子宫内膜癌端粒酶活性的研究.doc

子宫内膜癌端粒酶活性的研究癌症 1999年第0期第18卷 论著摘要作者：万小云石一复程琪单位：浙江大学附属妇产科医院(杭州，310006)关键词：端粒酶；子宫内膜癌中图号：R737.33；R730.231文献标识码：A 文章编号：1000467X(1999)s0009801为了探讨端粒酶在子宫内膜癌发生发展中可能起的作用，本研究采用端粒重复扩增法(Telomererepeatamplificationprotocal,TRAP)检测子宫内膜癌及癌前病变组织的端粒酶活性表达情况。1.材料与方法1.1组织来源1996年6月至同年12月间子宫内膜癌及癌前病变患者共15例纳入本研究，年龄3963岁，平均51.5岁。组织学检查子宫内膜腺癌9例，腺棘细胞癌3例，腺鳞癌1例，复合型重复不典型增生2例；FIGO分期a期3例，b期4例，c期3例，a、b、c期各1例。所有患者术前均未接受化疗或放疗，手术取下子宫后立即取材，其中6例同时采取癌旁组织(癌组织周围正常子宫内膜组织)。选取同期6例正常增生早期子宫内膜组织作为对照，组织经刮宫取得。组织标本快速冷冻于液氮中，后贮存于80冰箱中直至使用。1.2试剂与方法端粒酶活性测定采用美国Oncor公司TRAP测定端粒酶活性试剂盒，经抽提端粒酶，准备反应混合物及PCR扩增。电泳体系为12.5非变性聚丙烯酰胺，凝胶规格为110mm100mm1mm。电泳条件为0.5TBE缓冲剂，电压120V。每次实验均设置阳性和阴性对照。硝酸银染色，振荡显色510分钟即可显示DNA带。1.3阳性结果的判断银染后凝胶上呈现典型间隔6个碱基对(bp)的阶梯形条带为端粒活性阳性，其中胶底部的条带为36bp内参照带，产物带开始于50bp，依次为56、62、68等。2.结果本研究用TRAP法测定了6例正常增生早期子宫内膜，2例子宫癌前病变，13例子宫内膜癌的癌组织，6例癌旁组织的端粒酶活性。其结果见表1表1TRAP测定子宫内膜癌端粒酶活性结果组织类型例数端粒酶活性未测得阳性子宫内膜癌组织13112癌旁组织633癌前病变组织202正常增生早期子宫内膜660由表1可见13例子宫内膜癌的癌组织端粒酶活性显示占92?3(12/13)，6例癌旁组织中3例表达，而2例癌前病变端粒酶也阳性，6例正常增生早期子宫内膜组织不表达端粒酶活性，见图1。阴性对照行出现数条不规则条带为引物二聚体形成所致，这些条带的特征是间隔不规则，除50bp条带颜色较深外，其余条带色淡，且条带数目少(一般少于6条)。图1TRAP测定子宫内膜癌端粒酶活性结果1.阴性对照3.癌组织(阳性)5.癌组织(阳性)7.癌前病变(阳性)2.癌旁组织(阴性)4.正常增生早期子宫内膜(阴性)6.癌旁组织(阳性)8.阳性对照表1显示仅1例子宫内膜癌组织未测得端粒酶活性，该例为c期，而其余各例癌组织端粒酶均阳性。癌前病变组织也表达端粒酶活性，提示子宫内膜癌形成早期即表达端粒酶活性。有关子宫内膜癌不同期别之间、癌组织与癌前病变组织之间，癌组织与癌旁组织之间端粒酶的表达是否存在数量上的差异，尚有待进一步进行定量研究。3.讨论当今，世界范围内子宫内膜癌的发病率不同程度增加，已成为目前最常见妇科恶性肿瘤之一1，国内各医院统计也明显增加2，但其发生发展的机理尚未阐明。近年研究3端粒酶在恶性肿瘤形成，发展过程中起重要作用。近年研究除了造血细胞4及生殖细胞3外，其他正常组织和细胞均不表达端粒酶活性。本组6例正常增生早期子宫内膜组织端粒酶也阴性，而92?3子宫内膜癌组织端粒酶阳性，这与人类其他恶性肿瘤所观察的结果基本一致3，5，表明端粒酶在子宫内膜癌发展过程中可能起重要作用。研究表明端粒酶常在恶性肿瘤晚期被激活5，6，7。然而，本研究发现子宫内膜癌早期(a)及癌前病变也表达端粒酶活性，由此可见，端粒酶的激活不仅在肿瘤发展中起了重要作用，或许在肿瘤产生过程中也是一个关键的步骤。提示通过端粒酶活性可协助早期诊断子宫内膜癌，同时通过应用端粒酶抑制药物或许能为抗肿瘤(包括早期肿瘤)治疗提供一种新途径。本组资料发现50的癌旁组织表达端粒酶活性，可能为癌旁组织标本中存在癌细胞的微小浸润，也可能癌旁组织中部分细胞已处于获得“永生”的准备或早期阶段。结合正常早期增生子宫内膜端粒酶活性均阴性，而随着癌前病变、癌组织和癌肿组织端粒酶活性阳性表达逐渐增强，也说明端粒酶对子宫内膜癌的发生、发展等一系列变化起重要作用。参考文献1Parazzini F,Vechia CL,Bocciolone L,et al.The epidemiology of endometrial cancerJ .Gynecol Oncol,1991,41:1.2邓小虹，王大琬.北京妇产科医院17年子宫恶性肿瘤发病趋势的探讨J.中华妇产科杂志，1993，28：748.3Kim NW,Piatyszek MA,Prowse KR,et al.Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancerJ .Science,1994,226:2011.4Hiyama K,Hirai Y,Kyoizumi S,et al.Activation of telomerase in human lymphocytes and hematopoietic progenitor cellsJ .J Immunol,1995,155:3711.5Hiyama E,Yokoyama T,Tatsumoto N,et al.Telomerase activity in gastric cancerJ .Cancer Research,1995,55:3258.6Blasco MY,Rizen M,Greider CW,et al.Differential regulation of telomerase activity and telomerase RNA during multi? stage tumorigenesisJ .Nat Genet,1996,12:200.7Hiyama E