易泰溶菌酶简介.doc

新型抗菌抗病毒免疫增强剂 兽药增效剂溶菌酶改革开放以来，我国标准化、规模化、集约化养殖业的发展速度迅猛异常，举世瞩目。但是，多数养殖场设施环境、饲养管理和防控技术相对滞后，加之生物源性、饲料源性和药物源性带来的难以控制的病原污染，尤其是大量抗生素和化学合成药物添加剂的滥用，导致耐药以及交叉耐药菌株、超级细菌和病毒变种产生，新旧传染病的爆发变得频繁，交叉感染、混合感染、继发感染等严重摧残养殖业，使疾病防控成为制约养殖业发展的最关键要素。由于片面追求经济效益，养殖动物被极限地促进生产性能，本来就非常脆弱的免疫系统超负荷运转，免疫应答功能低下，免疫麻痹十分普遍，超剂量疫苗接种也难以收到预期效果，造成畜禽多源侵染、多病缠绕、多发灾难，养殖风险持续走高，不仅难以获得理想的养殖效益，而且造成畜禽产品品质下降和严重的食品安全问题。面对严峻的行业局面，健康养殖的理念被史无前例地重视，生态养殖备受推崇。人们清楚地认识到，对于免疫力低下的畜禽，再好的营养和管理也难以获得良好的生长性能，同时，任何可以产生流行因素的病原攻击下都可以导致大面积发病并损失惨重。采用高科技生物技术手段，保障养殖动物正常的生理机能，真正从养殖动物自身健康这个根本点出发，重构养殖群体的非特异性免疫屏障，是当前畜牧业持续高效发展的必由之路。首倡修复动物免疫系统，提高养殖动物免疫力，推进绿色健康养殖，开发出新型抗菌抗病毒免疫增强类产品-易泰溶菌酶，成为新型功能性绿色添加剂的引领者。溶菌酶简介一、溶菌酶的种类1922年，英国细菌学家AFleming发现人的唾液、眼泪中存在溶解细菌细胞壁的酶，命名为溶菌酶（lysozyme）。此后，在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在。随着研究的不断深入，人们对于溶菌酶的分离提取、酶活检测、作用机制和生产应用等有了更进一步的了解。其中最常见的是c型、g型以及噬菌体溶菌酶，牛体内的溶菌酶有多种，表达的潜在位点有：乳腺、唾液、泪液、胃、气管组织以及中性粒细胞、巨噬细胞、白细胞等，其中牛乳溶菌酶属于c型。六十年代以来，溶菌酶广泛应用在食品、日化、医药、保健、保鲜等领域，体现出药理、保健、防腐三大功能；近年来，溶菌酶的抗菌抗病毒功能和免疫增强作用在畜牧生产领域得到认可并广泛运用。溶菌酶属于一种基因克隆酶，是将来源于健康动物体内的溶菌酶利用分子生物学技术进行基因重组，筛选优良菌种，通过生物发酵和先进提取工艺产生的一种水溶性溶菌（杀菌）蛋白酶，效价高于蛋清提取溶菌酶50100倍。二、溶菌酶的特点1、溶菌酶纯品为白色或者微白色结晶形或无定形粉末，无臭，味甜，易溶于水，不溶于丙酮、乙醚。2、溶菌酶作用的适宜温度在3550，最适温度37；溶菌酶适宜pH5.37.4，最适pH6.8，其水溶液在pH1.211.3之间是稳定的，不易被胃酸破坏。3、溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复。4、溶菌酶具有较强热稳定性，是已知最耐热的酶，在pH47时100条件下处理1分钟酶活仍然保持90%以上。在20.5的乙醇中，在62.5下维持20min而不失活。同时，溶菌酶可被冷冻或干燥处理，且活力稳定。5、经过修饰的溶菌酶（易泰微生物溶菌酶）的抗菌谱较广，不仅对G+ 菌效果突出，对部分G-菌也有较好的抑杀作用，尤其对耐药菌效果更明显。6、溶菌酶是一种天然蛋白质，无毒、无害、无残留、无耐药性，生物安全性高。符合绿色、安全、健康、环保的要求。1992年FAO/WTO 的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。7、溶菌酶与抗生素配伍使用能增效210倍，减少抗生素用量，有效控制药残。8、溶菌酶是双歧杆菌等有益菌增殖因子。三、溶菌酶活性测定目前，国内外对溶菌酶活性的测定方法，主要有比浊法、紫外分光光度法、比色测定法、琼脂火箭糖电泳法和高效液相色谱法等，但上述各种方法中均存在一定的缺点，如比浊法干扰因素多，重复性差，对单个样品测定速度快；比色法操作简单但误差较大。因此，各种方法都在不停改进中。 传统方法测定溶菌酶活性时要将溶壁微球菌制成冻干粉，此过程不仅步骤烦琐而且易造成细菌大量死亡，影响结果。赵玉萍等向溶壁微球菌直接加保护剂(20的甘油)置于普通冰箱冷冻，使用时解冻，读第1min的吸光度值和第2min的吸光度值即可。使溶菌酶的测定方法更加节约高效，准确性又好。同样，李德海等也采取了类似的方法。而苍金荣等采用聚苯乙烯微量反应板，建立了微量快速比浊检测溶菌酶的方法，使标本用量减少，反应时间缩短，灵敏度较好。近年来，许多报道采用标记乙二醇化几丁和0.1molL、pH4.5的醋酸醋酸钠缓冲溶液作底物，在600nm下来测定吸光度变化的简便方法，也取得了很好的效果。四、溶菌酶的主要功能1、抗菌消炎作为非特异性免疫的重要成员，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面发挥着重要的作用，其在动物的免疫细胞和巨噬细胞中含量比较高。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，在渗透压作用下导致G+菌细胞壁破裂内容物逸出而使细菌死亡；在体内环境下，由于有分泌型lgA、补体等参与，溶菌酶还能水解某些G-菌；溶菌酶可与各种诱发炎症的酸性物质结合，使其失活，并能增强其它药物的疗效，改善组织基质的粘多糖代谢；提高内源性蛋白酶活性，促使抗菌多肽的产生；结合细菌脂多糖，减轻内毒素作用，对冬春易发的感染性疾病特别有效。溶菌酶对革兰氏阳性菌、好气性孢子形成的菌、枯草杆菌、耐辐射微球菌均具有良好的分解作用，对大肠杆菌、普通变球菌和副血性弧菌等革兰氏阴性菌也具有溶解作用。因此，溶菌酶能够达到抗菌消炎、祛病强体、促进生长的目的。2、抗病毒 溶菌酶能激活宿主的免疫系统，增强肿瘤细胞的免疫原性，从而具有抗肿瘤作用；溶菌酶是一种碱性蛋白质，在体内近于中性的pH环境下带有大量的正电荷，可与带负电荷的病毒蛋白直接作用，和DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使侵入体内的病毒失活；在被疱疹病毒感染的Hela细胞培养液中，加入溶菌酶后有抑制细胞的变性作用；溶菌酶可以抑制流感病毒和腺病毒生长，阻止疱疹病毒感染，可用于带状疱疹、腮腺炎、鸡水痘、肝炎及流感等病毒性疾患的治疗。可以预防和治疗病毒性肝炎，解除肿瘤或抗肿瘤治疗引起的免疫抑制；澳大利亚科学家（2000年）发现A型流感病毒引起的呼吸道感染与溶菌酶有关，感染致使支气管中性粒细胞功能受损，溶菌酶分泌减少，抗菌活性降低，导致呼吸道病原感染而致病。纽约大学的一组科学家（1999年）发现溶菌酶具有强烈的抗艾滋病功能。3、增强免疫力溶菌酶作为机体非特异性免疫因子之一，参与机体多种免疫反应，在机体正常防御功能和非特异性免疫中，具有保持机体生理平衡的重要作用：能够加强血清灭菌蛋白(Properdin)、-球蛋白(-globulin)等体内防御因子对感染的抵抗力；促使细菌细胞裂解，刺激免疫系统，激发机体内吞噬细胞的噬菌作用；溶菌酶本身具有T细胞表位，能诱导2型(Th2)T辅助细胞反应，口服溶菌酶能诱导小鼠产生全身性的Th1 和Th2免疫反应，增强24倍免疫功能；能够减少外来抗原的刺激，降低动物免疫激活负荷，从而减少某些生长抑制因子的浓度和活性，促进分解代谢物质释放量的减少和合成激素活性的提高，增强抗病力和生产性能。4、调节肠道菌群平衡研究表明，健康动物体内的菌群是相对稳定的，个体菌群的差异性影响着个体生长性能的差异。溶菌酶可对肠道微生物进行直接或间接调控起作用。对肠道微生物进行直接的调控作用是降低肠道内有害微生物，促进有益微生物的生长繁殖，维护肠道菌群有效的动态平衡，降低机体维持和免疫应答对营养的需求；对肠道微生物的间接调控作用是降低免疫应答和亚临床疾病的发生，减少肠道的维持需要，降低霉菌毒素、氨、甲酚等有害物质对于机体免疫系统的损害，从而改善畜禽的生产性能。5、修复创伤组织溶菌酶还具有激活血小板的功能，可以改善局部组织血液循环障碍，分解脓液，修复创伤组织，增强局部防卫功能。溶菌酶作为一种新型抗菌抗病毒免疫增强剂，正在被更多的兽药组方师、饲料配方师和基层兽医人员认可使用，是作为畜禽、水产饲料添加剂在替代抗生素、控制耐药菌、增强免疫力、提高生产率、生产绿色安全食品的最佳选择；是作为抗生素增效剂、拓宽抗生素抗菌谱及效价、提高抗病毒能力和预防治疗混合感染的最新选择。五、溶菌酶抗菌谱溶菌酶对兽医临床常见且危害较大17种致病菌的抑菌效果：供试菌抑菌圈（cm）MIC50(g/ml)MIC90(g/ml)金黄色葡萄球菌210.0616.00无乳链球菌200.060.25乳房链球菌170.060.25停乳链球菌220.060.25大肠杆菌210.060.50化脓棒状杆菌140.060.60沙门氏菌180.060.25肺炎球菌200.060.35布氏杆菌150.060.80结核分枝杆菌170.060.45魏氏梭菌220.060.25肉毒梭菌200.080.35水肿梭菌180.060.25破伤风梭菌120.101.05气肿疽梭菌150.091.20多杀性巴氏杆菌240.060.25鼻疽杆菌160.060.50螺旋杆菌170.060.45注：MIC50表示50%的细菌被杀死的最小浓度，MIC90表示90%的细菌被杀死的最小浓度。溶菌酶对兽医临床中常见的三种有益菌（乳酸杆菌、双歧杆菌、蜡状芽孢杆菌）以48g/ml浓度抑菌，没有影响。七、溶菌酶临床效果比实验室效果好溶菌酶是生物体内重要的非特异性免疫因子，具有抗菌、抗病毒、增强免疫力和促进创伤组织修复等多重功能。从溶菌酶实际应用效果来看，往往要比实验室抑菌效果好很多。其主要原因是：溶菌酶具有良好的生物相容性，不但直接水解致病细菌细胞壁，而且和动物体内的其他多元生物物质联合作用，抑杀细菌，中和毒素，增强体质，促进生长；其次，动物机体内环境恰好满足溶菌酶的最佳作用条件。而在实验室里，还不具备理想的体现溶菌酶动物体内作用的模拟实验。八、溶菌酶与抗生素配伍的增效作用：1. 与氨基糖甙类联用，增效24倍；2. 与四环素类联用，增效13倍；3. 与-内酰胺类联用，增效28倍；4. 与大环内酯类联用，增效24倍；5. 与喹诺酮类联用，增效0.52倍。因此，溶菌酶可以提高抗生素治疗效果，消除抗生素免疫抑制！九、动物药业使用方法推荐溶菌酶（原粉，兽药级）：酶活单位500万u/g（每1g原粉可以拌料100kg，饮水150kg）。应用思路举例：1.新品上市，配伍使用：提高免疫，增效主药，加快康复，促进生产。一般地，西药粉剂中11.5%添加量，中药散剂中0.20.5%添加量。根据组方调整用量。2.产品升级，微调配方：使用溶菌酶代替作用不确切或者耐药性突出的抗生素组分和增效剂，几乎不增加配方成本，缓解耐药性，体现差异化。3.高端动保，绿色安全：精心设计绿色动保产品和功能性添加剂，为动物安全和食品安全保驾护航。例如，按照饲料添加剂的运作模式，推出新型抗菌抗病毒的绿色动保产品(以50万u/g制剂计，推荐使用量：全价料中，家畜100150g/t，家禽80100g/t)。4.特色分装，多效递增：配合解热镇痛，保肝利胆，特色组合，以兽药增效和免疫增强为突破，争取经销热情，