归芎提取部分.doc

归芎药对不同配比提取物有效成分群分析部分实验方法讨论【主要效应物质】当归、川芎药对中含有的阿魏酸、川芎嗪、挥发油等物质为主要效应物质。本实验主要探讨阿魏酸、川芎嗪的定量分析。【药对配比】本实验研究的基础方为当归芍药散，处方如下：当归 9g；芍药 30g；川芎 9g；茯苓 12g；泽泻 15g；白术 12g本处方中当归、川芎药对配比为1:1。考虑本次研究中采取五组归芎药对的配比，分别为当归：川芎为 2:1、1.5:1、1:1、1:1.5、1:2。【指标性成分】选取指标性成分为挥发油、阿魏酸、川芎嗪其中挥发油和阿魏酸是当归和川芎的共有成分，川芎嗪为川芎特有成分【提取工艺】一、各成分分别分析1、挥发油：按配比称取当归川芎饮片适量，10倍量水事先浸泡一小时置于蒸馏瓶中，振摇混合后，连接挥发油提取器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满测定器的刻度部分，并溢流入蒸馏瓶时停止。直火回流至测定器中油量不再增加（约8小时），冷置，分层。开起测定器下端活塞，使油层下降至其上端与刻度“0”齐平，读取挥发油亮，计算出油率，缓缓放出水分，接收挥发油加入无水硫酸钠干燥，密闭保存备用。参考文献：川芎、当归挥发性成分混合提取工艺探讨胡志方 郭慧玲（江苏中医学院学报2004年6月第16卷第3期）2、阿魏酸：参考文献：当归川芎中阿魏酸提取的研究胡杰、冯丽莉、崔福德（沈阳药科大学） 当归、川芎提取工艺研究吴清, 李云谷, 杜守颖, 张玉杰（中国实验方剂学杂志1999 年12 月第5 卷第6 期）1）考虑提取方式一：水提考虑到本方制剂由温水送服，用水提法，测定水提后阿魏酸含量选定提取工艺如下：按配比称取当归川芎饮片适量，过20目筛，先用8倍量蒸馏水浸泡30min后，回流提取三次，每次0.5h，每次用水量8、8、6倍，合并滤液，浓缩至每1ml含0.5g药液，备用。2）考虑提取方式二：醇提 选取提取工艺如下：按配比称取当归川芎饮片适量，加入8倍量体积的80%乙醇，回流提取两次，每次2h，合并滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩至稠膏状，80减压干燥，得样品。3、川芎嗪：参考文献：川芎单煎液和川芎当归共煎液中川芎嗪的含量测定 医药导报2007年10月第26卷第10期选取工艺如下：按配比称取当归川芎饮片适量，放于圆底烧瓶中加入12倍沸水浸泡30min，电热烫加热煮沸15min，冷却后约10min过滤。残渣加12倍沸水继续煮沸15min，冷却10分钟后过滤，合并滤液。二、综合考量得出拟定的提取方法：参考文献：当归、川芎提取工艺研究吴清, 李云谷, 杜守颖, 张玉杰（中国实验方剂学杂志1999 年12 月第5 卷第6 期） 当归川芎中阿魏酸提取的研究胡杰、冯丽莉、崔福德（沈阳药科大学） 川芎单煎液和川芎当归共煎液中川芎嗪的含量测定徐朝江，孔毅，郑公义，申屠建中（医药导报2007年10月第26卷第10期）本实验在于研究当归、川芎不同配比所产生的不同，以及探究挥发油成分。考虑使用水煎法进行水煎液中有效成分分析及药效学研究，另单独提取挥发油进行有效成分群分析。1、 挥发油提取步骤如下：按配比称取当归川芎饮片适量，10倍量水事先浸泡一小时置于蒸馏瓶中，振摇混合后，连接挥发油提取器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满测定器的刻度部分，并溢流入蒸馏瓶时停止。直火回流至测定器中油量不再增加（约8小时），冷置，分层。开起测定器下端活塞，使油层下降至其上端与刻度“0”齐平，读取挥发油亮，计算出油率，缓缓放出水分，接收挥发油加入无水硫酸钠干燥，密闭保存备用。2、 水提法提取 按配比称取当归川芎饮片适量，过20目筛，先用8倍量蒸馏水浸泡30min后，回流提取三次，每次0.5h，每次用水量8、8、6倍，合并滤液，浓缩至每1ml含0.5g药液，备用。【成分定量分析】一、 阿魏酸：照中国药典高效液相色谱法（附录VI D）测定色谱条件及系统适应性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液（30:70）为流动相；检测波长321nm处。理论塔板数以阿魏酸峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色试剂瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20g的溶液。供试品溶液的制备：1、 水提药液：精密取水提药液5ml，蒸干水分，用70%甲醇溶解，在10ml容量瓶中定容2、 醇提样品：取样品0.5g，精密称定，用10ml 70%甲醇溶解，静止取上清液。分别吸取两种样品和对照品各10L进样，测定。二、 川芎嗪参考文献：川芎单煎液和川芎当归共煎液中川芎嗪的含量测定 医药导报2007年10月色谱条件及系统适应性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；注温：25，流动相A为水，B相为甲醇，梯度程序见下表，流速1ml/min，检测波长为298nm。对照品溶液的制备：精密称取盐酸川芎嗪对照品适量，置棕色容量瓶中，以甲醇-醋酸-水（28