病理诊断开题报告

硕士研究生开题报告 研 究 生 姓 名张俊 学 号导师姓名、职称陈志强主任医师系 所宁夏医科大专 业影像医学与核医学 研 究 方 向磁共振功能成像入 学 时 间2012年09月毕 业 时 间2015年06月论 文 题 目C-met、CXCR4的表达与大肠癌肝转移的关系 一、立论依据（选题的研究意义、国内外研究现状分析） 大肠癌（Colorectal cancer，CRC）是临床中最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈上升趋势。治疗失败的主要原因是术后的局部复发和转移，其中肝脏是大肠癌最常见、最易发生转移的器官。因此，提高大肠癌肝转移的早期诊断率，对提高大肠癌患者的生存率及改善预后有极其重要的意义。目前，人们在大肠癌分子标志物检测方面开展了大量的研究并取得一定的成果，其中，C-met、CXCR4与大肠癌肝转移的研究是近年来的一个热点。C-met基因是1984年Cooper等首先发现的一个原癌基因。1987年Park等研究表明，C-met基因的表达产物是跨胰蛋白，具有酪氨酸激酶的活性。1991年Donald等研究又发现C-met编码的蛋白产物就是肝细胞生长因子(HGF)受体。 Cmet编码的酪氨酸激酶活性受体蛋白，与多种癌基因产物和调节蛋白有关，参与细胞信息传导、细胞骨架重排的调控。是调节细胞增殖、分化和运动的重要因素。Cmet的激活与多种肿瘤发生、发展有关。趋化因子受体CXCR4是G蛋白偶联受体超家族成员，CXCR4是一个由352个氨基酸构成的视紫红质样GPCR（G蛋白偶联受体G protein-coupled receptor），CXCL12又称基质细胞衍生因子l(stromal cell derived factor1，SDF-1)或前B细胞刺激因子(preBcdl stimulatory factor，PBSF)，目前认为CXCL12是该受体的唯一配体，CXCR4不仅表达于细胞表面，而且也可在胞浆中检测到。CXCR4与免疫细胞的归巢12和信息传递12相关。目前已经发现CXCR4在23种不同类型肿瘤中均有表达，是肿瘤细胞表达最为普遍的趋化因子受体，和患者的预后相关2。并且在肿瘤增殖、浸润、血管新生及转移等过程中起到非常重要的作用。Kryczek I等12证明CXCR4在机体生长、红细胞生成、器官和血管形成过程中起到了重要的作用。大肠腺瘤C-met蛋白表达阳性率与癌旁正常黏膜组相比较，无显著性差异，但有升高趋势。C-met蛋白表达与大肠癌临床分期、淋巴结转移、肝转移有关，而与肿瘤细胞分化程度，患者性别、年龄无关。 C-met是一个受体酪氨酸激酶，在许多恶性肿瘤中表达和(或)发生变异，C-met促进大肠癌肝转移的作用机制很复杂，C-met信号的激活可通过自分泌途径激活降低肿瘤细胞间的粘附作用，导致肿瘤细胞离散10；可诱导血管内皮细胞的增殖促进血管生成，促进细胞增殖8；影响上皮细胞与间质细胞的相互作用，增加细胞运动性、侵袭性，最终发生转移11；还与肝脏中HGFSF结合形成正反馈增强转移的器官特异性有关。大量的研究和文献资料表明，CXCR4在大肠癌组织和癌旁正常组织中的表达有差异，在大肠癌组织中的表达要高于癌旁正常组织，他们之间的表达有差异性。Zeelenberg11等在对比研究BALB/c小鼠结肠癌细胞CXCR4的作用中发现，下调结肠肿瘤CT26细胞CXCR4的表达，明显抑制了肝转移的发生。这说明CXCR4在大肠癌中的高表达，能促进肝转移的发生。CXCR4介导肿瘤的凋亡和增殖、肿瘤血管的新生，还有肿瘤的侵袭和转移，大量的研究发现趋化因子及其受体在肿瘤侵袭转移中发挥重要作用。目前认为CXCR4介导大肠癌细胞肝转移的机制主要有免疫细胞的“归巢”10和信息传递12。补充了经典的“种子和土壤”假说与“机械转移”假说在分子水平上的不足。支持了现代肿瘤的转移理论：肿瘤转移是由诸多因素决定的多步骤、序贯性的生物学过程。二、研究方案1 研究目标、研究内容和拟解决的关键问题探讨C-met蛋白、CXCR4在大肠癌组织的表达情况及其与肿瘤肝转移的关系。国内外大量研究表明，C-met蛋白、CXCR4在大肠癌组织中的表达要高于正常大肠组织，该课题通过比较有肝转移的大肠癌组织及未有肝转移的大肠癌组织中C-met蛋白、CXCR的表达的差异，进一步研究C-met蛋白、CXCR4对大肠癌肝转移的预测作用。重点解决的技术问题：实验观察指标问题及各实验指标的操作技术问题；采用合适的统计学方法分析。 2拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1、实验对象：回顾性研究某医院0年至0年的大肠癌组织标本例和大肠腺瘤组例，将其分为肝转移组和无肝转移组，阴性对照组为大肠腺瘤组。2、主要试剂：鼠抗人CXCR4单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，c-met一抗和二抗购自美国Antibody Giagnostica Inc。3、免疫组织化学染色：免疫组织化学染色采用链霉素康生物素-过氧化物酶（S-P）法。按试剂说明书进行。4、结果判断：（1）定性：一位/两位病理医师分别单盲/双盲阅片，在1040倍显微镜下观察计数，每张切片随机选取5个视野，每个视野计数200个细胞。以胞膜或胞质出现黄色或褐色为阳性染色。（2）阳性表达级别采用双评分半定量法：阳性细胞比率计分：无阳性细胞为0分；阳性细胞百分率66为3分。（3）显色度计分：高倍镜下（400）下取表达最强的部位，按显色程度分，显色与背景相似者为0分；显色浅，略高于背景为1分；中度显色，明显高于背景为2分；强染，显色深棕色为3分。（4）总积分：将上述两种积分相加记得总积分，0分为阴性“”，12分为弱阳性“+”，34分为阳性“+”，56分为强阳性“+”。5、统计学分析：采用SPSS13.0统计软件行析因性分析。6、主要仪器：制作及观察病理切片的相关试剂及器械。3本研究的特色与创新之处本研究重点探讨C-met、CXCR4与大肠癌肝转移关系，探讨C-met、CXCR4在预测大肠癌肝转移的临床价值与意义。4预期的论文进展和成果2013年03月-04月 前期准备，查阅文献，写综述并开题报告2013年05月-07月 完善课题，收集病例和标本20013年08月-10月 病理切片行免疫组化实验，判断标本结果20013年11月-12月 结果分析，撰写论文三、研究基础1已参加过的有关研究工作和已取得的研究工作成绩完成综述 C-met、CXCR4与大肠癌肝转移的研究进展一篇。2已具备的研究（实验）条件，尚缺少的研究（实验）条件和拟解决的途径各试剂可通过厂商购得；仪器设备通过相关科室、单位的协作易于获得；本实验的技术环节可靠；导师组在本专业造诣深厚，经验丰富，实验可行。实验中一些步骤及观察指标将随着研究的深入有可能进行更改。四、主要参考文献1.Tsarfaty I,et al.The met protooncogene receptor and lumen formation.Science.1992,257:1258.2.Balkwill F.The significance of cancer cell expression of the chemokine receptor CXCR4.SeminCancer BiolJ,2009,14(3)：171-179.3.Wang H，Keiser JAHepatocyte growth factor enhances MMP activity in human endothelial cellsJBiochem Biophys Commun，2012，272(3)：900-9054.韦烨,许剑民,卢雪一,等.c-metprotoncogene在结直肠癌肝转移诊断中的应用.中国癌症杂志J.2009,12(12):993-997.5.Takeuchi H,Bilchik A,Saha S,et al.c-MET expression level in primary colon cancer: a predictor of tumor invasion and lymph node metastases.Clin Cancer ResJ. 2010 Apr;9(4):1480-8.6.Bauer TW, Fan F,Liu W,et al.Insulinlike growth factor-I-mediated migration and invasion of human colon carcinoma cells requires activation of c-Met and urokinase plasminogen activator receptor.Ann SurgJ. 2008 May;241(5):748-56; discussion 756-8.7.Takeuchi H, Kim J, Fujimoto A,et al.X-Linked inhibitor of apoptosis protein expression level in colorectal cancer is regulated by hepatocyte growth factor/C-met pathway via Akt signaling.Clin Cancer Res. 2007 Nov 1;11(21):7621-8.8.Horiguchi N,Takayama H,Toyoda M ,et al.Hepatocyte growth factor promotes hepatocarcinogenesis through C-Met autocrine activation and enhan ced angiogenesis in transgenic mice treated with diethylnitrosamineoncogene.2002,2l:l79l-l7999.刘文静,刘国永,郭长青.大肠癌中c-met的表达和血管生成及其相互关系.实用诊断与治疗杂志J.2009，18(3):171-173.10. Davies G，Jiang WG，Mason MD，et a1Cell-cell adhesion molecules and signaling inter mediates and their role in the invasive proteinal of prostate cancer cellsJJ Urol，2007，163(3)：985-992.11.Kermorgant S,Aparicio T,Dessirier V,et a1.Hepatocyte growth factor