2006年自科基金.doc

国家自然科学基金申请书申请代码：C03050309受理部门： 收件日期：受理编号：第 10 页 版本1.002.910国家自然科学基金申 请 书您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作： 1)如果您是Word2000或以上版本用户，请把Word宏的安全性设为:中 方法: Word菜单-工具-宏-安全性-安全级,设置为中 (如果您是Word97用户，继续执行以下步骤) 2)关闭本文档，重新打开本文档 3)点击启用宏按钮，即可开始填写本文档或打印了资助类别：面上项目亚类说明：自由申请项目附注说明： 项目名称：天灸对Lewis肺癌化疗小鼠肿瘤转移抑制基因表达及其免疫功能的影响申 请 者：王勇 电话： 053182614117 依托单位：山东中医药大学 通讯地址：济南市经十路53号 邮政编码：250014 单位电话电子邮件： 申报日期： 2006年5月20日国家自然科学基金委员会基本信息1YThcng7申 请 者 信 息姓名性别男出生年月1972年3月民族汉族学位博士职称主任医师主要研究领域刺法灸法的研究 电话053182614117 电子邮件 传真 个人网页 工作单位山东中医药大学 /针灸推拿学院在研项目批准号 依托单位信息名称代 码25001405 联系人齐冬梅 电子邮件 电网站地址http：/ 合作单位信息单 位 名 称代 码90000133 25000101 项 目 基 本 信 息项目名称资助类别面上项目 亚类说明自由申请项目 附注说明 申请代码C03050309:中医针灸学(含针刺镇痛等) 基地类别 预计研究年限2006年7月 2007年5月研究属性应用基础研究 申请经费38.5000万元摘 要(限400字)：肺癌在我国发病率很高，但肺癌患者的 5 年生存率只有 10%，约 70-80%的肺 癌患者接受化疗。因抗癌药物治疗指数狭小所引起的不良反应往往限制了癌症治疗的最佳用药。因此防治化疗反应越来越受人们重视,本实验通过研究移植性 Lewis肺癌小鼠经天灸治疗和顺铂化疗后机体的免疫功能和肿瘤转移抑制基因的表达了解天灸在肺癌治疗过程中的增效减毒作用.本实验采用 MTT 法检测 Lewis 肺癌化疗小鼠脾脏 NK 细胞活性，采用放射免 疫分析法检测 Lewis 肺癌化疗小鼠外周血白细胞介素-2（IL-2）水平，研究天灸 对小鼠免疫功能的影响。此研究的意义在于为天灸在临床治疗肺癌过程中的增效减毒作用提供理论依据，为中西医结合治疗肺癌方面进行一些有益的尝试。 关 键 词(用分号分开，最多5个)天灸； Lewis 肺癌； 肿瘤转移抑制基因表达； 免疫功能 项目组主要成员（注: 项目组主要成员不包括项目申请者，国家杰出青年科学基金类项目不填写此栏。）编号姓 名出生年月性别职 称学 位单位名称电话电子邮件项目分工每年工作时间（月）11964-12-11 男教授博士山东中医药大学 053182914116 项目负责人 4 21972-3-24 男实验师硕士山东省中医药研究院 053182617115 动物实验 4 31969-5-13 男副教授博士山东中医药大学 053182924577 动物造模及实验 5 41965-01-02 男副教授博士山东省医学科学院 053182615221 基因检测 5 56789总人数高级中级初级博士后博士生硕士生10221041说明: 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报（含申请者），总人数自动生成。经费申请表 （金额单位：万元）科目申请经费备注（计算依据与说明）一.研究经费34.500034.50001.科研业务费5.00005.0000（1）测试/计算/分析费0.5000数据软件分析（2）能源/动力费0.7000电费、交通费、手机费，平均每月300元（3）会议费/差旅费0.6000参加学术会议3次（4）出版物/文献/信息传播费1.8000文献检索、购买相关书集、复印资料，发表学术论文6篇（5）其它1.4000成果鉴定2.实验材料费25.000025.000（1）原材料/试剂/药品购置费21.0000天灸膏、顺铂（2）其它4.0000动物购置、饲养费及手术器械、用品费用3.仪器设备费0.0000（1）购置（2）试制4.实验室改装费5.协作费4.5000检测Lewis 肺癌化疗小鼠外周血白细胞介素-2（IL-2）水平二.国际合作与交流费0.00001.项目组成员出国合作交流2.境外专家来华合作交流三.劳务费2.0000四.管理费2.0000合 计38.5000与本项目相关的其他经费来源国家其他计划资助经费0.0000其他经费资助（含部门匹配）0.0000其他经费来源合计0.0000报告正文（一）立项依据与研究内容：1、项目的立项依据（附主要的参考文献目录）：肺癌的发病率在我国居常见肿瘤的前列，而且绝大多数肺癌患者就诊时肿瘤 已达晚期，大部分病人失去了手术的机会。目前，化疗是治疗肿瘤的重要方法，约 70-80%的肺癌患者接受化疗1。化疗减轻病情的同时也对正常组织细胞、脏器 的生理功能有一定程度的破坏作用,并抑制机体的免疫功能和骨髓造血功能等, 从而影响化疗的继续进行。因此,防治化疗毒性反应是癌症治疗的重要课题。天灸是将具有刺激性的药物贴敷在穴位上，使局部皮肤充血、发泡，甚至化 脓，有如灸疮，故曰天灸。天灸通过刺激相应的腧穴或患处，调理脏腑，行气活 血，调和阴阳，达到治疗疾病目的的一种外治法。因为其可以引起皮肤局部起泡 所以也叫做“发泡灸”；相对于火灸、艾灸来讲，因为不需要热源，所以也叫做 “冷灸”；利用药物本身对皮肤的刺激性就可以达到灸的效果，所以也叫做“自 灸”。天灸是传统医学中较为独特的外治法，有数千年的历史，一直沿用至今， 现也称为穴位药物贴敷疗法。它将中医透皮给药与经络穴位相结合，通过药物刺 激经络、腧穴，对机体产生内在的调节作用，从而达到治疗疾病的目的。现代研 究认为，天灸对皮肤产生刺激，扩张毛细血管，改善局部血液循环；刺激皮肤的 神经感受器，通过神经反射达到提高机体免疫力的作用。另一方面由于天灸集艾 灸、中药于一体，可以使腧穴局部自动加热有利于药物的吸收，药物的有效成份 经皮肤表面的角质层、毛囊皮脂腺及汗管等渗透吸收进血液、淋巴液、内分泌液 中，发挥一定的药理作用。 天灸疗法越来越受到学者和专家们的重视，尤其是近十几年来，在理论探讨 和临床应用等方面，均有突破性的创新，并开始用于疑难杂症的治疗。例如赵氏2 观察天灸治疗非感染性尿道综合征，与西药组比较，天灸组痊愈 13(40.6%)好转 14(43.7%)无效 5(15.7%)总有效率 84.3%；对照组痊愈 2（6%）好转 9(33%)无效 19(61%)总有效率 39%。两组比较差异有显著性（P0.01）。说明天灸在治疗 尿道综合症方面有明显的优势。发泡疗法用于治疗慢性气管炎3和支气管哮喘9有大 量报导，还有用于三叉神经痛4、过敏性鼻炎56、乳腺纤维囊肿7、腮腺炎、风湿性关 节炎、硬皮病8、肩周炎10、肱骨外上髁炎11、慢性乙型肝炎12、获得性寒冷性荨麻疹、 额窦炎、梅核气、慢性溃疡性结肠炎、强直性脊椎炎13、胃脘痛14均获得满意的疗效，临床例证不胜枚举。在基础理论研究方面，据文献报道，天灸可调节化疗 大鼠下丘脑、垂体中-内啡肽（-Ep）水平15，改善环磷酰胺大鼠的造血功能和 免疫功能，提高荷瘤小鼠的T淋巴细胞的应答能力和NK细胞1617、肿瘤坏死因子（TNF）的杀伤活性下者升高，趋向协调平衡，正是内经“阴平阳秘，精神乃治”理论的体现。本研究选择肺癌作为研究对象，一是因为肺癌是我国最常见的肿瘤之一，积极开展中西医结合防治肺癌研究具有较大的现实意义；二是约 70-80%的肺癌患者接受化疗。化疗减轻病情的同时也对正常组织细胞、脏器的生理功能有一定程度的破坏作用,并抑制机体的免疫功能和骨髓造血功能等, 从而影响化疗的继续进行。因此,防治化疗毒性反应是癌症治疗的重要课题，而天灸正是防治化疗毒性反应的临床和基础行之有效的方法。本实验通过研究移植性 Lewis肺癌小鼠经天灸治疗和顺铂化疗后机体的免疫功能和肿瘤转移抑制基因的表达了解天灸在肺癌治疗过程中的增效减毒作用.本实验采用 MTT 法检测 Lewis 肺癌化疗小鼠脾脏 NK 细胞活性，采用放射免 疫分析法检测 Lewis 肺癌化疗小鼠外周血白细胞介素-2（IL-2）水平，研究天灸 对小鼠免疫功能的影响。此研究的意义在于为天灸在临床治疗肺癌过程中的增效减毒作用提供理论依据，为中西医结合治疗肺癌方面进行一些有益的尝试。参考文献：1 张小东译;肿瘤治疗学.人民卫生出版社,2001.4,421-4282赵立岩,李南玲,天灸治疗非感染性尿道综合征 32 例临床观察,中国中西 医结合杂志,2003，23(11):822. 3 左爱欣,三伏天灸治疗慢性支气管炎 150 例,河北中医,1997，19(2):37.4 周念兴,天灸疗法治疗三叉神经痛临床观察,实用中医内科杂志,1995， 9(2):34. 5 夏 翠 霞 , 三 伏 天 灸 治 疗 过 敏 性 鼻 炎 360 例 , 辽 宁 中 医 杂 志,1996,23(4):184. 6 史正耀,大蒜天灸治疗过敏性鼻炎 120 例,陕西中医,1997，18(1):31.7 汪慧敏,贴敷加天灸治疗乳腺纤维囊肿,浙江中医杂志,1997，32(8):374. 8 刘玉环,张仁尊,崔淑杰,天灸治疗硬皮病,针灸临床杂志,1997， 13(3):39-40. 9 王建新,天灸疗法防治支气管哮喘 72 例临床小结,现代中医,1997， 10(3):161-163.10 章进,太渊穴天灸方治疗肩周炎 48 例,中医外治杂志,1998，7(6):14-15.11 高素秋,天灸治疗肱骨外上髁炎 100 例,江苏中医,1999，20(6):39. 12 陈海英,林咸明,刘勇,天灸结合穴位注射治疗慢性乙型肝炎疗效与 HB， DNA 含量之间的关系,中国针灸,1999，19(12):729-730. 13 杨平梅,天灸发泡法治疗风湿痹症,针刺研究,2000，25(2):151-152.14 袁坚荣,刘炳权,天灸治疗虚寒性胃痛 365 例临床观察,针灸临床杂 志,2001，17(8):52. 15 孙德利,方剑乔,陈华德,天灸对环磷酰胺大鼠-内啡肽含量的影响,中国中医药科技,20018(5):279-280. 16 韩毳,李学武,刘震,天灸抗小鼠移植性肿瘤作用及对免疫功能的影响,天津中医,200118(5):30-31. 17 孙德利,陈汉平,吴焕淦,天灸对小鼠造血功能的影响及其机理的探讨,针 刺研究,1999，24(3):206-211.2.项目的研究内容、研究目标以及拟解决的关键问题。2.1研究内容：（1）天灸对 Lewis 肺癌化疗小鼠的减毒作用。（2）天灸对 Lewis 肺癌化疗小鼠脾 NK 细胞活性及血清 IL-2 水平的研究。（3）天灸对 Lewis 肺癌化疗小鼠的癌细胞生长、转移及 nm23-M1 基因表达的研究。2.2研究目标： 通过天灸肾俞穴，观察其对Lewis肺癌小鼠体重变化、饮食情况、脾脏NK细胞活性、血清IL-2水平、肿瘤组织形态学、肿瘤转移抑制基因（nm23-M1）的蛋白表达、nm23-M1基因的 mRNA 表达的影响，为开拓天灸防治化疗反应提供基础研究，为临床应用提供科学的实验数据。2.3拟解决的关键问题：（1）肾俞穴在小鼠身上的定位。（2）小鼠脾脏NK细胞活性、小鼠血清IL-2水平的测定。（3）肿瘤组织形态学的观察。（4）肿瘤转移抑制基因的蛋白表达。（5）nm23-M1基因的mRNA表达3.拟采取的研究方案及可行性分析：3.1研究方案：（1）参照林文注主编的实验针灸学大鼠的肾俞穴的定位。（2）用MTT法和用放射免疫分析法：MTT法：制备脾细胞：贴敷治疗结束后隔日取材, 摘眼球取血，脱颈处死小鼠，75% 乙醇溶液浸泡消毒，无菌取脾，置于少量冷不完全 1640 培养液中（按 10.4g 加 1000ml 双蒸水、加入终浓度为 20mM 的 HEPES、16mM 的 NaHCO3、1mM 的丙酮酸钠, 配成不完全 1640 培养基,过滤除菌；），研磨，200 目筛网过滤，滤液移入 50ml 离心管， 1500r/min 4离心 10 min。弃上清，以无菌 Tris-NH4Cl 溶液（Tris， 以双蒸水配成 0.17M 溶液，用盐酸调 PH 至 7.2-7.4；NH4Cl，以双蒸水配成 0.16M 溶液，4保存备用。临用时二者以体积比 1:9 混合成工作液。）作用 10min 破坏 红细胞，同上法离心后弃上清，冷不完全 1640 培养液重悬，洗涤 2 次，洗涤后 用完全1640培养液（不完全1640培养液临用时加入100 u/ml的青霉素和100 g/ml 的链霉素、2mM 的 L-谷氨酰胺，配成含 10%灭活胎牛血清的完全 1640 培养 基。）重悬并调细胞浓度为 1107/ml,并对倍稀释至 5106/ml、1.25106/ml， 加入 96 孔板中（0.1ml/孔）作为效应细胞。. 制备靶细胞：将传代 24H 生长良好的 YAC-1 细胞（5104/孔）作为靶细 胞，分别设为 100:1、25:1 效靶比，并设效应细胞、靶细胞对照。振荡混匀，5% CO2 37孵育 20 小时，弃上清 100l/孔，加入 MTT 溶液 （以 PH7.2 的 PBS 配成 5mg/ml 溶液，过滤除菌，-20保存。）10l/孔，继续 孵育 4 小时。取出后加入 MTT 溶解液（0.01N HCl-10% SDS，现配现用,以 0.01N 盐酸配 10% SDS 溶液）100l/孔，振荡混匀，37孵育过夜，使颗粒完全溶解。在酶标仪上以 570nm 波长测定 OD 值。 公式：NK 细胞活性1-（实验孔 OD 值-效应细胞对照孔 OD 值）/靶细胞对 照孔 OD 值100% 。放射免疫分析法： 摘眼球取血，室温凝固，4，离心，3000rpm，10min，取血清测定。严格 按试剂盒说明书加液，采用平衡法，在计数器上测定 cpm 数，以 B/T 计算 NSB、 S0 结合百分率，以 B/B0 计算标准及待测样品结合百分率，计数器描绘标准曲 线，自动计算出样品（IL-2）值，和样品浓度。（3）HE染色，光镜观察：小鼠的肿瘤组织，切成 2mm 厚，放入 10%福尔马林溶液内固定。用低温石蜡 包埋，4祄 连续切片，切片常规脱蜡至水;苏木素染色 10m; 1%盐酸酒精分 化; 流水冲洗 2h 蓝化; 脱水 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇各 5m，95%乙醇 15m; 入伊红酒精溶液 5m;95%乙醇5m;100%乙醇5m;100%乙醇5m; 透 明:二甲苯15m;二甲苯15m; 中性树胶封片，室温晾干，光镜下观察。（4）用免疫组织化学法：切片常规脱蜡至水;3%H2O2 室温灭活内源性过氧化物酶 10min,蒸馏水洗 3 次;微波抗原修复:切片浸入 1mmol/LEDTA（PH8.0）液中,微 波炉中加热至 100,5min,冷却后再加热至 100,5min,冷却;滴加抗原修复 液,室温 10min, PBS 冲洗 3 次;血清封闭,室温 20min;滴加一抗 1：100 稀释 的一抗 nm23-M1，30l，4过夜。PBS 洗 5min3 次。同时用 PBS 代替一抗作 阴性对照;滴加生物素化山羊抗兔 IgG,37,20min, PBS 洗 5min3 次;滴加 试剂 SABC,3720min, PBS 洗 5min4 次;DAB 显色, 室温 5-30m，光镜下控制 时间。常规脱水,透明, 中性树胶封片。计算机图象分析 nm23-M1 表达的面积 与整个视野的面积比。（5）采用实时荧光定量RT-PCR方法：从组织中提取总 RNA。 肿瘤组织加 Trizol 后（100mg 组织/1ml Trizol），用枪头充分搅动以使液 体粘稠，室温放置 5 分钟，使其充分裂解。4 12000g 离心 15 分钟，取上清。 按 200l 氯仿/mlTrizol 加入氯仿（预冷），充分摇匀 15 秒，室温放置 15 分钟。4 12000g 离心 15 分钟。 吸取上层水相，至另一个预冷的离心管中。 按 0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇（预冷）混匀，室温放置 5-10min。 4 12000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。 按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇（预冷），温和震荡离心管，悬浮 沉淀。 4 7500g 离心 5min，尽量弃上清。室温晾干 5-10min。用 50l RNase-free H2O,溶解 RNA 样品，55-60 10min。-80保存待测。用分光光度法测定所提取 RNA 的浓度 分光光度计先用 1ml 水校正零点。比色杯使用前用浓盐酸:甲醇（1:1）浸泡 1 小时，随后用经 DEPC 处理高压消毒过的水彻底冲洗。吸取 6l RNA 样品，加 水至 1.5ml 混匀后，转入分光光度计的石英比色杯中。 在 260nm 和 280nm 分别读出光密度，260nm /280nm 在 1.8-2.0 之间。 RNA 样品的浓度按以下公式计算：OD260核酸稀释倍数40/1000；浓度单位为 g /l 。RNA 电泳检测 RNA 的完整性（1.0%琼脂糖凝胶）。mRNA 反转录，用 Reverse Transcription System 试剂盒，严格按说 明书操作。 取出 RNA 模板、试剂，于室温融化后，立即放在冰浴中，混旋器上混匀，短 暂离心。Template RNA xl（1g），加 DEPC 处理过的水至10l，70温浴 10 分钟，立即放在冰浴中至少 1 分钟。 配制反应混合液(每管按下述量配制)：MgCl2，25mM（4.0l）、 Reverse Transcription 10buffer （2.0l）、10mM dNTP Mix（2.0l）、 RNase Inhibitor （40U/l）（0.5l）、AMV Reverse Transcriptase（20U/l）（0.75l）、 Oligo（dT）15 primer 0.5g/l （1.0l）。 混合均匀，每管加 10l 的上述混合液 用加样枪上下轻轻混匀。 42温浴，15 分钟。 95温浴，5 分钟，放在冰上 5 分钟。 -80保存待测。荧光定量 PCR 检测，试剂：SYBR Green PCR Master Mix，ABI(Applied Biosystems)，引物序列：根据美国基因生物库提供小鼠基因核酸序列，选取 G C 含量约 50%的无发卡结构，相互间无同源序列两段特异性保守序列，引物采 用 primer premier5.0 设计，由赛百盛公司合成。设计引物如下： Nm23-M1-FP: 5-CTAGAATGACATCCGACTCC-3。 Nm23-M1-RP: 5-TTGAGAAGGTCCTCTGAAGC-3 扩增片段为 333bp。照基因引物-actin-FP: 5-GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3 -actin-RP: 5-AATGTCACGCACGATTTCCC-3 扩增片段为 263bp。 每个反应管中混合液（包括模板、引物）体积 V25l，设两管阴性对照 （一例阴性标本对照，一例只含扩增反应混合液的对照）,标准曲线（用样品梯 度稀释）,在 PCR 仪 96 孔反应板上放好，并记录位置。 扩增反应在 GeneAmp 5700 荧光定量 PCR 仪进行，反应条件如下： 95.0C 10min；94.0C 20sec、58.0C 20sec、 72.0C 45se 共循环 45 次； 72.0C 延伸 8min。以上反应设定均在与 PCR 仪相连的计算机上进行，每个循环 电脑自动记录反应管中的荧光信号值，并描绘曲线。反应结束由 PE 5700 软件分 析结果，自动计算定量数值。电泳分析：对定量 PCR 检测为阳性反应管中的产物进行 1.5%琼脂糖凝 胶 80V 电泳 45-60 分钟,用凝胶图像分析仪采集图像。标记分子量为:80，100，200，300，400，500，600，700，800，900，1030bp。3.2可行性分析：（1）肾俞是足太阳膀胱经的穴位，是肾气输注于体表的部位，具有较好的培补肾元的功效，先天得充则后天得养，对于提高机体的防治化疗毒性反应有很好的作用。（2）本课题组成员学历、年龄结构合理，具有较扎实的理论基础和熟练的操作技能。（3）本课题组对天灸的理论知识和临床应用具有扎实的基础，本实验室能熟练的操作MTT法和用放射免疫分析法、HE染色，光镜观察、用免疫组织化学法、实时荧光定量RT-PCR法。（4）实验动物 C57BL/6J 近交系小鼠，78 周龄，体重 1721g，60 只，雌雄各半，清洁 级。动物由中国医学科学院动物研究中心提供。 因此，本实验项目可行性强，可按期保质完成。4. 本项目的特色与创新之处。 本项目的特色在于：采用现代科学技术将天灸肾俞穴在抗肿瘤化疗中的增效减毒作用机制、加强化疗对 Lewis 肺癌小鼠癌细胞生长的抑制作用、对化疗小鼠免疫功能有调节作用、对化疗小鼠 nm23-M1 基因表达的促进作用比较客观的表示出来。 本项目的创新在于：（1）首次开展天灸对肺癌化疗小鼠肿瘤组织的 nm23-M1 基因蛋白含量的研究。（2）首次开展天灸对肺癌化疗小鼠肿瘤组织的 nm23-M1 基因 mRNA 表达的研 究。 本实验以中医天灸疗法为研究目标，运用现代免疫学、分子生物学技术等现 代科学手段，开展了天灸“肾俞”穴对抗肿瘤化疗增效减毒机制的实验研究，更深入探讨了天灸的治病机理并取得了重要的研究成果。目前这方面的研究达到分 子水平、基因水平的研究较少，我们运用基因学技术，将“天灸疗法”的实验研 究提高到新的水平。丰富了中医天灸理论。随着进一步研究，将天灸与化疗药物 作用有机结合，将开发出有效的化疗药物减毒增效剂和减毒增效方法。5.年度研究计划及预期研究结果。5.1年度研究计划： 2006.72006.8 完成试验材料和试剂的准备，查阅资料，查新检索。 2006.92006.10 完成小鼠脾 NK 细胞活性及血清 IL-2 水平的测定。 2006.112007.1 完成肿瘤组织形态学的观察、肿瘤转移抑制基因的蛋白表达和nm23-M1基因的mRNA表达。 2007.22007.5 课题总结、鉴定并申报成果。5.2 预期研究结果：（1）天灸疗法可以使小鼠血清 IL-2 含量升高，脾脏 NK 细胞活性增强，天灸组的 NK 细胞活性最强（2）天灸对化疗小鼠 nm23-M1 基因表达有促进作用。（3）天灸疗法对 Lewis 肺癌化疗小鼠有减毒作用：抑制化疗肺癌小鼠体重减轻，食欲降低，饮食量减少。（4）所获研究成果，拟在国家级刊物发表学术论文56篇，及时进行成果鉴定，并申报科技进步奖。（二）研究基础与工作条件1. 工作基础1.1 研究工作积累 实践积累：2000多年的实践证明，天灸对虚弱疾病患者（本实验为移植性 Lewis肺癌小鼠）机体的恢复有很好的效果。 理论积累：通过对国内有关天灸治疗研究情况进行检索，掌握了该领域的研究现状，从而选择恰当的切入点进行研究。 技术积累：本实验室已经完全掌握了天灸技术的操作，掌握了分子生物学、现代免疫学技术，为完成本实验打下了良好的实验技术。1.2 已取得的研究工作成绩 已经初步经实验得知天灸肾俞可以提高大鼠的造血功能，试验结果表明可以提高大鼠自身的免疫能力。2. 工作条件 山东中医药大学、山东省医学科学院、山东省中医药研究所具备了与本次实验相关的仪器，中国医学科学院动物研究中心提供实验动物 C57BL/6J 近交系小鼠，78 周龄，体重 1721g，60 只，雌雄各半，清洁 级。本校实验室动物中心有良好的SPF级动物饲养设备和条件。设备和设施完全满足本项目的实验所需。3. 申请人简历 王勇，男，1972年3月出生。1995年毕业于山东中医药大学针灸专业，获硕士学位。1998年毕业于山东中医药大学针灸专业，获博士学位，主任医师，一直从事中西医结合防治肿瘤的工作。近期发表的于本课题有关的论文有： 1. 王勇. 天灸的历史沿革. 山东中医药大学学报 2003；10（1）：48 2. 王勇. 天灸的临床应用综述. 中国针灸杂志2005；21（1）：4在本项研究中负责课题设计、组织实施、实验数据收集、整理、统计等工作。程勇，男，1964年12月11日生。1990年毕业于大连医科大学肿瘤病理专业，获医学硕士学位，2000年毕业于山东中医药大学中西医结合肿瘤专业，获医学博士学位，主任医师，