妇科止带片药品质量标准提高研究.doc

妇科止带片药品质量标准提高研究作者：王佳波单位：王佳波哈尔滨天地药业有限公司(158023) 左志如哈药集团医药有限公司药品分公司【摘要】 目的：提高妇科止带片质量标准。方法：采用理化方法鉴别方中山药、阿胶及龟甲，取消了专属性较差的黄柏中的盐酸小檗碱、五味子中柠檬酸的理化鉴别，增加了专属性较强的五味子薄层色谱法检识，采用高效液相色谱法检测方中君药黄柏有效成分盐酸小檗碱的含量。 结果：薄层色谱法鉴别五味子，斑点清晰，无干扰;盐酸小檗碱含量测定线性关系良好，重现性、精密度、稳定性良好，加样回收率平均100.8%、RSD1.7%。结论：提高后方法更有利于妇科止带片的质量控制。 【关键词】 妇科止带片;盐酸小檗碱;五味子;薄层层析法;高效液相色谱法 Study on Improving Quality Standards of Fukezhidai TabletsWang Jiabo，et alHarbin Tiandi Parmaceutical Co.，LtdAbstract：Objective：To improve the quality standards of Fukezhidai tablets.Methods：The physical and chemical methods that can identify the yam，donkey-hide gelatin and shells of the compatibility had replaced those of the poor specificity of berberine hydrochloride in Huangbai and the citric acid in schisandrin;the specific TLC of schisandrin had been added and the HPLC detection of compatibility active ingredient berberine hydrochloride of drug-jun Huangbai had been used.Results：The identification of TLC of schisandrin was clear;the determination of berberine hydrochloride was in good linear relationship and its reproducibility，precision，stability were good;the average recovery was 100.8% and RSD 1.7%.Conclusion：The method is more conducive to the quality control of Fukezhidai tablets than the former.Key words：Fukezhidai tablets;Berberine;schisandrin;TLC;HPLC妇科止带片是依据传统中医理论科学组方，经现代工艺提取其有效成份精制而成的纯中药制剂。妇科止带片对引起女性带下的女性生殖系统炎症有普遍的治疗作用，为治疗女性带下病的常用中成药。妇科止带片收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第一册第15页(标准编号：WS3-B-0077-89)。原标准的鉴别方法专属性较差，并且对君药黄柏的有效成分没有含量控制。为更有效地控制产品的内在质量，提高产品档次，保证临床疗效，笔者对其质量标准进行了进一步研究和提高，增加了方中佐使药五味子灵敏度和专属性较强的薄层层析鉴别，采用高效液相色谱法对君药的活性成分盐酸小檗碱进行了定量分析，经方法学验证，证明该含量测定方法精密度、重现性、稳定性均良好，从而为该药品建立了较科学完善的质量标准。1 仪器、对照品、供试品和试剂1.1 仪器日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，岛津SPD-10AVP检测器，浙大智达N2000双道色谱工作站，恒温水浴锅等。1.2 对照品盐酸小檗碱(批号713-200208，含量测定用)、五味子对照药材(批号：0922-9803)均由黑龙江省药品检验所提供。1.3 供试品妇科止带片生产商：广东一力药业有限公司生产，批号：060201。1.4 试剂硅胶G(青岛海洋化工厂)乙腈为色谱纯，其他所有试剂均为AR级。1.5 色谱条件与系统适用性试验色谱柱，汉邦ODS柱(5μm，250mm×4.6mm);流动相：乙晴-0.02mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调pH为3.0)(30：70);流速：1.0ml/min;检测波长：347nm;柱温：室温。2 鉴别试验(定性分析)2.1 保留的原标准鉴别项2.1.1 取本品4片，研细，加乙醇10ml，回流10分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加1%盐酸溶解5ml使溶解，滤过，取滤液2ml，加漂白粉少许，振摇，显樱红色。鉴别(1)为检查处方中黄柏而定，盐酸小檗碱酸性水溶液中加入漂白粉，溶液即显樱红色。经研究阴性有干扰，专属性差，取消该理化鉴别项。2.1.2 取本品2片，研细，加水10ml，振摇10分钟，滤过，滤液加氢氧化钠试液调节至中性。取溶液2ml，加硫酸汞试液1滴，加热至沸，加高酸钾试液34滴，紫红色即消失。鉴别(2)为检查处方中五味子所含柠檬酸而设，该项理化反应为枸椽酸盐反应。经研究阴性有干扰，专属性差，取消该理化鉴别项。2.1.3 取本品4片，研细，加水10ml，振摇10分钟，滤过。取滤液2ml，加等量10%氢氧化钠溶液，充分振摇，滴加1%硫酸铜溶液 4滴，随加随振摇，于白色背景视察，溶液显灰紫色。鉴别(3)为检查处方中阿胶和龟甲所含蛋白质而设，该项理化反应是双缩脲反应(Biuret反应)。反应机理为：由于蛋白质分子中所含肽键(即酰氨基)，在碱性溶液中与硫酸铜生成下列化合物而呈紫红色(但因在此溶液中其它药味干扰而呈灰紫色)。(NH2-C-N-C-NH2)2•2KOH•Cu(OH)2OHO经研究阴性干扰较小并找不到更适合的方法，因此保留该鉴别项。2.1.4 取本品6片，研细，加甲醇15ml，回流15分钟，趁热滤过，取滤液 1ml，置水浴上蒸干，残渣加冰醋酸1ml使溶解，再加醋酐-硫酸溶液(19：1)1ml，溶液由黄绿色迅速变污绿色。鉴别(4)为检查处方中山药所含甾体类化合物而定，该项理化反应是Liebermann-Burchard反应(即醋酐-浓硫酸反应)，经研究阴性无明显干扰，因而保留该鉴别项目。2.2 增加的定性鉴别项目鉴别(5)为标准中新增的鉴别项目，系处方中五味子的TLC法鉴别，以五味子对照药材制备阳性对照药材溶液，另按处方比例和制法去除五味子制得阴性对照液，与供试品按TLC法对比检识，结果表明，在供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性液色谱中无此斑点，重现性好，专属性强，故列入标准鉴别项。我们对市售的妇科止带片(广东一力药业有限公司生产，批号：060201)按本标准5项定性鉴别方法进行了试验，结果均为阳性。3 含量测定3.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml中含盐酸小檗碱40μg的溶液，作为对照品溶液，即得。3.2 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，取粉末约1.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加盐酸-甲醇(1：100)至近刻度，60水浴上加热15分钟，超声处理(功率100w，频率100Hz)30分钟，室温放置过夜，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液10ml，上中性氧化铝净化柱(8g氧化铝，95%甲醇湿法装柱，φ1.5cm)，用80ml 95%甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解，并定量转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。3.3 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算，即得。3.4 流动相条件选择流动相pH值的选择：参照有关文献1，在固定乙腈-0.02mol磷酸二氢钾的条件下，对pH值从2.56.0进行了选择，确定pH值为3.0分离度、理论板数最佳，且峰形好。3.5 测定波长的选择制备供试品溶液，用紫外分光光度法测定其紫外吸收光谱，试验结果表明，盐酸小檗碱在347nm处有最大吸收，故选择347nm作为检测波长。3.6 方法学考查3.6.1 专属性按“含量测定”法制备盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液、黄柏阴性对照溶液。精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液、黄柏阴性对照溶液、供试品溶液各10μl，依次注入液相色谱仪，测定，结果表明：在与盐酸小檗碱对照品相应的保留时间上，供试品溶液出现吸收峰，而黄柏阴性对照品溶液则无吸收峰，即阴性对照溶液中不含盐酸小檗碱，说明本方法检测盐酸小檗碱具有专属性。3.6.2 线性关系的考查按“含量测定”方法制备0.04mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液，依次注入液相色谱仪，测定。以x为横坐标，y为纵坐标，绘制标准曲线。(x代表对照品溶液进样量(μl)，y代表盐酸小檗碱峰面积)，进行一元线性回归分析。结果见表1。表1 线性关系试验结果线性范围：在0.16μg0.80μg范围内线性关系良好。3.6.3 回收率精密称取已知含量的样品(含量1.12mg/片，平均片重0.3768g)细粉3份，分别加入盐酸小檗碱对照品1mg，按“含量测定”方法制备3份不同浓度的供试品溶液，各测定3次，平均回收率为100.8%，RSD为1.7%，表明准确度良好，结果见表2。表2 回收率试验结果3.6.4 中间精密度试验取同一批号的样品，由3名分析人员在不同时间按“含量测定”方法各测定3次，测得其含量平均值为1.13mg/片，RSD为0.9%，表明中间精密度良好。结果见表3。表3 中间精密度试验结果3.6.5 重复性试验在相同条件下，取同一批号样品，由同一个人按正文【含量测定】项制备3份不同浓度的供试品溶液，各测定3次，测得其含量平均值为1.13mg/片，RSD为0.2%，表明重复性较好。结果见表4。表4 重复性试验结果3.6.6 稳定性试验取本品，按“含量测定”方法制备供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、24h精密吸取供试品溶液10μl，依次注入液相色谱仪，测定，测得其含量平均值为1.13mg/片，RSD为0.2%。说明供试品溶液在24小时内基本稳定。结果见表5。表5 稳定性试验结果3.6.7 样品含量测定按“含量测定”方法测定了十批样品，其结果见表6。表6 样品含量测定结果根据上表试验结果，测定盐酸小檗碱平均含量为1.12mg/片，均值下降20%为0.90 mg/片，故规定本品每片含盐酸小檗碱不得低于0.90mg/片。4 讨论4.1 拟对方中椿皮进行TLC法定性鉴别，因无对照药材和对照品，而无法进行定性试验。4.2 妇科止带片是复方制剂，黄柏是方中君药，测定其活性成分盐酸小檗碱(C20H17NO4•HCL)以控制产品质量和疗效是很有意义的。4.3 盐酸小檗碱(C20H17NO4•HCL)含量测定方法中采用中性氧化铝柱脱除杂质，有助