第五章-常用饲料原料的掺假识别

第五章 常用饲料原料的掺假识别植物性原料的掺假识别一、 豆粕的掺假识别豆粕主要掺假有：玉米粉、玉米胚芽粕、豆饼。识别方法如下：（一） 掺玉米粉的检查取碘0.3g、碘化钾1g溶于100ml水中，然后用吸管滴1滴水在载玻片上，用玻璃棒头沾取过20号筛的豆粕，放在载玻片上的水中展开，然后滴入1滴碘-碘化钾溶液，再显微镜下观察。纯豆粕的标准样品，可清楚的看到大小不同的棕色颗粒，含玉米粉的载玻片上，含有似棉花状的蓝色颗粒，随玉米粉含量的增加，蓝色颗粒增加，棕色颗粒减小。 标准样品的制备：取通过20号筛的纯豆粕0.95g、0.96 g、0.97 g、0.98 g、0.99 g，依次通过20号筛的玉米面0.05 g、0.04 g、0.03 g、0.02 g、0.01 g各自混匀，五种标准品分别含5%、4%、3%、2%、1%玉米的豆粕，按照上述步骤制成五个标准样片，以便半定量比较观察用。（二）掺玉米胚芽粕的检查豆粕中掺玉米胚芽粕可借助于显微镜进行检查。镜下观察豆粕可见豆粕皮，且豆粕皮外表面光滑，有光泽，并可见明显凹痕和针状小孔，内表面为白色多孔海绵状组织，并可观察到种脐，豆粕颗粒形状不规则，一般硬而脆，不透明，奶油色或黄褐色而玉米胚芽粕镜下观察具油腻感，黄棕色，同时可见玉米皮特征，玉米皮镜下薄并且半透明。所以，二者在镜下很容易区别。（三）掺豆饼碎的检查 豆粕中掺豆饼碎也可以借助于显微镜进行镜检。因豆粕与豆饼碎加工工艺不同，镜下状态不规则，一般硬而脆，子叶颗粒无光泽，不透明，奶油色或黄褐色，豆粕碎子叶因挤压成团，这种颗粒状团快质地粗糙，颜色外深内浅。二者感官也可以大致区分，豆粕一般为碎片状，而豆粕碎成团快，颜色比豆粕深/ 二、豆粕碎的掺假识别 豆粕碎掺假，目前仅限于玉米粉，具体检查方法可以见豆粕中掺玉米粉的检查。 三、菜子粕的掺假识别 菜子粕掺假主要掺杂一些低廉的原料，而且较重，如泥土、沙石等，具体检查方法如下： （一）感官检查 正常的菜子粕为黄色或浅褐色，具有浓厚的油香味，这种幽香味较特殊，其他原料不具备。同时菜子粕有一定的油光性，用手抓时，有蔬讼感觉。而搀假菜子粕油香味淡，颜色也暗淡，无油光性，用手抓时，感觉较沉。（二） 盐酸检查正常的菜籽粕加入适量的10%盐酸，没有气泡产生，面掺假的菜籽粕加入10%的盐酸，则有大量气泡产生。（三） 粗蛋白质的检查 正常的菜籽粕其蛋白含量一般都在33%以上，而掺假的菜籽粕其粗蛋白含量较低。（四） 四氯化碳检查 四氯化碳的比重为1.59，菜籽粕的比重比四氯化碳小，所以菜籽粕可以飘浮在四氯化碳表面。其方法是：取一梨形分液漏斗或小烧杯，加入5-10g菜籽粕，加入100ml四氯化碳，用玻璃棒搅拌一下，静置10-20分钟，菜籽粕应飘浮在四氯化碳表面，而矿砂、泥土等由于比重大，故下沉底部。将下沉的沉淀物分离开，放入已知重量的称量瓶中，然后将称量瓶连同下层物放入110烘箱中烘15分钟，取出置于干燥器中冷却、称重，算出粗略的土砂含量。正常的菜籽粕其土砂含量在1%以下，而掺假的菜籽粕其土砂含量高达5-15%以上。（五） 灰分检查正常的菜籽粕的粗灰分含量应14%，而掺假的菜籽粕其灰分含量高达20%以上。四、麦麸的掺假识别 麦麸主要掺杂一些石粉、贝粉、砂土、花生皮及稻糠等，识别方法如下：（一） 显微镜法将待检样品均匀放在玻片上，在15倍的实体显微镜一观察，如果视野里看小麦麸两面发白发亮，动多个视野都可看到，则认为掺有石粉。若视野中看到有长而硬没有白面的皮，有井字条纹，则认为有稻壳究掺入。掺入贝粉、沙土、花生皮均可通过显微镜观察，可依据前述这几种原料的显微特征。（二） 水浸法 此法对掺有贝粉、砂土、花年壳者较明显。方法是：取5-10g麸皮于小烧杯中，加入10ml的水搅拌，静置10分钟，将烧杯倾斜，若掺假则看到底面有贝粉、砂土，上面浮有花生壳。（三） 盐酸法 取试样少量于小烧杯中，加入10%的盐酸，若出现发泡，则说明掺有贝粉、石粉。（四） 成分分析法 麦麸粗蛋白一般在13%17%之间，粗灰分在6%以下，粗纤维低于10%，可依据此标准进行验证。五、 玉米蛋白粉的搀假识别（一）玉米蛋白粉搀假主要是尿素，掺尿素的检验方法如下：称取10g样品于烧杯中，加入100ml蒸馏水，搅拌、过滤，取滤液1ml于点滴板上，加入23滴尿素酶溶液，约经5分钟，如点滴板上呈深红色，则说明样品中掺有尿素。尿素溶液的配制 称取0.2g尿素酶溶解于100ml95%乙醇中。 甲基红指示剂的配制 称取甲基红0.1g，溶解于100ml乙醇溶液中。（二）在无尿素酶药品时，则可采用下列方法检测。取两份1.5g样品于两只试管中，其中一只加入少许黄豆粉、两管加蒸馏水5ml，振荡，置6070 恒温水浴箱水浴3分钟，滴67滴甲基红指示剂，若加黄豆粉的试管中出现较深紫红色，则说明玉米蛋白粉掺有尿素。六、酵母粉的搀假识别酵母粉掺假主要有非发酵产物、羽毛粉、血粉、皮革粉、无机氮、尿素等。识别方法如下：（一） 非发酵产物的检查取1g样品溶于99ml蒸馏水中，多次振荡，以血球记数板在显微镜下记数检验，结果与标准相符为纯发酵产物，否则为非发酵产物。（二） 掺羽毛粉、血粉、皮革粉的检查1.掺羽毛粉 用肉眼观察产品中有闪光亮点，在显微镜下观察可见羽毛管和羽毛轴，并且可见像松香样的半透明颗粒，如果掺入未水解完全的羽毛粉，可见外廓羽毛的羽轴大多有锯齿边。2.掺血粉的检查掺入血粉颜色偏黑，镜下进一步观察可见有黑色似沥青状的颗粒，边缘锐利，或者可见血红色晶亮的小珠，这二者均为掺入血粉，只是血粉的加工方法不同，镜下特征不一样。3.掺皮革粉的检查 掺入皮革粉显微镜下观察，可见绿色（含铬）、深褐色及专红色块状物或丝状物，像锯末似的，不像水解羽毛粉那样透明。 此外掺羽毛粉、血粉、皮革粉还可用物理法和化学法进行检查，请参照本章第二节动物原料中鱼粉掺假检查部分。（三）掺无机氮及尿素的检查掺无机氮（NH4）2SO4、NH4CL及尿素，目的在于补充产品中的氮量，以提高蛋白质含量。检验方法如下：1掺无机氮检查取样品5-10 g,溶于50ml蒸馏水中，滴加AgNO3溶液数滴，如有白色沉淀生成则产品中有氯离子存在，可能掺有NH4CL。如滴加BaCL2溶液，有白色沉淀生成，则产品中有硫酸根存在，可能掺有(NH4)2SO4。2掺尿素的检查可参见本章节中玉米蛋白粉掺尿素的检查。（四）柠檬黄染色一般固体发酵生产的产品中，因残留大量的培养基，所以原料的选用不仅影响产品质量，同时也决定产品的颜色。随着豆粕、鱼粉等蛋白原料的短缺，为了降低成本，许多厂家选用了棉籽粕、菜籽粕等到原料，但又要掩盖其较深（偏黑）的颜色，于是采取了两种方法，一是微粉碎；二是高剂量柠檬黄染色（在原料灭菌时加入），以使产品呈金黄色。检查方法：取样品10g左右，溶于50ml水中，多次振荡，1小时后观察上清液颜色，如颜色深则加染色剂。七、啤酒酵母的掺假识别啤酒酵母一般掺有豆粕、麦根、淀粉等，识别方法如下：（一） 水溶法无掺假之啤酒酵母可溶于水，取一个100ml烧杯，称取样品约5g，注入50ml蒸馏水，如果皆溶于水中，可判定为无掺假，否则为掺假。（二） 掺淀粉检查用碘-碘化钾法检查。方法是：取样品2-3 g置于烧杯中，加入2-3倍水后加热1分钟，冷却后滴加碘碘化钾溶液（取碘化钾5g, 溶于100ml水中，再加碘2g），若样品中掺有淀粉，则颜色变蓝，随掺入淀粉的增加，颜色由蓝变紫。（三） 掺豆粕的检查可用显微镜法，检查有无豆粕的掺入。如果镜下可见豆粕皮和豆粕颗粒特征，证明掺有豆粕。豆粕皮下外表光渭，有光泽，并可见明显凹陷和针状小孔，内表面为白色多孔海绵状组织，并可观察到种脐。豆粕颗粒形状不规则，一般硬而脆，不透明，奶油色或黄褐色。（四） 掺有麦根的检查可用显微镜检查法，如有麦根，可在镜下发现有大麦皮，大麦皮下为黄褐色，并有凸起的脉。 动物性原料的掺假识别一、 鱼粉的掺假识别鱼粉中常掺有菜籽粕、棉籽粕、羽毛粉、血粉、皮革粉、花生粕、芝麻粕、大豆粕、虾粉、蟹壳粉、贝壳粉、肉骨粉、尿素等，具体检查方法如下：（一） 感官检查法1. 视觉优质鱼粉颜色一致，呈红棕色、黄褐色或黄棕色等。细度均匀。劣质鱼粉为浅黄色、青白色或黑褐色，细度和均匀度较差。掺假鱼粉为黄白色或红黄色，细度和均匀度差。掺入风化土鱼粉色泽偏黄。2. 嗅觉优质鱼粉是咸腥味；劣质鱼粉为腥臭或腐臭味；掺假鱼粉有淡腥味、油脂味或氨味等异味。掺有棉籽粕和菜籽粕的鱼粉，有棉籽粕和菜籽粕味，掺有尿素的鱼粉，略具氨味，掺入油渣的鱼粉有油脂味。3. 触觉优质鱼粉手捻质地柔软呈鱼松状，无砂粒感；劣质鱼粉和掺假鱼粉捻有砂粒感，手感较硬，质地粗糙磨手。如结快发粘，说明已酸败，强捻散后呈灰白色说明已发霉。（二） 显微镜检查 鱼粉为黄褐色或黄棕色等轻质物，按鱼肉、鱼骨和鱼鳞的特征可以鉴别。鱼肉镜下表面粗糙，具有纤维结构，类似肉粉，只是颜色浅。鱼骨为半透明至不透明的银色体，一些鱼骨块呈琥珀色，其空隙呈深色的流线型波状线段，似鞭状葡萄枝，从根部沿着整个边缘向外伸出。鱼鳞为平坦或弯曲的透明物，有同心圆，以深色和浅色交替排布。鱼鳞表面有轻微的十字架。鱼鳞表面碎裂，形成乳白色的玻璃珠。 烧焦鱼粉 鱼粉长期堆放，通过空气而自行燃烧，呈褐色。从镜下看不到油星，且颗粒碎小。鱼骨由半透明的银色体变为褐黄色的半透明体。鱼肉粗糙，纤维结构看不清楚或根本看不到。鱼粉掺假的显微镜检查：1 掺菜籽粕鱼粉中掺菜籽粕镜下可见菜籽粕的种皮特征，种皮为深棕色并且薄，外表面有蜂窝状网孔，表面有汹涌内表面有柔软的半透明白色薄片附着。菜籽粕的种皮和籽仁碎片不连在一起，籽仁呈淡黄色，形状不规则，无光泽，质脆。2 掺棉籽饼粕鱼粉中掺棉籽饼粕镜下可见棉絮纤维附着在外壳上及饼粕颗粒上，棉絮纤维为白色丝状物，中空、扁平、卷曲、半透明、有光泽，棉籽壳碎片为棕色或红棕色，厚且硬，沿其边沿方面有淡褐色和深褐色的不同色层，并带有阶梯似的表面。棉籽仁碎片为黄色或黄褐色，含有许多圆形扁平的黑色或红褐色油腺体或棉酚色腺体。棉籽壳和棉籽仁是连在一起的。3掺稻壳粉鱼粉中参稻壳粉镜下可见具有光泽的表面，有井字条纹，并可见到茸毛。4掺花生饼粕鱼粉中掺花生饼粕镜下可见花生种皮、外壳存在，种皮为红色、粉红色、浅紫色或棕黄色。外壳破碎呈极不规则的片状，分层，内层呈白色海绵状，有长条短纤维交织，外壳表面有突筋呈网状，外壳皮厚不均，有韧性。5掺芝麻饼粕鱼粉中掺芝麻饼粕镜下可见芝麻特征，芝麻种皮带有微小圆形突起，芝麻皮薄，黑色、褐色或黄褐色，因品种而异。6掺大豆粉鱼粉中掺大豆粉镜下可见豆皮、黄色或典褐色块状物。豆皮有凹形斑点，稍有卷曲，并可见种脐。白色海绵淀粉像水珠浮在块状物表面。7掺麦麸鱼粉中掺麦麸镜下可见淡黄色或棕色片状麸皮。麸皮外表面有细皱纹，内表面粘附有许多不透明的白色淀粉粒。8掺皮革粉鱼粉中掺皮革粉镜下可见绿色、深褐色及砖红色的块状物或丝状物，像锯末似的，没有水解羽毛粉那样透明。9水解羽毛粉鱼粉中掺水解羽毛粉镜下可见半透明像松香一样的碎颗粒，有些反光。同时可见羽毛管和羽毛轴，似空心面。也可看见生羽毛。10掺虾肉粉鱼粉中掺有虾肉粉镜下可见虾须、虾眼、虾壳和虾肉等。虾壳类似卷曲云母薄片形状，半透明。少量的虾肉与虾壳连在一起。虾眼为黑色球形颗粒，较硬，为虾肉粉中较易辨认的特征。虾须在镜下观察为以断片存在，长圆管状，带有螺旋形平行线。虾腿为断片宽管状，半透明，带毛或不带毛。11掺蟹壳粉鱼粉中掺蟹壳粉镜下可见蟹壳的特征。蟹壳为小的不规则的几丁质壳的形状，壳外层多为橘红色，多孔，并有蜂窝状的圆形凹斑或小盖状物。12掺贝壳粉鱼粉中掺有贝壳粉镜下可见贝壳粉的特征。贝壳粉颗粒很硬，表面两面光滑，颜色依贝壳种类不同而有较大的差异，有的为白色或灰色，也有的为粉红色。有些颗粒外表面具有同心的或平行的线纹或者带暗淡交错的线束，有些碎片边缘呈现锯齿状。13、掺海带粉 鱼粉中掺海带粉镜下可见其海带粉的特征，海带粉镜下呈浅灰色并杂有淡黄色，与国产鱼粉的颜色相近，颗粒不等，粒度大的呈片状，形状极不规则。14、掺血粉鱼粉中掺血粉，镜下可见血粉的特征。血粉在镜下颗粒形状各异，有的边缘锐利，有的边缘粗糙不整齐。颜色有紫黑色似沥青状，或者颜色为血红色晶亮的小球。15、掺肉骨粉 鱼粉中掺肉骨粉，镜下可见肉骨粉的特征。肉骨粉镜下为浅黄色至深褐色，含脂肪高的色泽深，颗粒有油腻感，表面粗糙，并可见肌肉纤维。肌纤维较细，担相互联接。骨质为较硬的白色、灰色或宗黄色的快状颗粒，不透明或半透明，带斑点，边缘圆钝。次外还可见毛发、蹄角等附着物，经常可见混有血粉的特征。（三）物理检验 1、鱼粉中掺有黻皮、花生皮、稻壳粉的检验 取3g鱼粉样品，置于100ml玻璃烧瓶中，加入5倍水，充分搅拌后，静置1015分钟，麸皮、花生壳粉、稻壳粉因此比重轻，浮在水面上。 2、鱼粉中掺沙子的检验 取3g鱼粉样品，置于100ml的玻璃烧瓶中，加5倍水，充分搅拌后，静置1015分钟，鱼粉、砂子均沉于底部，再轻轻搅拌，鱼粉即浮动起来，随水流；转动而旋转，而砂子比重大，稍旋转即沉于杯底，此刻可观察到砂子的存在。 3、鱼粉中植物性蛋白质的检验 取适量鱼粉用火燃烧，如发出与纯毛发燃烧后相同的气味，则为鱼粉，而具有炒谷物的香味，则说明其中混杂了植物蛋白质。 4、鱼粉中掺羽毛粉的检验 将10g样品放入四氯化碳与石油醚的混合液（100：41.5，d=1.326g/cm3)中搅拌静置，上浮物多为羽毛粉（或海蜇废弃物）。 5、测容量法 粒度为1.5mm的纯鱼粉，容量约为550-600g/l,如果重量偏大或偏小，均不是纯鱼粉。 （四）化学检验 1、鱼粉中掺杂锯末（木质素）的检验方法1 将少量鱼粉置于培养皿中，加入浓度为95%的乙醇浸泡样品，再滴入几滴浓盐酸，若出现深红色，加水后深红色物质浮在水面，则说明鱼粉中掺有锯末物质。 方法2 称取鱼粉12g，置于试管中，再加入10%的间苯三酚10ml，再滴入数滴浓盐酸，观察样品的样品的颜色变化，如其中有红色颗粒产生，则为木质素，即说明鱼粉中掺有锯末类物质。 2、鱼粉中掺有淀粉类物质的检验 可用碘蓝反应来鉴定。其方法是：取试样23g置于烧杯中，加入23倍水后，加热1分钟，冷却后滴加碘碘化钾溶液（取碘化钾5g，溶于100ml水中，再加碘2g），若鱼粉中掺有淀粉类物质，则颜色变蓝，随掺入淀粉的增加，颜色由蓝色变紫。 3、鱼粉中掺入碳酸钙、石粉、贝壳、蛋壳粉的检验 可以用盐酸对碳酸钙的反应产生二氧化碳气体来判断。其方法是：取试样10g，放在烧瓶中，加入2ml盐酸，立即产生大量气泡，即为掺入了上述物质。 4、鱼粉中掺入纤维类物质的检验如果怀疑鱼粉中掺入纤维类物质，可采用下述检方法：取试样25g，分别用1.25%硫酸和1.25%氢氧化钠溶液煮沸过滤，干燥后称重。纯鱼粉含纤维量极少，通常不超过1.0%。5、鱼粉中皮革粉的检验方法1 取少许鱼粉样品于培养皿中，加入几滴钼酸铵溶液（以溶液浸没鱼粉为宜），静置510分钟，如不发生颜色变化则为皮革粉，如呈现绿色则为鱼粉。钼酸铵溶液的配制 称取5g钼酸铵，溶解于100ml蒸馏水中，再加入35ml的浓硝酸即可。方法2 取2g鱼粉样品，置于坩埚中，经高温灰化，冷却后用水浸润，加入2N硫酸10ml，使之呈酸性。滴加数滴二苯基卡巴腙溶液，如有紫色红色物质产生，则有多铬存在，即说明鱼粉中有皮革粉。2N硫酸的配制 量取55ml浓硫酸，倾入有200ml左右的蒸馏水的烧杯中，再转入1000ml容量瓶中，稀释定容即可。二苯基卡巴腙溶液的酸制 称取0.2 g二苯基卡巴腙，溶解于100ml90%的乙醇中。本测定方法的原理 基于皮鞣制过程中，采用铬制剂，通过灰化后，有一部分转变为六价铬，在强酸溶液中，六价铬与三苯基卡巴腙反应，生成紫色的水溶性二硫代卡巴腙化合物。6、鱼粉掺有羽毛粉的检验称取约1 g试样于2个500ml三角烧杯中，一个加入1.25%硫酸溶液100ml，另一个加入5%氢氧化钠溶液100ml，煮沸30分钟后静置，吸取上清夜，将掺渣放在50100倍显微镜下观察。 如果试样中有羽毛粉，用1.25%硫酸处理掺渣在显微镜下呈现一种特殊的形状，而5%倾氧化钠溶液处理后的残渣则没有种特殊形状。7、鱼粉中掺入血粉的检验被检鱼粉12g于试管中，加入5ml蒸馏水，搅拌，静置数分钟后。另取一支试管，先加连苯胺粉末少许，然后加入2ml冰醋酸，震荡溶解，再加入12ml过氧化氢溶液，将被检鱼粉的滤液徐徐注入其中，如两液接触面出现绿色或蓝色的环或点，表明鱼粉中含有血粉，反之，鱼粉中不含血粉。本方法如不用滤纸，而用被检鱼粉直接徐徐注入溶液面上，在液面上及液面以下可见绿色或蓝色的柱或环，表明有血粉掺入，否则没有血粉掺入。 所需试剂 冰醋酸 、连苯胺粉末、3%过氧化氢溶液（现用现配）。 本方法原理 鱼粉中铁质有类似过氧化酶的作用，可分解过氧化氢，放出新生态氧，使连苯胺氧化为连苯胺蓝，而呈绿色或蓝色。 8、鱼粉中掺尿素的检验 方法1 称取10克样品于烧杯中，加入100ml蒸馏水中，搅拌，过滤，取滤液1ml于点滴板上，加23滴甲基红指示剂，再滴加23滴尿素酶溶液，经约5分钟，如点滴板上呈深红色，则说明样品中掺有尿素。 尿素酶溶液的配制 称取0.2g尿素酶，溶解于100ml95%的乙醇中。 甲基红指示剂的配制 称取甲基红0.1g，溶解与95%的乙醇中。方法2 无尿素酶药品时，则可用此方法检验。取两份1.5g鱼粉于两支试管中，其中一支加入少许黄豆粉，两管各加入蒸馏水5ml振荡，置60-70恒温水浴中3分钟，滴6-7滴甲基红指示剂，若加黄豆粉的试管中出现较深紫红色，则说明鱼粉中有尿素。 方法3 称取10g鱼粉样品，置于150ml三角瓶中，加入50ml的蒸馏水，加塞用力振荡2-3分钟，静置，过滤，取滤液5ml，于20 ml的试管中，将试管放酒精灯上加热灼烧，当溶液蒸干时，可嗅到强烈的氨臭味。同时把湿润的PH试纸放在管口处，试纸立即变成红色，此时pH值高达近14。如有纯鱼粉则无强烈的氨嗅味，置于管口处的pH试纸稍有碱性反应，显微蓝色，离开管口处则慢慢退去。 9 、鱼粉中掺入双缩脲的检验 称取鱼粉试样2g，加20ml蒸馏水，充分搅拌，静置10分钟，干燥滤纸过滤，取滤液4ml于试管中，加6mol/l 氢氧化钠溶液1ml,再加入1.5%CaSO4溶液1ml,摇匀，立即观察，溶液呈蓝色者鱼粉为没有掺入双缩脲，若呈紫红色，则鱼粉中掺有双缩脲，红色越深，掺入双缩脲的比例越大。 10 、依据常规检验结果鉴别鱼粉掺假 通过测定粗蛋白、纯蛋白、粗纤维、粗脂肪、粗灰分及淀粉等项指标，可以准确识别鱼粉成分的真伪。掺有尿素的鱼粉，因为含有大量的非蛋白氮，所以测定粗蛋白值很高，而真蛋白值却很低，掺入植物蛋白原料后，真蛋白虽然很高，但脂肪和淀粉含量相对增加；掺入植物秸秆粉后，纤维含量增高；掺入风化土，灰分境增加。 11、纯/粗蛋白比值鉴别鱼粉掺假 甲醛尿素聚合物是常见的非蛋白氮掺入物，由于尿素以聚合物的形式存在，故用测定游离尿素的方法无法检出。目前多根据纯/粗蛋白比值来推断是否掺有这类高氮化合物。一般认为用纯/粗蛋白的比值80%即没有掺入高氮聚合物。 纯/粗蛋白的测定方法 （1）纯蛋白的测定原理 蛋白质与重金属盐类在碱性条件下，由于盐析作用而沉淀下来，而非蛋白氮则易溶于水，故可用热水将水溶性含氮化合物洗去，用凯氏定氮法测定沉淀物，即可得出纯蛋白的含量。若得出的纯/粗蛋白的比率小于80%，则可判断为鱼粉中掺这类非蛋氮化合物。 （试剂） 6%硫酸铜溶液 称取30.0gCuSO4 ，加水溶解，并稀释至500ml。 1.25%氢氧化钠溶液 称取6.25g氢氧化钠，加水溶解，并稀释至500ml。 0.05mol/L 盐酸标准溶液。 （3）仪器 半微量定氮仪 （4）测定步骤 精确称取鱼粉样品1g左右，置于250ml烧杯，加入100ml水（指去离子水，下同），于电炉上加热煮沸，加入25ml6%CuSO4 溶液，再在搅拌下，缓缓加入25ml1.25%NaOH溶液，摇匀。从电炉上取下，室温放置2小时，用11cm中速定性滤纸倾注法过滤。并用少量水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至洗出液无SO42-离子。于80干燥箱烘至略潮，小心卷起滤纸成棒状，连沉淀物一起移入250ml凯氏烧瓶中，加入浓硫酸20ml，3.5 gK2SO4和0.5gCUSO4，摇匀。置电炉上小心消化至澄清透明，继续加热半小时，取下冷却，小心加入50ml水，放冷，移入100ml容量瓶中，用少量水多次洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶，再补水至刻度。蒸馏、滴定同粗蛋白。 （4）粗蛋白测定同国标法。 （5）计算 纯/粗蛋白%=100%付一 鱼粉中掺尿素的定量测定 方法一 1.试剂 对二甲氨基苯甲醛（PMAB）溶液 称取3.2g，PMAB，用200ml乙醇溶解，再加入20ml盐酸，该溶液在1个月内稳定。 醋酸锌溶液 称取22.0g醋酸锌溶于水，加3ml醋酸，再用水稀释至100ml 。 亚铁氰化钾溶液 称取0.6g亚铁氰化钾溶于水并稀释至100ml。 活性炭。 磷酸盐缓冲液（pH7.0）称取3.403g无水磷酸二氢钾和4.355g无水磷酸氢二钾分别溶于约100ml水中，合并两面三刀溶液并稀稀释至1000ml，作为储备液。分别吸取1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml、储备液于50ml容量瓶中，用磷酸缓冲液定容，则尿素工作液浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、120ug/ml、160ug/ml、200ug/ml、240ug/ml。 2仪器 分析天平；振荡机；分光光度计；恒温水浴；具塞试管；三角瓶。3.测定步骤 （1）工作曲线的绘制 吸取各浓度尿素工作液5ml置于试管中（空白管为5ml磷酸缓冲液），各加入对二甲氨基苯甲醛溶液5ml，轻轻摇匀后置于25水浴中10分钟，在420nm处读取各溶液吸光值。以尿素浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制工作曲线或作回归方程。 （2）样品的测定 称取2g试样（精确至1mg）置于300ml三角瓶中，加2g活性炭，190ml水，50ml醋酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液，震荡提取30分钟，待完全沉淀后过滤。取5ml滤液于试管中，加入5ml二甲氨基苯甲醛溶液，充分振荡后置于25水浴中10分钟，此时于420nm波长下读取吸光度值。对照液为5ml磷酸缓冲液，加入5ml对二甲氨基苯甲醛溶液，充分振摇后置于25水浴中10分钟，此时于420nm波长下读取吸光度值。对照液为5ml磷酸缓冲液，加5ml对二甲基甲醛溶液，按照试样溶液的同样方法操作。4计算 D0.2 尿素（%）= 100%。 W式中：D从工作曲线上计算出待测溶液浓度（g/ml）； W试样重量，g。方法二1 原理尿素在酸性条件下与二乙酰肟和硫代氨基脲共煮，二乙酰肟分解成二乙酰与尿素形成二嗪衍生物的复合物。该复合物颜色的深浅与尿素的含量成正比，在540nm波长处测定其吸光度，与标准比较定量。2 试剂酸性试剂 吸取44ml浓硫酸，66ml浓磷酸加于盛有600ml蒸馏水1000ml容量瓶中，冷却至室温；称取硫代氨基脲（NH2.CS.NH2）50mg，硫酸镉2g于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解，干净地转入上述容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，转入棕色试剂瓶中保存；2%二乙酰肟溶液 称取二乙酰肟20g，加蒸馏水溶解后，稀释至1000ml，转入棕色试剂瓶保存；尿素氮标准储备液 准确称取经60烘干3-4小时的尿素1.072g于小烧杯中，加入0.01mol/L的硫酸溶解后,转移至500ml容量瓶中,并定容至刻度,摇匀,储于冰箱备用(也可配制尿素氮水溶液,但需加几滴氯仿防腐)。此液相当于尿素氮1mg/ml；尿素氮标准应用液 准确吸取尿素氮标准储备液4ml，以0.01mol/L的硫酸溶液定容至100ml，摇匀备用。此液相当于尿素氮4g/ml； 0.01mol/L的硫酸溶液 吸取浓硫酸0.28ml，缓慢加入500ml蒸馏水中，冷却稀释至1000ml。3仪器分析天平 感量0.0001g；刻度吸管 1ml、2ml；烧杯 100ml；容量瓶 100ml、1000ml；纳氏比色皿（具塞） 20ml；漏斗 直径 68cm；洗瓶；分光光度计。4.操作步骤 （1）标准曲线的绘制 取20ml纳氏比色管7支，于各管中分别加入尿素氮标准应用液0ml、0.1ml、0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml，并用蒸馏水补加至各管总体积均为2 ml；然后在各管中加入2%二乙酰 溶液1.82 ml，并用酸性试剂稀释至刻度，摇匀。立即置煮沸10分钟，置流水中冷却5分钟，以空白管调零，在540nm波长处测其吸光度，并绘制标准曲线。（2）样品的测定提取 准确称取试样1.52g（试样品中尿素含量而定）于100ml烧杯中，加入少量蒸馏水浸泡，搅拌数分钟，稍静置，用倾注法过滤于100ml容量瓶中，用蒸馏水分数次洗涤掺渣，然后将滤液定至100ml。测定 准确吸取稀释定容的样品提取液0.08ml于20ml的纳氏比色管中，加入1.92ml、二乙酰 1.82ml，以酸性试剂稀释至刻度。以下按标准绘制曲线时的操作程序显色和比色，并根据样品溶液的吸光值在标准曲线上查得相应的尿素氮含量。5.结果计算 尿素（%）= 式中： A从标准曲线上查得的尿素氮含量，g； V1样品提取液定容后的总体积，ml； V2测定时所用样液的体积，ml； M样品中的质量，g； 2.14将氮量换成尿素的换算系数。 附二 鱼粉中掺双缩脲的定量测定 1.原理 鱼粉中的双缩脲经抽提后，在酒石酸钾的碱性溶液中与CUSO4生成紫红色配位化合物。 2试剂 硫酸铜溶液 称取硫酸铜15g，用蒸馏水溶解，并稀释至1000ml，摇匀。 酒石酸钾钠碱性溶液 称取酒石酸钾钠50g，加蒸馏水溶解，再加入40g氢氧化钠固体，溶解后，加水至1000ml，摇匀； 双缩脲标准溶液 称取1g双缩脲，容于约450ml蒸馏水中，用0.05mol/LH2SO4溶液或0.1mol/lNaOH溶液调PH为7，定量转入500ml容量瓶中定容，并充分摇匀，双缩脲含量为2mg/ml。 钨酸钠溶液（10%） 称取钨酸钠10g，加水溶解，并稀释至100ml。 3.仪器 分光光度计。 4.标准曲线的绘制 （1）系列标准溶液的配制和显色 取7个干净的50ml容量瓶，分别加入双缩脲标准液0ml、2.5 ml、5.0 ml、7.5 ml、10.0 ml、12.5 ml、15.0 ml，向每个容量瓶先加水至25ml左右，然后依次加入酒石酸钾钠碱性溶液10.0 ml，CuSO4溶液10.0ml，摇匀。把容量瓶浸入305水浴中放置约20分钟，不时摇动，使之显色。 （2）测定吸光度 显色完全后的溶液，在30分钟以下不含双缩脲的溶液作参比溶液，用3cm吸收池，550nm波长下测定吸光度。（3）根据每容量瓶中所含双缩脲的毫克和测定的吸光度绘出标准曲线。5.样品溶液的制备和测定（1）样品溶液的制备 称取鱼粉试样1g左右（准确至1mg），置于50ml容量瓶中，加少量水润湿，加入2：3H2SO4溶液1.0ml，充分振摇1分钟，静置10分钟，用干燥慢速滤纸过滤，滤液备用。同时称取与样品基本等量的纯鱼粉（不含双缩脲）置50ml容量瓶中，与试样进行同样处理，其滤液做空白滤液。准确吸取试样滤液和空白滤液各Vml（试样滤液含双缩脲1025mg），分别置于2个50ml容量瓶中。每个容量瓶中加入6mol/lNaOH溶液数滴（10ml滤液加67滴），再分别用0.1mol/lNaOH溶液和0.05mol/LH2SO4溶液调至pH为7，然后加入水至溶液体积为25ml左右，以下显色操作同标准溶液。（2）样品溶液吸光度测定 显色完全后，在30分钟内以空白滤液显色后的溶液为参比，用3cm吸收池、550nm 波长下测定吸光度。6.计算 x（%）=100% = 式中： x试样中双缩脲的含量，%； W显色时吸取样滤液的体积，ml； W试样的重量，g； HV毫升试样滤液中双缩脲质量，mg。注：采用与试样基本等量的纯鱼粉（检查不含双缩脲）滤液作空白滤液，目的是消除抽提双缩脲时随之溶解的少量蛋白质等干扰。附三 鱼粉中含砂量的测定方法一1. 操作步骤 精确称取鱼粉5g，置于已经恒重的瓷坩埚中，先在电炉上，然后移入马福炉内，在600中灰化5小时，炉温降至400以下取出冷却，加3ml水及30ml30%盐酸溶液（消化液），在水浴上温热15分钟，用定量滤纸过滤，用热水洗涤滤渣至滤出液无氯离子（用3%硝酸银检查，不产生混浊），将滤纸与掺渣置于原坩埚中，烘干后，在电炉上炭化，然后移入马富炉中在600灰化1小时，待炉温降至400以下，取出置于干燥器内冷却至恒重。2. 计算样品含砂量（%）=式中 m1坩埚加砂的重量，g； m2坩埚的重量，g； m3样品的重量，g。方法二取测定粗蛋白或纯蛋白的消化液过滤，反复用少量热水洗原容量瓶及沉渣（目的是洗涤、转移沉渣），待容量瓶中的沉渣完全转移至定量滤纸上，沉渣即洗涤干净。然后，小心的将定量滤纸与掺渣转移至已恒重的坩埚中，置烘箱中干燥约30分钟，取出，在电炉上炭化；至不冒烟为止，再移入马福炉中于600灰化30分钟，待炉温降至400以下，取出移至干燥器中冷却，称重至恒温，计算方法同方法一。二、水解羽毛粉的掺假识别水解羽毛粉同鱼粉一样属高价产品，所含蛋白质优良，并具未知生长因子，所以掺假机会大，如掺石灰、玉米芯、生羽毛、禽内脏、头与脚及一些淀粉类、饼粕类物质，检查方法如下：1.掺石灰的检查可用盐酸法 取样品10g，放在烧瓶中，加入2ml盐酸，立即产生大量的气泡，即掺有石灰。2.掺玉米芯的检查可利用显微镜检查 如果在镜下可见浅色海绵状物，证明掺有玉米芯粉。3.掺生羽毛、禽内脏及头脚的检查可利用显微镜镜检来检查。掺生羽毛可见羽毛、羽干和羽片片断，羽干片断有锯齿边，中心呈沟槽。掺禽内脏、头和脚在镜下可见禽内脏粉、头骨、脚骨和皮等，正常的水解羽毛粉为羽干长短不一，厚而硬，表面光滑，透明，呈黄色至褐色。4.掺淀粉类、饼粕类原料的检查掺淀粉类原料可采用碘蓝反应来鉴别，方法同鱼粉掺淀粉类原料的检验。掺饼粕类可利用显微镜镜检进行检查，方法同鱼粉。三、血粉的掺假识别血粉也同鱼粉、水解羽毛粉一样价高，蛋白质含量高，并且未知生长因子，常有掺假情况发生。一般掺有植物性原料、屠宰下脚料、胃内容物等，检查方法如下：1.掺植物性原料的检查 可利用碘蓝反应及镜检，同鱼粉掺假检查。 2.掺屠宰下脚料、胃内容物等检查 利用显微镜镜检进行检查，如果在镜下可见毛、骨、肉等杂物，证明掺有上述物质。正常血粉像干硬的沥青块样，黑中透暗红或为紫红色的小珠状，很易与之区别。矿物质原料的掺假识别 一、骨粉的掺假识别 骨粉掺假主要有石粉、贝壳粉、沙土、谷物等，识别方法如下： （一）掺石粉、贝壳粉的检验 1.肉眼观察法 用肉眼观察骨粉的湿度、颜色、光泽、细度等。质量好的骨粉为灰白色至黄褐色的粉状细末，用力握不成团状，不发滑，放下即散；如果产品成白色或灰色、粉红色，有暗淡，半透明光泽，搓之颗粒质地坚硬，不粘结，说明是贝壳粉或有贝壳粉。 2.显微镜镜检法 取样品1g，置于培养皿中，铺成薄薄的一层，放在2050倍显微镜下观察，骨粉颗粒为小片状，不透明，灰白色，光泽暗淡，表面粗糙；腱和肉的小片颗粒形状不规则，半透明，呈黄色乃至黄褐色，质硬，表面光泽暗淡；肉颗粒软，并裂成肌肉纤维；血及血球形成破碎球体形，形成不规则，呈黑色或深紫色，难于破碎。 贝壳粉颗粒质硬，不透明，白色、灰色或粉红色，光泽暗淡或半透明程度低，颗粒表面光滑，有些颗粒外表面具有同心或平行的线纹。 石粉颗粒有光泽，呈半透明白色，颗粒相互团附在一起，形似绵白糖。 3 化学法 取被检骨粉1g置于小烧杯中，加5ml25%的盐酸溶液，纯骨粉可发出短时的“沙沙”声，骨粉颗粒表面不断产生气泡，最后全部溶解变成浑浊。脱脂骨粉的盐酸溶液，表面漂浮有极少量的有机物。蒸骨粉和生骨粉的盐酸溶液表面漂浮物较多，而假骨粉均无以上现象。如果有大量气泡迅速产生，并发出“吱吱”响声，表明有石粉、贝壳粉存在。若烧杯底部有一定量的不溶物可能掺有细砂。由此可见，在稀盐酸中不溶解或溶解快速的均不属纯骨粉。（三） 掺砂土的检查取样品1g，置于瓷坩埚中，在电炉上炭化至无烟，再继续灰化1-2小时，冷却后，加10ml25%稀盐酸溶液溶解并煮沸。如有不溶物即为砂土，干燥后称重，可大致估算掺砂土的比例。（三） 掺谷物的检查 取样品少许置于培养皿中，下面垫一张滤纸，加入1-3滴碘碘化钾溶液（取碘化钾6g，溶于100L水中，再加碘2g），如有谷物淀粉存在，可见蓝紫色的颗粒状物。（四） 化学分析方法检查 有条件的可用化学分析的方法进行鉴别。如果化学分析的结果不符合骨粉的质量标准，例如含钙过多，含磷过低或不含磷，说明是掺假骨粉或假骨粉。（五） 饱和盐水漂浮法骨粉颗粒可漂浮盐水表面，用搅棒搅拌方可下沉，而假骨粉颗粒则不能在盐水表面漂浮，快速沉入水底，有的能被分解成粉状。（六） 焚烧方法 纯真骨粉焚烧时，先产生一定量的蒸汽，然后产生刺鼻的烧毛发的气味；而掺杂骨粉所产生的蒸汽和气味相对少，未脱脂的变质骨粉有异臭味；而假骨粉则无蒸汽和气味产生。脱胶骨粉的骨灰呈墨黑色；假骨粉灰分则呈灰白色。二、 磷酸氢钙的掺假识别磷酸氢钙掺假一般多为石粉、化石粉等矿物质原料，检查方法如下：（一） 手摩擦法用手拈着试样用力摩擦以感觉试样的粗细度。正常试亲手感柔软，细粉状并且均匀；色泽呈白色或灰白色粉末。异常试样手感粗糙，有颗粒，粗细不均匀；色泽呈灰黄色或灰黑色粉状。（二） 酸溶法 称取试样1-5g，加盐酸溶液（1：1）1020ml，加热溶解。正常试样全部溶解，不发泡，试样呈深黄色，透明清晰，微量沉淀（经过滤）。异常试样部分溶解，有较多泡沫（即表示含石粉较多），试样呈浅黄色或棕黄色，有混浊，沉淀物较多（经过滤）。（三） AgNO3法 在表面皿上取少量试样，加入5%AgNO3数滴，如全部变成鲜黄沉淀，则为磷酸氢钙，否则即为掺假。（四）化学法 目前以硝酸银做定性检验，也不很可靠，在假冒产品中加入少量硫酸铵，加硝酸银后同样显示黄色沉淀。采用化学方法，质量不符合质量标准的，说明是掺假磷酸氢钙。另外，目前按GB8528-87国家标准的分析方法，对检测假冒磷酸氢钙中的磷还无法确定其可利用磷成分。按国标规定磷的分析方法对样品的溶解，动物不能吸引的磷同样被溶解出来。建议对磷酸氢钙的磷分析，宜改用我国化工部部颁标准的分析方法，即样品用0.4%的盐酸或2%柠檬酸来溶解，这样分析的结果，才是动物能吸收的可利用的磷。三、盐（氯化钠）的掺假识别 盐掺假主要是以亚硝酸钠盐代替盐或掺一部分，再就是掺有石膏粉、石粉、识别方法如下：（一）盐中掺入亚硝酸盐的检验1 感观检查两者都是白色结晶性粉末，无挥发性气味，但亚硝酸盐一般是黄色或浅黄色的透明结晶体，而盐（氯化钠）是不透明的。2 水检法取5g试样放入烧杯中，加入250ml冷水，同时用玻璃棒搅拌，水温急剧下降，则是亚硝酸钠，因为亚硝酸钠比氯化钠溶解时吸收热量大而快。3. 高锰酸钾法取少量的样品，用大约20倍的水使其溶解，然后在溶液中加入1粒小米粒大小的高锰酸钾，如果高锰酸钾的颜色由紫色变浅，证明该样品是亚硝酸盐；如果高锰酸钾的颜色不改变，则是氯化钠。（二）盐（氯化钠）中掺有石膏、石粉的检验1. 水溶法取试样约1克，置于小烧杯中，加入50ml水，振荡1分钟观察，如发现杯底部有白色不溶物或残渣，则可证明掺有石膏粉或石粉。2. 钙离子检验法 取试样约1g，置于小烧杯中，加入50ml水，振荡1分钟后静置，取水溶液5ml，置于试管中，加入1%草酸溶液，混匀，如出现白色浑浊或沉淀，则认为有钙离子，即掺有石膏粉。 3 盐酸法 取试样2g，加入浓盐酸数滴，如有气泡产生，则证明掺有石粉。四、氯化钴的掺假识别氯化钴是饲料中不可缺少的微量元素。补钴的办法通常是氯化估形式添加，又因其价格较高，所以氯化钴中掺入大量与其性质极为相似的氯化锰、氯化铁、络合物氯化钴等氯化物。 检查方法如下：由于氯化钴（CoCl2.6H2O）在120失去结晶水使氯化钴颜色由紫红色转为呈纯粹的蓝色,而当掺有其他物质时,则不呈蓝色,据此可加以判断。方法是将氯化钴样品放入恒温干燥箱于1202下烘2小时后取样观察。如果颜色呈比较均匀的蓝色，则证明没有掺假，如果为粉红色或紫红色、灰色等其他颜色，证明掺有其他物质。第四节 氨基酸的掺假识别 一、DL蛋氨酸的掺假识别 DL蛋氨酸属高价原料，掺假情况较严重，掺假的原料主要有一些植物原料，碳酸盐类等，识别方法如下：（一）、外观鉴别 蛋氨酸是经水解或化学合成的单一氨基酸。一般呈白色或淡黄色的结晶性粉末或片状，在正常光线下有反射光发出。市场上假蛋氨酸多呈粉末状，颜色多为纯白色或浅白色，正常光线下没有反射光或只有零星反射光发出。 （二）、手感鉴别 真蛋氨酸手感滑腻，无粗糙感觉；而假蛋氨酸一般手感粗糙，不油腻。 （三）、气味、口味鉴别 真蛋氨酸具有较浓的腥臭味，近闻刺鼻，用口尝试，带有少许甜味；而假蛋氨酸味较淡或有其他气味。 （四）pH试纸法 蛋氨酸灼烧产生的烟为碱性气体，有特殊臭味。可使湿的广泛试纸变蓝色；假的灼烧往往无烟（如有石粉、石膏粉冒充时），或者产生的烟使湿的广泛试纸变红（如用淀粉冒充时）。 （五）溶解法 真蛋氨酸易溶于稀盐酸和稀氢氧化钠，略难溶于水，难溶于乙醇，不溶于乙醚。方法如下：取约5g样品加100ml蒸馏水溶解，摇动数次，约2-3分钟后，溶液清亮无沉淀，则样品是真蛋所酸；如溶液混浊或有沉淀，则样品是假蛋氨酸。 （六）掺入植物成分的检验 真蛋氨酸的纯度达98.5%以上，且不含植物成分；而许多假蛋氨酸掺有大量面粉或其他植物成分。检验方法如下：取样品约5g，加100ml蒸馏水溶解，然后滴加碘碘化钾溶液，边滴边摇动，此时溶液仍为无色，则该样品中含有面粉或其他植物成分，是假蛋氨酸。（七）颜色反应鉴别 取约0.5g样品加入20ml硫酸铜硫酸饱和溶液，如果溶液呈黄色，则样品是真蛋氨酸；如果溶液无色或呈其他颜色，则样品是假蛋氨酸。 （八）掺入碳酸盐的检验 有些假蛋氨酸中掺有大量的碳酸盐，如轻质碳酸钙等。具体检验方法是：称取约1g样品置于100ml烧杯中，加入6N盐酸20ml，如样品中有大量气泡冒出，说明其中掺有大量碳酸盐，是假蛋氨酸；如没有气泡冒出，说明样品是真蛋氨酸。 （十）蛋氨酸含量估算 取0.1g样品加入20ml蒸馏水溶解，用0.1mol/l的碘液滴定，且边滴边摇动，直至溶液出现碘液本身棕色为止。如碘液用量在10-12ml之间，说明蛋氨酸含量在95%左右；碘液用量越大，则蛋氨酸含量越高，反之，蛋氨酸含量越低，说明样品是假蛋氨酸。 （十一）常规定量分析检验 1 先检验是否掺有非蛋白氮，如尿素、碳酸铵等，非蛋白态铵盐均含有氨态氮。尿素酶在碱性条件下将尿素催化成氨态氮。用奈斯勒试剂（碘化汞碘化钾的氢氧化钠溶液）能与氨态氮反应生成黄褐色沉淀，有黄褐色沉淀证明氨基酸中掺非蛋白态氮。 2 若无沉淀则进一步用凯氏半微量定氮测定，具体方法：称取一定数量的样品，经消化、蒸馏、盐酸滴定后得出盐酸的消耗量，然后按公式计算： 含氮量（%）=（V-V0）N0.014V1/V2W100%式中:V-消耗标准盐酸的毫升数 V0-空白测定消耗的标准盐酸毫升数; N-盐酸当量浓度; V2-蒸馏用消化液毫升数; W-样品重,克。蛋氨酸分子式为CH3SCH2CH（NH2）COOH，理论含氮量为9.4%，将此理论值乘以商标上的纯度，就是实际应达到的含氮量。如果检验测定的含氮量与理论上计算的含氮量相吻合，误差在一个氮单位为正品，否则为劣品。（十二）蛋氨酸含量的测定如有条件，可按国标法测定其蛋氨酸含量，即也可鉴别真伪。二、L赖氨酸盐酸盐的掺假识别L赖氨酸盐酸盐属高价饲料，掺假情况较为特殊，掺假的原料基本同蛋氨酸，检查方法