木瓜酶酶活力测定方法在实际生产中的适用性.doc

木瓜酶酶活力测定方法在实际生产中的适用性【关键词】 木瓜酶;酶活力摘 要 目的：考察木瓜酶酶活力测定方法在实际生产中的适用性。方法：采用空白颗粒直接压片法生产木瓜酶片；分别采用国家药品标准中木瓜酶及片剂的效价测定方法进行酶活力测定。结果：两种方法测得木瓜酶的酶活力结果（C1、C2）相对误差达1倍左右；按C1值投料，投料结果与理论值的相对误差约为50%；而按C2值投料，投料结果与理论值的相对误差可控制在10%以内。结论：木瓜酶酶活力的效价测定方法用于指导制剂生产，其适用性尚值得探讨。关键词 木瓜酶;酶活力;适用性木瓜酶是从木瓜中提取的天然植物蛋白酶，是一种蛋白水解酶，具有极强的生物活性和蛋白质分解能力。在医药卫生等行业有广泛的用途。临床上用于治疗慢性支气管炎，有祛痰、消炎等作用1。现行的木瓜酶及木瓜酶肠溶片质量标准规定了木瓜酶 国家药品标准：WS-10001-(HD-0796)-2002及其片剂国家药品标准(试行)：WS-10001-(HD-1212)-2002的酶活力测定方法。然而实际制剂生产过程中，执行以上质量标准所测得的木瓜酶活力的结果与理论值相比相差较大，特别是木瓜酶质量标准中酶活力测定的方法，依据其测定的结果易误导实际生产投料的准确性。本文分别采用木瓜酶及其片剂的效价测定方法对同一木瓜酶批次原料进行了酶活力测定，比较不同的方法对木瓜酶酶活力测定结果的影响及对制剂生产结果的影响，以探讨现行国家标准中木瓜酶酶活力测定方法在实际生产中的适用性。1 仪器与试药1.1 仪器 UV-1206型紫外分光光度计（日本岛津）,HH-W型恒温水浴槽（江苏金坛市医疗仪器厂）,GHL-200型高效混合制粒机（上海远东制药机械总厂）,V型混合机（南京鑫长江制药设备有限公司）。1.2 试剂 酪蛋白和酪氨酸对照品（中国生物制品检定所）、其他所用试剂均为分析纯。1.3 药品 木瓜酶原料:批号030913、031001,广西邕宁县蒲庙镇木瓜酶厂生产；批号030701,广西西宁悦丰天然生物工程有限公司生产；批号030108,海南美罗生物制药有限公司生产。1.4 辅料 蔗糖粉(儋州市那大糖业有限公司生产),淀粉(河北省廊坊市淀粉厂生产),糊精(河北省廊坊市淀粉厂生产),羟丙纤维素(湖州展望化学药业有限公司生产)。2 方法与结果2.1 木瓜酶酶活力测定方法22.1.1 对照品溶液的制备 精密称取已在105 干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用0.1 mol/L盐酸溶液配成每1 mL中约含40 g酪氨酸的溶液。2.1.2 供试品溶液的制备 取木瓜酶原料适量（约相当于木瓜酶活力120万单位），精密称定，加酶稀释液振摇，配成每1 mL中含200300单位的溶液，摇匀。2.1.3 测定方法 分别精密量取酪蛋白溶液5 mL，置3支具塞试管中，置40 水浴中保温10 min，各精密加入供试品溶液2 mL，摇匀，置40 水浴中，开始记时，准确反应1 h，立即精密加入三氯醋酸溶液5 mL，用力振摇混匀，置40 水浴中放置3040 min，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。精密量取酪蛋白溶液5 mL置另1支具塞试管，于40 水浴中保温1 h，精密加入三氯醋酸溶液5 mL，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2 mL，置40 水浴中放置3040 min，滤过，滤液作为空白溶液。采用分光光度法（中国药典2000年版二部附录 A），以0.1 mol/L盐酸溶液为空白，在275 nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算效价即得（所用酪蛋白溶液、酶稀释液、三氯醋酸溶液的配制按木瓜酶质量标准2收载的方法配制）。效价（单位/mg）=A AsCs 12 2稀释倍数/mA:供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度；As:酪氨酸对照品溶液的吸收度；Cs(g/mL):酪氨酸对照品溶液的浓度；m(mg):供试品质量。在上述条件下，释放1 g的酪氨酸的酶量为一个活力单位。2.2 木瓜酶片酶活力测定方法3供试品溶液的制备：取供试品5片（原料取适量，精密称量），研碎加少量酶释液研磨2 min后转移到100 mL量瓶中，加酶稀释液至刻度，振摇混匀后静置，精密量取上清液适量，加酶稀释液至每1 mL中含木瓜酶200300单位的溶液，照木瓜酶效价项下的方法（沉淀剂改为30%三氯醋酸溶液，其他不变）测定。2.3 不同的测定方法对木瓜酶酶活力的影响按“2.1”、“2.2”的方法对各批木瓜酶原料进行酶活力测定，计算效价分别为C1、C2，结果见表1。表1 不同的测定方法对木瓜酶酶活力的影响（略）木瓜酶酶活力测定方法在实际生产中的适用性从表1结果比较可见，两种方法测得的酶活力结果的相对误差达1倍左右。2.4 木瓜酶酶活力不同方法的测定结果对木瓜酶片生产投料结果的影响2.4.1 木瓜酶片的制备 为避免温度对酶活力的杀伤作用，本工艺采用空白颗粒直接压片法制片。空白颗粒的制备：按淀粉羟丙纤维素糊精糖粉=1961212的比例，湿法制粒、烘干整粒即得。木瓜酶片的制备：按木瓜酶空白颗粒硬脂酸镁=40391的比例投料，将物料置V型混合机中混合均匀后压片即得，并计算理论效价，结果见表2。2.4.2 木瓜酶片酶活力的测定 木瓜酶片酶活力的测定按“2.2”项下方法测定，结果见表2。2.4.3 木瓜酶酶活力不同测定方法的测定结果对木瓜酶片酶活力的影响，见表2。表2 不同测定方法测定木瓜酶酶活力对木瓜酶片酶活力的影响（略） 从表2结果可见，按C1值投料，投料结果与理论值的相对误差约为50%，而按C2值投料，投料结果与理论值的相对误差可控制在10%以内。3 讨 论3.1 两种测定方法的比较 片剂方法中除增加了一个加液研磨的操作及改变沉淀剂外，其他与木瓜酶原料的测定方法相同。表1结果表明，用此两种方法对木瓜酶酶活力进行测定结果相对误差较大，表2结果则表明，根据片剂的方法测得的木瓜酶的酶活力投料，生产结果与理论值更接近。3.2 方法的适用性 药品原料的各项质量指标在药品制剂的生产过程中起着质量监控的正确指导作用。一个正确的数据，在经过一个质量保证的生产过程后，生产结果与理论值偏离往往不超过百分之几4。但在木瓜酶肠溶片的生产过程中，表2结果已表明，如根据现行的木瓜酶质量标准中酶活力测定方法所测得的结果投料，生产结果与理论值偏离50%左右，意味着生产投料后，所得的产品将是不合格的，由此表明木瓜酶酶活力的效价测定方法用于指导制剂生产，其适用性尚值得探讨。参考文献1罗远秀. 木瓜酶活力测定方法的研究J. 中国药学杂志， 2000，35(8)：556.2WS-10001-(HD-0796)-2002.