抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养及计数实验报告 许佳泉.doc

北京大学附属中学选修1实验报告实验1抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养及计数姓名 班级实验原理如何进行分离、培养和计数1实验需要制备并使用选择培养基：选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。2分离单克隆菌落采用平板划线法，其原理如下：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落。3使用LB液体培养基并放置在恒温培养箱中培养单克隆菌落以达到扩大培养的目的。4稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液（105,106,107）分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。5用无菌水稀释菌液：取一毫升液体培养基基液加入一瓶含有9ml的无菌水中，震荡使液体充分扩散。取震荡后溶液中的1ml液体加入另一瓶无菌水中，震荡，重复此步操作，进行梯度稀释，每一步浓度稀释到之前的十分之一。6计数时，选择未污染的培养基计数。使用记号笔在培养基表面标记，并使用计数器计数菌落个数。实验目的1掌握选择培养基的使用方法；2掌握使用液体培养基扩大培养；3练习使用平板划线法分离单克隆菌落；4练习使用平板涂布法计数；5实践无菌操作技术。实验材料和药品待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB固体培养基、LB液体培养基、接种环、玻璃三角刮刀、培养皿、恒温培养箱、摇床、超净工作台、酒精灯、9ml无菌水、移液枪实验步骤（用简单的流程图表示）实验数据（划线平板的照片、扩大培养的照片、平板涂布计数照片及表格等）平板划线后培养所得单克隆聚落数量只有一个。在平板涂布的九个平板中有7个污染较为严重，一个轻度污染，一个未污染。其中轻度污染的稀释浓度为106，菌落个数：84个；未污染的稀释浓度为105，菌落个数：559个实验结果及讨论平板划线操作错误讨论：第一次划线过于用力使得培养基破裂严重，接种环经酒精灯灼烧后冷却时间太短，余温烧死了部分菌液中的细菌。对污染严重原因的讨论：涂布平板操作时与酒精灯火焰距离不够近，没有起到高温杀菌的作用，使得杂菌侵入。抗氨苄青霉素大肠杆菌的分离、培养和计数实验评价标准个人参与参考标准分值维度1：解题参与报告中有充足证据体现了该学生在实验的执行、交流等环节的高度参与。10报告中有一些证据体现了该学生在实验的执行、交流等环节的参与。5报告中没有证据体现该学生在实验的执行、交流等环节的参与。0项目执行参考标准分值维度1：完成度项目得到充分执行（可根据实际情况做出合理调整）；10项目计划基本执行完毕；5项目计划未得到有效开展；0维度2：真实性留存全部可靠的原始数据记录及工作记录；10原始数据记录或工作记录稍有遗漏；5无原始数据、工作记录，或严重遗漏。（出现此情况，项目执行0分）0维度3：数据全面性收集了足够全面的数据以解决提出的问题；10收集的数据能够解决提出的大部分问题；5收集的数据基本不能解决问题；0维度4：数据信效度对数据做了合理充分的分析；10对数据做了一些分析；5未对数据做分析。0维度5：安全性、规划合理实验操作安全、规范，安排有条理、效率高。10实验操作安全、规范。5实验操作存在安全隐患。（出现此情况，项目执行0分）0分析反思参考标准分值维度1：分析数据，得出结论明确处理、分析所得数据，得出能够解决所研究问题的结论；10处理、分析所得数据，得出能够部分解决所研究问题的结论；5处理、分析数据不当，导致结论存在明显科学性错误；0维度2：结论所得结论描述清晰，有可靠的数据支持，很好的解决了问题；10所得结论存在一些漏洞，但是能够基本解决问题；5所得结论与所研究问题无关，或存在明显科学性错误。0交流参考标准分值维度1：完整性项目成果结构清晰，内容完整，对研究的问题、原理、执行过程、分析过程、结论、反思等内容表达清楚；10项目成果内容完整，对项目的问题、原理、设计、执行、分析、反思等内容都有表达；5项目成果内容不完整，或表达不清。0维