EHA105电击 电转感受态细胞使用说明.doc

EHA105电击 电转感受态细胞使用说明 EHA105电击/电转感受态细胞EHA105Electroporation CompetentCell编号名称规格北京华越洋WG07236EHA105电击/电转/转感受态细胞1050ul EHA105电击/电转感受态细胞基因型C58(rif r)Ti pEHA105(pTiBo542DT-DNA)Suinamopine EHA105电击/电转感受态细胞说明EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。 唯地生物开发的EHA105电转感受态特别适用于大质粒的转化经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率105cfu/g DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40kd）检测转化效率可达5103cfu/g DNA。 EHA105电击/电转感受态细胞操作方法1.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。 2.取-80保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5g质粒DNA（质粒体积不大于6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200l枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。 3.启动电转仪，设置参数C=25F，PC=200ohm，V=2400V（此参数为Biorad推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700l无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28振荡培养23小时。 4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100l左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28培养箱培养2-3天（当平板只含有50g/ml kan时，28培养48h即可；平板中同时加入50g/ml kan，20g/ml rif时，需28培养60h；如果使用的平板含有50g/ml rif则需要28培养72-90h）。 EHA105电击/电转感受态细胞注意事项1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。 2.混入质粒时应轻柔操作。 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。 4.利福平浓度不应高于25g/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。 本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50g/ml kan，若所用平板含有20g/ml rif则转化效率降低到1/2。 5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。 EHA105电击/电转感受态细胞保存条件-80洋华越洋EHA105电击/电转感受态细胞相关Rosetta-gami B(DE3)pLacI感受态细胞DMT感受态细胞Rosetta-gami2(DE3)pLacI感受态细胞TKB1感受态细胞Rosetta-gami感受态细胞Origami感受态细胞Rosetta感受态细胞HMS174,HMS174(DE3),HMS174(DE3)pLysS Rosetta-gami2(DE3)pLysS感受态细胞平板涂布专用玻璃珠Stbl3超级感受态细胞Stbl3感受态细胞RosettaBlue感受态细胞NMY51酵母感受态细胞RosettaBlue(DE3)感受态细胞TG1感受态细胞，TG1感受态细胞TOP10F超级感受态细胞EHA105感受态细胞RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞Stbl2感受态细胞RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞DH10B感受态细胞Tuner(DE3)pLacI感受态细胞T1感受态细胞Rosetta2(DE3)感受态细胞M15感受态细胞Rosetta2(DE3)pLacI感受态细胞HB101感受态细胞Tuner(DE3)pLysS感受态细胞JM109感受态细胞Rosetta(DE3)感受态细胞Y1HGold酵母感受态细胞Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞Rosseta(DE3)感受态细胞Rosetta(DE3)pLacI感受态细胞AH109酵母感受态细胞Rosetta2感受态细胞TB1感受态细胞，TB1Rosetta2(DE3)pLySs感受态细胞EGY48酵母菌感受态细胞Origami B感受态细胞XL1-Blue感受态细胞Origami2(DE3)pLysS感受态细胞DH10Bac感受态细胞Tuner(DE3)感受态细胞BJ5183感受态细胞，BJ5183Origami2(DE3)pLacI感受态细胞DB3.1感受态细胞Tuner感受态细胞JM110感受态细胞OmniMAX2-T1感受态细胞GV3101感受态细胞NovaF-感受态细胞SURE感受态细胞，SURE感受态细胞NovaBlue感受态细胞BL21(DE3)感受态细胞XL1-Blue化学感受态细胞stbl3感受态细胞，stbl3感受态细胞DH5超级感受态细胞BL21Star(DE3)感受态细胞DH5-T1感受态细胞BL21Star(DE3)pLySs感受态细胞BLR(DE3)感受态细胞AD494(DE3)感受态细胞BLR(DE3)pLysS感受态细胞KM71H,KM71H酵母感受态细胞BLR(DE3)pLysS感受态细胞EHA101,EHA101农杆菌感受态细胞BL21-SI感受态细胞ER2566感受态细胞BL21-Gold(DE3)感受态细胞Tuner(DE3)，Tuner(DE3)感受态细胞BL21-AI感受态细胞TOP10F感受态细胞BL21(DE3)pLacI感受态细胞EHA101农杆菌感受态细胞BL21trxB(DE3)感受态细胞TG1感受态细胞BL21trxB(DE3)pLysS感受态细胞XL10-Gold感受态细胞Mach1-T1Phage Resistant感受态细胞农杆菌感受态细胞DH10bac(BmNPV)感受态细胞Stable感受态细胞BJ5183-AD-1感受态细胞F-DH5感受态细胞F-TOP10感受态细胞stable电击感受态细胞DH10B电击感受态细胞EPI400电击感受态细胞TG1电击感受态细胞BL21(DE3)pLysS感受态细胞CodonPlus感受态细胞BL21感受态细胞GV3101电击感受态细胞5EHA105电击/电转感受态细