不同品种和剂量木通的肾损伤探讨.doc

探索性医学综合实验教学改革与实践（第三期）不同品种和剂量木通肾损伤的探讨董鑫 沈智杰 章程杰 赵玉良 陈晨 王乐杨指导老师：邹奎昌、 李靖、 朱龙英（上海中医药大学01级七年制临床医学方向，上海201203）摘要 目的：本实验主要研究木通的不同品种和不同剂量对肾损伤的影响。方法：雌雄各半的清洁级180200g大鼠50只，随机分成A组（正常对照组10只）、B组（正常剂量关木通组10只）、C组（正常剂量白木通组10只）、D组（大剂量关木通组 10只）E组（大剂量白木组10只）连续七天进行相应灌胃后股动脉取血进行血肌酐和血尿素氮的测定，并取肾制病理切片观察肾形态变化。结果：从病理切片上看，与正常组比较正常组白木通和关木通肾组织形态正常，大剂量白木通肾组织形态有少数改变，而大剂量关木通肾组织形态改变显著。结论：正常剂量的白木通和关木通对肾脏无损害，大剂量的使用可造成肾损伤，而关木通造成肾损伤比白木通要严重的多。关键词 大鼠 肾损伤 木通 木通作为药物使用在我国已有很长的历史,早在本经中就有记载,并被列为中品。目前所流通的木通品种主要为: (1) 关木通,马兜铃科植物木通马兜铃 (2) 川木通,毛茛科植物小木通,或绣球藤的藤茎。以上品种均被中国药典2000 年版(一部) 收载。唐新修本草、宋本草图经等历代本草所描述木通均为木通科植物,主要有: (1) 木通; (2) 三叶木通; (3) 白木通. 以上木通科的三种植物统称木通或白木通,为正品木通,并被中国药典2000年版2002 年增补本中收载。 综上所述，一味木通有三个不同的身份，木通科的木通（古称三叶木通）、毛茛科的川木通和马兜铃科的关木通都统称为木通。关木通别名：马木通、万年藤、淮木通。木通的化学成分关木通: 茎含马兜铃酸A、B、D , 马兜铃甙、马兜铃酸D 甲醚、木兰花碱、谷甾醇等。性味性寒，味苦。功能主治清心火，利小便，通经下乳。用于口舌生疮、心烦尿赤、水肿、热淋涩痛、白带、经闭乳少、湿热痹痛。白木通: 木通藤茎含木通皂甙,常春藤皂甙元, 齐墩果酸, 白桦脂醇, 豆甾醇,谷甾醇, 肌醇, 蔗糖及钾盐等。木通的剂量:木通的常用剂量是36克。大剂量一般为常用剂量的十二倍，即36-72克。随着当代医学对中药副作用的研究，人们都已经比较具体的认识到中药木通对人体肾脏的损害，国内外媒体也对有关病例作了很多报道。木通作为中医药中的一味常用药几千年来一直被广泛应用着，对于它的肾毒性的突然大量报道专家们也做了很多研究，他们认为原因有很多，比如，白木通被误用为关木通，用量不合标准，或小剂量木通被不当长期使用造成毒性积累等。木通的毒性强弱与很多因素有关，本实验旨在比较正常剂量木通和大剂量木通对大鼠肾损害的影响及白木通和关木通对大鼠的肾损害比较，考查木通毒性的影响因素。1 材料与方法1.1 动物及分组 雌雄各半的清洁级180200g大鼠50只，随机分成A组（正常对照组10只）、B组（正常剂量关木通组10只）、C组（正常剂量白木通组10只）、D组（大剂量关木通 10只）E组（大剂量白木通10只）分笼饲养，雌雄分离，每笼五只，每天自食普通颗粒饲料。1.2 实验器材1.2.1药物关木通与白木通水煎剂：取关木通600g，按中药常规水煎法提取两次，每次1h，过滤，合并滤液后浓缩成含生药量2g/ml和0.5g/ml两种浓度的溶液。白木通同样操作，放入冰箱备用。1.2.2仪器灌胃针 注射器 试管 煤气喷灯水浴箱（电热恒温水温箱）离心机（80-1离心沉淀器）分光光度计（722光栅分光光度计）血肌酐测定试剂盒 尿素氮测定试剂盒石蜡 二甲苯 无水乙醇 苏木精 盐酸乙醇 伊红 载玻片 盖玻片 广口瓶 滴管及配套吸头 烧杯 量筒 眼科镊子 手术刀 毛笔 玻璃棒 染色架 染色缸 组织切片机 展片箱1.2.3试剂福尔马林固定液苏木精染液 伊红染液1.3实验方法1.3.1 给药ABCD四组每天每用木通水煎剂给大鼠灌胃，连续给药7天。正常剂量组每天1ml，浓度0.5g/ml；大剂量组每天3ml，浓度2g/ml。灌胃量换算方法：6/60Kg*200*20，以大鼠质量为200g，木通正常剂量6g，标准体重60Kg换算。大剂量在原有基础之上乘以12倍 1.3.2 取材灌胃七天后，将大鼠股动脉取血，平均每只5ml，用于血肌酐和血尿素氮测量。处死大鼠，取同一侧肾置于固定液中，用于形态学观察。1.3.3 观察指标2.3.1血肌酐股动脉取血5ml离心，取血清0.2ml用血肌酐试剂盒测出各组血肌酐2.3.2尿素氮取血清0.05ml用血肌酐试剂盒测出各组血肌酐2.3.3 肾组织切片处死大鼠，将肾脏取出固定，脱水，浸蜡，包埋，切片，HE染色并对其进行形态学观察。2.4数据处理将ABCD四组大鼠的处理数据与正常大鼠作比较，实验数据采用均数标准误差表示，组间差异的显著性检验采用t检验。2实验结果2.1 五组大鼠肾形态的比较（照片）2.1.1正常组正常皮质（100倍）正常皮质（400倍）正常髓质（100倍）正常髓质（400倍）观察结果：正常组肾小球，肾小管完整，髓质清稀2.1.2正常剂量关木通组正常剂量关木通皮质（100倍）正常剂量关木通皮质（400倍）正常剂量关木通髓质（100倍）正常剂量关木通髓质（400倍）观察结果：肾小球，肾小管完整，髓质清稀，与正常组相近2.1.3正常剂量白木通组正常剂量白木通皮质（100倍）正常剂量白木通皮质（400倍）正常剂量白木通髓质（100倍）正常剂量白木通髓质（400倍）观察结果：肾小管完整，肾小球较完整，髓质清稀，与正常组相近2.1.4大剂量白木通组 大剂量关木通皮质（100倍）大剂量关木通皮质（400倍）大剂量关木通髓质（100倍）大剂量关木通髓质（400倍）观察结果：肾小球明显出血，肾小管破裂，增大，相互融合，皮质大量出血灶，肾损伤严重2.1.5大剂量白木通组 大剂量白木通皮质（100倍） 大剂量白木通皮质（400倍）大剂量白木通髓质（100倍）大剂量白木通髓质（400倍）观察结果：低倍镜下可见肾小管不连续，高倍镜下可见部分出血点，肾小管破裂，肾有部分损伤2.2大鼠血肌酐和血尿素氮比较2.2.1血尿素氮（单位：mmol/L）大白大关正白正关正常3.46.73.94.64.74.815.34.14.83.45.45.35.14.73.74.34.94.24.44.53.64.45.25.05.15.35.15.34.87.44.45.74.64.34.74.04.714.53.54.34.15.13.34.8测试结果：根据统计得出大剂量关木通组和正常剂量关木通组间的血尿素氮存在明显差异，同时，大剂量关木通与大剂量白木通之间也存在差异。具有统计学意义，其余各组间无明显差异。2.2.2血肌酐（单位umol/L）测试结果：在血肌酐的测量中，大剂量关木通组与正常组，大剂量关木通组与正常剂量关木通组均存在差异，具有统计学意义。3 讨论 近年来对木通导致肾功能损伤的报道层出不穷，以至于现在木通被列入禁用药物之列。纵观中医史，木通一直被作为常用的利尿通淋药而沿用。为何近日却成为了令人避而远之的肾脏杀手？有些学者认为是由于对木通的剂量的掌握不够，常导致大剂量使用所造成危害；还有人认为是将关木通误认为白木通而导致肾毒性。本次实验的目的就是通过对不同种类木通和不同剂量的木通对肾的损害程度的探讨，从而研究木通肾毒性的影响因素。通过实验我们看到，正常剂量的白木通和关木通组的肾形态基本正常，并无损害；大剂量白木通有少部分肾实质损伤；而大剂量关木通组肾损害显著。这说明以上两种说法均是造成木通肾毒的缘由，但是其中以剂量对木通肾毒的影响比较大。所以，虽然现在有关木通造成肾损伤的报道越来越多，但是将木通甚至连白木通一棒子打死的做法是不科学的，我们相信只要掌握好正确的用药剂量及品种，木通还是一味效果很好的良药。由于时间及设备的缘故，有些预想中的指标未能得到。但总体来说实验是成功的。