别的局限性,例1：武汉中联药业：一批制剂其中一味药显微特征看不到，而在薄层鉴别项下对照药材的鉴别又很明显。例2：广州某中药厂：一批产品被吉林省药品检验所检验出麝香显微特征阴性，含量测定项下麝香酮符合规定。 随着中药提取技术的进步及剂型现代化的需要，直接药粉入药已大大减少，多以浸膏入药。,建议：中药制剂鉴别尽量选用专属性好的色谱法,15,3、中药提取工艺改变后，直接影响产品的性状,随着提取工艺的改进，片芯或胶囊的内容物颜色变浅，原来供用的标准可能基本没变，尽管如此，应注意将性状的改变列入申报审批材料中。,16,4、中药溶液剂应注意有效期内性状的变化,例1：一德国进口的天然药物滴剂，进口注册标准项下描述为澄清液体，实际样品：澄清液体中悬浮着细小白色片状物。按标准判定，应为不合格，以前未注意到，均按合格发。检验人员怀疑厂方稳定性实验不深入。厂方提供的原始材料表明性状项下已载明可能出现少量沉淀。根据中药溶液剂贮藏后易出现少量沉淀的特点，判合格。,应将合理存在的性状变化详细载入性状项下,17,二、鉴别项下易出现的问题,1、鉴别的重复性 中成药部标准中许多生物碱的鉴别采用：甲管中加碘化铋甲生成橙黄色沉淀，乙管中加碘化汞钾生成淡黄色沉淀，丙管中加硅钨酸生成灰白色沉淀。易出现假阳性与假阴性。2、鉴别条目太多 据统计，中国药典2000年版二部同一品种鉴别项下收载的条目46条的有200多个品种，个别的还多达8条。3、鉴别的专属性差 显色反应对中药这种复杂体系来说,不具专属性.示例：,18,4、指标选择不合适,例1：某含夏枯草的中药制剂，其制法为取方中药材，加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过,滤液浓缩至生药量的1/2,加2倍量的乙醇，充分搅拌，静置过夜，滤过，滤液减压回收乙醇。取本品，加水100ml、盐酸15mL，加热回流2小时，放冷，滤过，弃去滤液，药渣挥干，用乙醚振摇提取3次制备供试液，另取熊果酸对照品，制成对照溶液。,例1,19,从总体上看，我国药典同一品种鉴别项下收载的专属性不强的鉴别条目偏多，需下决心精简。 现行美国药典与英国药典的原料药鉴别项下多数只收载一条或两条鉴别方法，成分复杂的复方制剂才收载三、四个。从总体上看，比较简练。 随着IR、紫外光谱和色谱法等现代分析技术的普及，鉴别的专属性不断提高，只用一种或两种方法就可鉴别化学药品的真伪，原有专属性欠佳的老方法可以删减。,20,药品鉴别条目选用原则(1),1、原料药广泛采用红外光谱法，精减专属性不强的鉴别条目 凡药品是单一组分、化学结构明确的有机原料药应采用IR法做鉴别。收载IR鉴别数目：1995版，306种 2000版，510种 2005版，580种,21,例如氨基酸、阿司巴坦、丙二醇、氨苄西林等只用红外光谱法鉴别（2000版，27种） 另有41种原料药 用IR和另一项仪器分析方法（如紫外法、HPLC、TLC等） 另有100多种原料药没有选用IR，而美英药典选用了IR，可兹借鉴（卡波姆、头孢哌酮、蔗糖等。,22,从药品红外光谱图集看，有机碱类药物与其相应的盐类药物有明显的不同；有机酸类药物与其相应的金属盐类药物红外光谱明显不同，足以证明其真实性，不必再收载相应的离子鉴别反应作为鉴别条目。 红外 光谱是分子的振动转动光谱，特征性强，红外光谱的专属性比常用的呈色反应、沉淀反应都强。凡选用IR鉴别的品种，一般在鉴别项下均可不再收载这类鉴别反应。,23,有些有机氟类或有机硫类药物，如地西泮、氧氟沙星、醋酸地塞米松、醋酸氟氢松等，现行中国药典选用氧瓶燃烧法进行有机破坏后，再进行化学鉴别，这些药物同时还收载了IR，氧瓶燃烧法操作繁杂费时费力，专属性比红外光谱差，现行美、英药典对这些药品选用IR后，均没有选用氧瓶燃烧法进行鉴别。 建议：同一种药品选用IR鉴别后，可删除氧瓶燃烧法。,24,2、含量测定或检查项下已采用色谱法的品种，可在鉴别项中加以引用,鉴于国内外药典广泛选用HPLC进行含量测定和杂质检查，在拟订药品鉴别条目时应充分利用这些资料提高鉴别水平。ChP2000二部 ：含量272个HPLC法 鉴别选用163个尚有142种药品含量使用HPLC，但鉴别项没有引用，前后呼应不够，相互借鉴欠缺。还有50种药品在检查杂质限量时选用了HPLC，但鉴别项未利用。,25,头孢拉定、头孢克罗、头孢氨苄制剂的鉴别： 鉴别方法为TLC、HPLC、IR。薄层色谱法与HPLC法供选用，其用意是为没有HPLC仪的单位提供方便，但是这些药品的含量测定方法均选用HPLC法，没有相应的仪器就无法完成全检。鉴别项中TLC法形同虚设，没有实际价值。,示例,26,3、同一品种鉴别条目宜少不宜多,现行国家药典按国家药品标准指导原则大量增收了IR法与UV法，但没有删减老方法，形成新老方法并蓄，条目偏多，如青霉素钠鉴别：（1）青霉素酶灭活法（2）IR（3）钠盐USP：平均1.72个； BP：1.842.14,鉴别是为了核对已知药物的真伪，而不是论证未知药物的组成和结构。化学药只要选用专属性较强的一、二种方法就足以鉴别出真伪，不宜罗列过多,27,4、中药标准取消没有专属性的化学反应，尽可能多地建立TLC鉴别,复方中药1/31/4的药味应有鉴别。 2005年 一部TLC鉴别1523项,5、中药提取前处理的溶剂及TLC展开剂尽可能少用或不用毒性较大的溶剂苯、甲苯可致癌；氯仿致肝损伤 选用替代溶剂,28,鉴别小结,药品质量标准是一个整体，外观性状的观测、物理常数的测定、特殊杂质限量的检查和含量测定等项规定均与真伪鉴别密切相关，可以相互借鉴，前后呼应。在选定鉴别条目时，应从同一品种质量标准的全局着眼，通盘考虑，精选鉴别条目，尽量选用专属性好、易操作的鉴别方法，原则上，鉴别条目不超过4个。,29,三、检查项下常出现的问题,1、有关物质检查系统适应性差： 例1：2005版药典一部环维黄杨星D 其他生物碱检查项下TLC条件存在： （1）系统选择性不好，分离度差，不能检出环维黄杨星D粗品中杂质； （2）该项检查点样量低，杂质达25%才能被检出；根据含量要求，应控制杂质1%以下。方法：非水滴定法,结论：该项不能控制产品质量，形同虚设，必需改进,参考文献：徐新军等。中药新药与临床药理，2004，2：110112,30,2、口服液体制剂的有关物质检查不宜采用归一化法,洛斯宝口服液的有关物质检查 发酵液提取厂附标准杂质对照品比较法复核标准改为归一化法X,例1,31,3、有关物质检查采用自身对照法应注意杂质响应因子的差别,某药检查有关物质，采用自身对照加校正因子法，其中一杂质的响应是主药的12倍。,例1,32,4、检查方法设计不合理例1：头孢氨苄溶液颜色 取头孢氨苄适量，用1mol/l盐酸溶解，指定波长处测定吸收度例2：头孢呋新钠溶液颜色 取头孢呋新钠适量，用EDTA-2Na溶液溶解后观察颜色。例3：水分的检查香砂胃痛散水分测定,X,X,33,5、检查项限度设置水平与现时生产实际脱离，出现揠苗助长,例1：无菌粉针可见异物检查2005版药典征求意见稿：2005版药典：,34,6、中成药中对毒性成分应设立限度检查而没有设立,或设立了无法提供对照品,例1：六神丸与日本救心丸 蟾酥碱例2: 银杏叶 银杏酸,35,7、中成药中缺乏对农药残留、有害重金属、砷盐的控制要求,中药材农药残留污染现象严重、中成药中长期存在着重金属超标等问题，严重影响中药的声誉。而我国对重金属超标及某些矿物药安全性和有效性研究，尤其是有关重金属在中成药中作用、不同存在状态的各种重金属的药理和毒理作用，以及中药材的农药残留问题的研究严重滞后。,36,中药国际标准成争议焦点 2006年08月15日03:17 第一财经日报传统中药英国遭遇金属超标调查汞含量超过英国标准11.7万倍,复方芦荟胶囊是一种用于治疗便秘和清肝火的常用中药，是国家二级中药保护品种。在中国国家药品标准里，中药中如安宫牛黄丸、仁丹等253个药品是国家批准可以含有“朱砂”成分.针对英国药物安全机构中称的汞含量超标的问题，省中药局业务处有关人员介绍，很多的中草药中汞的含量都有超标，但跟其他药物一起使用，不一定对人体就有害。比如砒霜，汞的含量还要高于芦荟胶囊，目前，国际上还是用于辅助治疗白血病，韩国则用来浸酒，达到驱寒的功效，只不过使用时要注意剂量。,37,建议: 对朱砂、雄黄等最常用矿物药的化学纯度、价态与安全性和有效性，组织重点课题进行系统研究；有关部门应参照食品重金属限量，组织专家，根据剂量、疗程制定合理的中药重金属限量标准，并对不合要求的中药，严禁使用；从药材生产基地着手，严格控制污染性农药使用，严格执行禁用农药残留超标之药材，鼓励、支持开展消除药材农药残留的新方法、新技术的研究。,38,8、残留溶剂或水分的GC测定忽视样品在介质中的溶解性,例1、万古霉素中残留溶剂的顶空GC测定样品1g在规定的溶剂中不完全溶解例2：香砂胃痛散GC测定水分例3：克拉维酸钾二氧化硅原料溶剂残留测定,39,9、自身对照法测定溶出度的局限性,中国药典二部中抗生素固体制剂溶出度均采用自生对照法, 但尚未被国际认可, 建议新药标准研究时仍采用对照品比较法.,参考文献徐新军。浅谈自身对照法计算溶出度。华西药学杂志，2001年，3期,40,四、含量测定项应注意的问题,1、含量质控指标过低例1：某中成药中绿原酸含量限度的制订,41,42,国家药典会对中药含量测定的技术要求,对君药、有毒药味或其他可以建立含量测定方法的药材需做方法学考察和验证。独家生产的，含量测定的限度设定至少要以10个批次20个数据为依据；多家生产的品种限度的设定要尽可能多的收集不同厂家的产品（如：10家以内的，至少收集5个主要生产企业的品种，每家至少三批；50家以上的，至少收集10个企业的品种，每家至少2批），以保证限度的合理性和可行性。 20批的数据定那个值合理?很多情况下含量测定形同虚设.,43,2、取样的代表性与品种鉴定的重要性,中药与天然药物研究的许多伪结果是由于取样的不具代表性和品种鉴定错误。“品种一错，全盘皆否”。因此，对于实验材料的物种鉴定的认真和科学态度是一个研究者的根本良知，实验的伪结果不但使研究工作失去意义，而且会为他人提供错误信息，贻害无穷，为保证研究工作的科学性，首先要保证物种鉴定和取样代表性的第一关。示例：药理实验中的提取物的固定化补肾强身片中淫羊霍苷的含量,44,品种混淆，影响了中药材的质量。各地所生产的中成药中，同一中药材其成分含量相差数倍至数十倍，其药效和质量标准无法比较。,45,药典标准中取样代表性差示例丹参：引种栽培后，根比野生根茎粗大，由于2000年版药典含量测定指标成分丹参酮IIA主要存在于根皮，导致栽培丹参丹参酮IIA含量很低，有的比药典限度低10多倍。在2002年全国重点品种抽验考核中，共抽135件，其中111件不合格，2003年市药检所跟踪抽样，检验20批，只有3批合格。,到底是药材质量差，还是指标不合适呢（82%） 制剂均合格？,？,46,一般药材含量定一个限度，至少需有10批以上的数据积累。很明显，这个标准的取样代表性不强，没有把目前市场流通的、占主导地位的栽培品考虑进去。 文献报道：丹参主要有效成分为丹参酮IA、丹参酮IIA、二氢丹参酮IIA、次甲丹参醌、丹参酸甲酯、隐丹参酮、原儿茶酸、原儿茶醛等。该品测定指标与限度是否合理需要再评价。参考文献：徐新军。广东省2003年第一季度药品抽验不合格原因分析。国际医药卫生导报，2003，8：106107,47,Chp2000与ChP2005丹参药材含量规定比较,ChP2000：丹参酮IIA 0.2%,ChP2005：丹参酮IIA 0.2%丹酚酸B 3.0%,48,目前对中药质量标准有些争议或非议，这与制订质量标准时工作不够深入，方法比较粗糙，数据太少，随意性太大，重现性差，可鉴别性不强等有关，这就要求中药质量标准研究工作者在技术上精益求精，严格要求，力争使标准充分体现现代化、科学化。,49,品种鉴定错误示例XX痔疮水,用药部位错误示例广东凉茶,50,3、部分中药和大部分医院制剂含量测定不完善,例1：抽查某医院一复方地塞米松软膏，按地标升国标后的标准检验，只达标示量的30%，本批产品不合格。医院认为使用标准不当，应按广东省医院制剂规范检，根据该批制剂的生产日期，确实应按制剂规范检，按制剂规范检测，可的松不测含量，本批产品合格。对该批制剂，制剂规范是现行有效的。,？,你认为该批产品是发合格还是不合格,例2：赋料干扰测定性（特别是UV法）,51,补充检验方法或增加检验项目,药品管理法实施条例第58条规定：对有掺杂、掺假嫌疑的药品，在国家药品标准规定的检验方法和检验项目不能检验时，药品检验机构可以补充检验方法和检验项目进行药品检验，经国务院药品监督管理部门批准后，使用补充检验方法和检验项目所得出的检验结果，可以作为药品监督管理部门认定药品质量的依据。,52,药品检验工作管理办法 药品检验所发现药品有掺杂、掺假嫌疑的，可以补充检验方法或者增加检验项目，经国务院药品监督管理部门批准后，作为执法依据。 补肾状阳类中成药中添加“伟哥” 降糖类中药中添加化学降糖药：格列本脲 中一消渴丸中含有 缘起吉林药检所检测发现：在囊壳中加化学药高英雄气短与魔高一尺，道高一丈,示例,53,黎叔有句名言：我最讨厌打劫的了，一点技术含量都没有！,假劣药品坑害病人，使病人雪上加霜,无异于打劫,！,54,中药现代化，a long way to go。,当你服用某种保健食品，感觉“效果特好，甚至比吃药都有用”，那最好深入了解其是否违法添加了西药成分。,55,4、方法缺乏专属性,例1：氧氟沙星胶囊的UV测定例2：头孢曲松钠输液的稳定性,参考文献徐新军。当前药品监督检验中应注意的几个药品质量问题。江苏药学与临床研究，2000年3期,56,5、药物含量在低限,例1：阿莫西林胶囊 直接以原料填充,含量在92.0%,57,6、测定条件选择不合适,例1：阿莫西林钠的HPLC含量测定流动相：例2：环丙沙星含量测定,58,例1：阿莫西林钠的HPLC含量测定流动相：,59,例2：环丙沙星含量测定,60,五、药物稳定性研究中应注意的问题,稳定性研究的目的：考察药物在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律，为药品的包装、贮存、运输条件提供科学依据，同时通过实验确定药品的有效期。中成药稳定性研究范围：物理、化学、生物学稳定性。通过研究揭示稳定性变化的实质，探讨其影响因素，可采用相应的措施避免或延缓制剂的不稳定性。药品的安全、有效、可控和稳定性是对药品的基本要求，而稳定性又是保证有效性和安全性的重要因素。,61,中药新药稳定性研究技术要求,在申报临床时，待测样品临床实验用包装条件下放置，并记录室温和湿度根据该制剂申报临床研究质量标准草案所列性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定等项并结合附表中不同剂型的稳定性考察项目要求进行。需注意检测成分是否能说明该制剂的稳定性。,62,1、应注意供选做含量测定成分的合理性 选择有效成分或指标成分,例1：丹参注射液含量测定 丹参注射液的有效成分主要是丹参的水溶性物质，这些物质是原儿茶酸、原儿茶碱、丹参素、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、迷迭香酸、四甲基丹酚酸等，均为邻苯二羟基类化合物，目前，丹参素较多地用于含丹参制剂的质量或稳定性评价，但在加速稳定性实验中，发现丹参素含量随加速时间延长而增加。因此，对含丹参制剂的质量评价及稳定性考察评价指标的选择应慎重考虑。,63,含大黄制剂： 不能只测总蒽醌，应同时检测游离蒽醌或结合蒽醌才能确定反映其成分变化。,示例二,中药中含游离蒽醌的量一般不高,且为脂溶性,用弱极性溶剂如乙醚、氯仿等提取后加碱比色。蒽醌苷类成分极性较强，可以用有机溶剂提取，通常取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出，水解成苷元后再测定。,64,Applicatin of HPTLC Fingerprint analysis to Stability of Ginsenosides in Ginseng Preparations,示例3,颠覆性结论,人参蜂王浆口服液,X,65,西洋参,人参,人参蜂王浆,西洋参蜂王浆,66,67,威灵仙注射液中原白头翁稳定性的研究经考察pH值、温度、光线、添加剂等因素对原白头翁的稳定性均有影响，通过对恒温加速实验数据处理后，认为原白头翁的化学动力学为伪一级反应，预测有效期为2.3天。,示例2,68,1、FDA、ICH、化学药的技术要求与中药稳定性要求对比 样品批数、生产规模、实验方法（加速、常温）、考察时间、研究的方式基本相同。化学药由于为单一成分要求进行影响因素实验如：高温实验、高湿实验、强光照射实验，此外根据药物的性质必要时可设计实验，探讨pH与氧及其他条件对药物稳定性的影响，并研究分解产物的分析方法。创新药物应对分解产物的性质进行必要分析。,69,六、关于包衣片去除包衣（一）,中国药典及部颁标准、局颁标准中，超过60%的糖衣片采用去除糖衣测其含量，该法欠佳：（1）削糖衣不易，操作困难。糖衣与片芯紧密粘合在一起，绝大部分糖衣与片芯难分离；不论使用何种方法与工具，都难以全部除去糖衣，保持芯片的完整无缺；（2）影响平均片重。由于糖衣与片芯粘贴，削衣困难，难免残留部分糖衣或使残缺损失，即使增加削片数，也难使平均芯片趋于稳定数值；,70,关于包衣片去除包衣（二）,（3）影响分析结果的重现性。由于片芯残缺或剥离不净，影响平均片重在所难免，最终影响分析结果的重现性。,71,关于包衣片去除包衣（三）,片剂去包衣的背景 1、对测定有干扰。如鉴别。 2、方法缺乏专属性。如UV法,是否糖衣片就一定必须除糖衣,？,72,关于包衣片去除包衣（四）,色谱法已普遍应用的今天，去包衣很大程度上非去除干扰所必需，惯性使然。实际上，现在中药的含量测定很多已采用色谱法，色谱法本身就具有很强大的分离功能，一般情况下，糖衣干扰的可能性远小于中药中其他组分对待测组分的干扰。在制订标准时，应考察包衣是否对测定有干扰再确定是否需去除包衣。即使有干扰，有时可改进测定方法（如提取溶剂优化、流动相调整、色谱柱选择、改用其他方法等）。,73,七、内标法在液相色谱应用中的局限性,内标法早期被国内外药典大量使用原因:进样重复性差仪器稳定性差目前，药材或制剂中HPLC测定含量应少用或不用内标法 药典中激素类药物及部分中药还在采用。,推荐在体内药物分析或GC、HPCE测定含量时采用,参考文献：1、徐新军，谭奥，徐明辉。内标法在液相色谱应用中的局限性。中国药事，1998年42、曾经泽。生物药物分析。内标的选择与评价。,74,八、对照品使用中应注意的问题,某复方制剂HPLC测定中，维生素对照品含量为100.7%色谱测定用对照品含量是否可超过100%？,？,75,对照品或标准品原始基准品的建立：,确定标准物质名称、含量表示方法选取原料：尽可能纯化基准品原料原料组成分析（如：水分、挥发性物质、无机杂质残留溶剂等）及测定基准品的纯度分析确定基准品的含量验证,在标定各级标准物质时，通常要采用协作标定的方法，已保证获得准确量值传递结果。,76,1、有明确溯源 多为进口药品检验用国家原始基准品的建立,基准品建立的类型,77,2、无明确溯源的 如：新药注册中的仿制药：地红霉素、司丙红霉素、头孢吡肟等。,（1）、根据世界卫生组织（WHO）基准品建立的指导原则，采用多种测试分析方法，分析确定原料的纯度和杂质的含量。以扣除法确定原料的含量。（2）、在可以得到企业标准品/对照品或原始发明厂的标准品/对照品的情况下：a、以企业的标准品/对照品为对照，进行标定。验证方法（1）的结果。b、原始发明厂的标准品/对照品或以有明确溯源的标准品为基准进行协作标定。（3）在确定首批标准品、对照品的量值中，一般采用将方法（1）的结果与标定结果合并计算，作为首批标准品/对照品的含量。或以方法（2）结果核对或校正方法（1）结果，即可验证方法（1）结果的准确性，又不侵犯知识产权。,78,3、无量值溯源 新药注册中的国家一类新药，如头孢硫脒,头孢硫眯是我国自主研制的国家一类新药。在世界卫生组织（WHO）基准品建立的指导下，根据建立首批标准品/对照品的方法，按照“基准品效价定义组成分析纯度分析含量确定结果验证”的基本步骤，研制建立我国首批基准品。,79,1、命名及含量确定,2、组成分析,理论值分析,元素测定,根据已知分子式计算理论含量,根据N,S元素测定结果，推测纯度,有机成分,无机成分,挥发性物质,无机杂质,盐、酸根的量,费休氏法，干燥失重，TGA,炽灼残渣，TGA,离子电位滴定法,80,3、纯度分析,直接测定法,间接测定法,DSC、NMR、HPLCELSD归一化法、HPLCIR归一化法,有机杂质的分析与测定,纯度的测定,TLC、HPLC不同的检测器联用、HPCE,HPLCELSD自身对照法,4、含量确定,直接扣除法,效价（u/mg）(1水分或挥发性物质残留溶剂 残渣) 纯度1000(u/mg) 含量（）=(1水分或挥发性物质残留溶剂 残渣) 纯度,HPLCELSD随行曲线法,外标法,参考文献：,81