禽白血病内源病毒ev21插入区和LTR的多态性研究.doc

蛐 面睁 雙 蜘嘤 蕖 藓 蚫宝 虫 垡 教授动 毖 型 擅堂 院 关 键词： 禽白血 病 ， 多 态 性， 转 录因 子 ， 表达 、 独 创性 声 明 第 一章文 献综述的 经 济损失， 禽白血 病 才 受到 养 禽业的 高 度 重 视， 同 时也 成为学 术界关 注 和研究的 热 点 。 中国 农 业大 学 硕士 学 位 论文第 一章文 献综述毒 类似的 方 式 传 播 ， 但 多数 鸡对 这 种 传 播 有 遗传 性 抵 抗力 籗 第 一章文 献综述中国 农 业大 学 硕士 学 位 论文构 基因的 缺失处 由 同 源性 较 低、 各式 各异 的 致 瘤基因所 取 代 。病 学 高 福等 译， ： 。 内 源性 病 毒 即整 合 于 宿主 细胞染 色 体中的 完整 或缺 口 搀 黔嚣 中国 农 业大 学 硕士 学 位 论文第 一章文 献综述 ； 订 ，龄时抗 体反 应阴 刚 性 差 异 显 著 ， 樟 湫 怪 城 皇米 蛹 觳釧性 ， 从 而 对 禽白血 病 的 净 化都是 不利 的 第 一章文 献综述区域进行调 控 元件结 合进行预测 恪甑妫鹤 笏 坎昀菪芾 鸢 继寐 远 榍 璺堡女 ， 以了解化， 以达到 对 禽白血 病 的 净 化目 的 ， 解决慢 羽 群的 选 育 问 题 。早 在 年 吞岢 隽 硕蕴 囟 侨 翰 鞠赴 剐缘 奈 侍 ， 基因位 于 号 染 色 体上， 序列 已 获得， 具 有的易感 模 式 。柚 市个亚 群病 毒 感 染， 允 许虳贬 群感 染， 砌 垌； 允 许以上三 种 病 第 一章文 献综述外 源性 白血 病 病 毒 的 检 测 技 术已 经 相 当 成熟， 但 内 源性 白血 病 的 检 测 仍 是 不易， 现 阶 段 方 法 中国 农 业大 学 硕士 学 位 论文第 一章文 献综述法 。 刘 公 平 等 根据 病 毒 囊 膜基因区 两 侧 的 保 守序列 的 酶切 为点 不一样 设 计 了引 物本 实验利 用中国 农 业大 学 动 物医 学 院自 行 研制 的 约 梁 卸 匀禾 宓 腁感 染 情况及 逆 行 第 一章文 献综述作 用。 中国农 业 大学硕士 学位 论文从 一 冰 箱 取 出冻 存 的 抗 凝 血 ，室 温 解 冻 或在 。 胖 觢 无水乙醇 沉淀 鞒鯠 沉淀 。 禾 澹 栏 伞 血 清 获得 加 样 湫詁 ； 籒 ， ， 痩 ；变 性和 非变 性聚 丙烯酰 胺 凝 胶电 泳 及硝 箍镊 染 色溶 液 的 配 制：效果 。 具 体配 制如 下 ：每板 非变 性胶配 制如 下 ： 尿素 琼脂 糖凝 胶的 制备 中国农 业 大学硕士 学位 论文第 二章 材 料与分 析逆转 录 前 病 毒 的 转录 是 由 藆噐 淖B荚 羰 ， 琫 、 就 是 由 于该 区 发 生 了 缺 失 而 无法 表 达的 琒 ， ； ， ， 髦 帜 谠 床 镜 腖 同 源 性非常高，一 般 都是 仅几 个 碱基 的 差等 人 瓸 表 达起 到 了 调控 作 用 。且能 够 满 足 大多 数 实验 要 求 的 灵 敏 度。 但 是 它 有 两 点不 足 之处： 闹 掳 饔 茫 需要 合 和 相 应 的 限制性内 切 酶反 应 撼 逡 ，再 加 入重蒸 水使 总体积为 ，将 管 内 溶 液 混 匀 敢海 檬 种 盖 岬 鼙 谑谷芤 夯煸 龋 部 捎 梦 坷 胄 幕 籉 ，使 溶 液 集 中在 管 底 。 中国农 业 大学颈士 学位 论文 基 因型 判定。上 。 凡 是 沾 污 了 的 容 器 或物 品 必 须经 专门 处理后才 能 清 洗或丢 弃 。 發 准 备 工作 ：由 于玻璃板 上 粘连 的 杂质 和 金属 离 子 会 影 响 凝 胶的 均 匀 度和 染 胶效果 ，所以 必 装 好灌 制凝 胶用 的 玻璃板 及垫片。 避 免 与胶面接 触 的 玻璃板 与手 或其它 物 品接 触 ： 可 预 先 将 垫片湿 润 或夹 好板 后用 少 量 水封 闭垫片和 玻璃板 闻 的 缝 隙 ；底 下 垫片调整到 方便根 据片段 配 制丙 烯酰 胺 凝 胶。倾 倒入玻璃板 夹 层 ，轻 击 玻璃板 ，使 气 泡跑 出，凝 胶均 匀 ，插上 梳 子 。 让凝 胶在 室 温 下 聚 合 ，夹板 、 预 电泳 ：拔 去 梳 子 和 底 下 垫片，将 凝 固 好的 胶板 去 掉 夹 子 ，用 水洗涤 加 样 孔 ，将 玻缓冲 液 冲 洗加 样 孔 ，最 好用 小 注 射 器 冲 洗，防 止 冲 断加 样 孔 。 电 压根 据片段 调整，时 间半 小 时 。加 样 ：染 色：装 入封 口袋 喊逋 暾 徒 好娓 删 。 常温 保存 ，进 行 多 态 分 析。 中国农 业 大学硕士 学位 论文检 测 回 收 效果 ，回 收 好的 目的 片断一 保存 ，准 备 送 测 。 ， ； 【 ， ； 妫 ； ， 妫 ；片段 大小 ：反 应 条 件 ： ； ， 瑃 ； ， ； ， 反 应 条 件 ； ， ； 妫 ； ， ； ， 妫 中国农 业 太 学硕士 学位 论文第 二章 材 料与分 析 物 名 称 ， ： 妫 ： 妫 ： ， ： 妫 ： 妫 ；拆 分 玻璃平 板 ： 克 隆 分 四步 ，一 为 连 接 、 二为 倒平 板 、 三 为 涂板 、 四为 转化。 具 体如 下 ； 连 接 反 应 体系 本试验 采 用 轉 一 靥 均 匀 涂在 培养基 上 ，涂板 时 注 中国农 业 大学硕士 学位 论文实 验群体 背景 检 测 结 果表 备 周 龄阳 性 个体 的阴 阳 性 检 测 结 果表 各周 检 测 出 阳 性 个体 数数 董 中菖农 业 大学硕士 学位 论文 图 酶 切后， 发现没有 相 应的酶 切位 点。 宋5暮 褪 约恋 仁 匝橐蛩 匾雅懦 表 对照 组 和 实 验组 的孵 化 指 标 对比 中国农 业 大学硕士 学位 论文其 它 含 死 亡 决 定区蛋 白 相 互 作 用， 诱 导 级 联 式 反 应， 导 致细 胞 凋亡 。 ， ； ； 籔 ， 侄 詅 曲 基 因 的进行 多态 性 分析 ， 结 果如 图 。 中国农 业 大学顶士 学位 论文 闲形 褐P蛄 校 滦形 P路 侄 嗵 醋痔逦M 槐 浼 罨 碧逦P鲁 鱿值目 赡艿 淖B家 蜃 咏 崽 坏表 亲本各基 囡 型个体 的频 率 的轴向 发 育 起 决 定作 用 ， 、 插 入 检 测 结 果和 分析表 “ 、 、 插 入 情况 分析 外 ， 为 减少 水平 传播的影 响 ， 对继 续 使 用的个体 在 周 龄有 必要进行 一 次阴 阳 性 检 测 。可 能的转录 调 控方 式 分析 衔 # 梢匀 衔 O 赴 俣 囊种 埔 蜃 泳驮 诓 迦 胛 坏闵 嫌 蔚 4 餖 丛 鉩 郧荡 泽 蝦 ， ； 海 痺 ， 悍 治 覣 覩 一 一 一 一 一 玞 灰弧 弧 玞 一 一 一 中国农 业 大学硬士 学位 论文第 三章 结 果与分析 一 一 一 弧 灰灰籆 ， 腖 进行 比对发 现， 位 插 ， 形 成 一 个 海 坏腁 峨 一 砒 从 馛 调 。 由于 上 述 比对区段的多 岷 衔 坏悖 谂 咛 缙 谔 乇 鹗 侨敕 醯 到 调 控作 用 籆 。 实 验证 明 梢酝 隣 结 合 位 点结 合 ， 籖 瓾 ， 鳫， 有 人推 测 图 ， 多态 图 。和 凝 胶电 泳最 佳 分辨率 后， 在所 有 能分辨条带 中大部分的区段洌 蚨 疾 怀晒 蚩 赡苁 荄 链的扭 曲 与旋 转在录 制 信 号 时产 生 太 多干扰： 引物 含 量等 问 题 。 故将不同 条带 直 接确 认为 一种 基 因 型。虽 然越 来 越 多的事 实 证 明 有 高 的灵敏度 ， 但 在通 常 条件下 ， 有 些 突 变 可 能不能被下 图 为 插 入 片 段和 连接区域的模 式 图 。 牟迦 朐斐 苫 虻 纳瘫 泶 中国农 业 大学硕士 学位 论文从 着 手 。 发 现 有调 控 相 关位 点 不 同 ，从 而对 的 插 入 引 起 的 效 应 进行 推 测。组织病 变 的 特 异 性 进行 了 初步的 推 测。 不 足在 于 没 有对 各 期 的 特 定 调 控 因 子 的 含 量 变 化 进行 分析 ，给 出 佐 证 ，也 没 有转 录 因 子 特 定 时间 与 特 定 结合 位 点 结合 的 直 接证 据 所 以 本研究 还 有待 于进一步深 化 。 中国农 业 大学硕士 学位 论文参 考 文 献 禽 病学 ， 北京 ： 中国农 业 出 版社 甎 瓵 ， ： 琑 皌 瓹 ， 琋 琂 ， ， ， ， ， 籚 ， 参 考 文 献 ， ， 瓵 ： ， ， ： ， ， 甀 参 考 文 献 篴 甃 ， ， ， ， 参 考 文 献 璈 瓺 珼 琣 琂 琈 ， ， 中国农 业 大学硕士 学位 论文参 考 文 献 琘 琒 ， 甁 瓻 ， ， ， 瓻 ， ， 琫 ： 琘 ， 珿 ： 甁 甁 甁 甁 甁 甐 ： ， 甕 瓵 饧 仪 菘 煅 叮 堆 萦 肭 莶 乐 巍 罚 甑 期 饨 翥 怯 癖耄 烂 竦龋 砟 谠 葱 苑 醋B疾 端 非编 码 区的克隆及结 构分 析 ， 中国病 庵 倌 希 芟蚓 跤 老 椋 珼 甲 基 化与肿瘤诊 断 ， 中国临床药 理 学与治 疗学区甲 基 化及 表 达