杜仲、茯苓配伍对小鼠免疫功能的影响.doc

杜仲、茯苓配伍对小鼠免疫功能的影响黑龙江大学陈喜君 王艺【摘要】 目的：观察杜仲、茯苓联合作用对小鼠免疫功能的影响。方法：40只小鼠随机分4组，分别为正常对照组（I）、杜仲组（II）、茯苓组（III）及复方组（IV）。灌胃给药后，测定外周血T细胞的表达情况及脾抗体生成数。结果：经统计学分析，与对照组相比，试验组组均能显著升高CD4+及CD4+/CD8+的比值（P0.05），但II组对抗体生成数无明显作用。结论：杜仲对机体的细胞免疫有显著的增强作用，对体液免疫无明显作用。茯苓可显著提高抗体生成量，但CD4+及CD4+/CD8+比值低于杜仲组。茯苓和杜仲联合使用，在体液免疫和细胞免疫两方面增强机体的免疫力，具有增效作用。【关键词】 杜仲，茯苓，配伍，免疫力The effect of compatibility Eucommia ulmoides with Poria cocos on immunological function in miceAbstract Objective: To observe the immunity effect of Eucommia ulmoides, Poria cocos and their compatibility. Method: The 40 mice were randomly divided into 4 groups: normal control group (I), Eucommia ulmoides group (II), Poria cocos group (III) and compatibility group (IV). Detecting the quantity of T lymphocyte in peripheral blood and the antibody-producing cells in spleen after the drug was given intragastrically. Results: Through statistical analysis, treatment group could increase CD4+ and CD4+/CD8+ ratio compared with the control group (P0.05). But II was no significant effect on the antibody-producing cells. Conclusion: Eucommia ulmoides had a significant effect in the enhancement of cellular immunity and no obvious effect on humoral immunity. Poria cocos can significantly increase the amount of the antibody cells, but CD4+ and CD4+4/CD8+ ratio lower than II group. Compatibility of Eucommia ulmoides with Poria cocos has a synergistic effect to enhance the bodys immune system in both humoral and cellular immune.Key Words Eucommia ulmoides, Poria cocos, Compatibility；Immunity杜仲和茯苓均为我国传统中药，已有2000多年的药用历史。杜仲在中药古典神农本草经、本草纲目中就被列为药之上品1。近年来，国内外许多学者对杜仲的化学成分和药理作用进行了大量研究，发现杜仲具有调节血压、降低血糖、抑制肿瘤细胞生长等药理作用。中国药典规定其树皮作为中药杜仲入药2。茯苓为多孔菌科卧孔菌属真菌茯苓的干燥菌核，多依附松树根生长3。该菌是著名而且用途极广的传统中药材，又是著名的食用菌。茯苓性甘、淡、平，人心、脾、肾经。杜仲和茯苓现已广泛用于提高机体的免疫力，但二者联合使用的研究却未见报道。本研究以CD4+、CD8+的表达情况及脾抗体生成数作为主要观察指标，旨在探讨杜仲和茯苓联合作用对小鼠免疫系统的影响，对二者配伍的合理性进行论证，为临床应用提供理论依据。1 材料与方法1.1 动物清洁级Balb/c小鼠，雄性，68周龄，体重1822g。1.2 仪器及试剂FACSCalibur流式细胞仪：美国BD公司，激发波长488nm。裂解液、BSA、叠氮化钠、磷酸缓冲液、Hanks、荧光素标记的抗小鼠抗体 PE-CD8+、FITC-CD4+等。1.3 分组与给药将40只小鼠，随机均匀分为空白对照组、杜仲单方组、茯苓单方组和杜仲茯苓复方组4组。表1试验动物分组序号组别n剂量I对照组10生理盐水II杜仲组100.3g/kgIII茯苓组100.5g/kgIV杜仲茯苓组100.3g/kg+0.5g/kg1.4 CD4+、CD8+测定40只小鼠随机分为4组，每只小鼠每日按表1进行灌胃给药，连续7日。摘眼球取抗凝血标本，用Ficoll-Hy-paque淋巴细胞分离液获得外周血单个核细胞，用PBS液洗涤后调整细胞浓度为（1.01.5）109/L。在1mL单个核细胞溶液中加入FITC-CD4+单抗和PE-CD8+单抗1L，置4冰箱避光孵育1h后用冷PBS液洗涤，10g/L多聚甲醛固定后，用FACSCalibur流式细胞仪进行测定CD4+和CD8+T淋巴细胞含量4，并计算CD4+/CD8+比值。1.5 抗体生成细胞检测40只小鼠随机分为4组，按表1所示灌胃，连续灌胃25日。第25日，每只小鼠腹腔注射2%SRBC 0.2mL，继续灌胃5d，颈椎脱臼处死小鼠，取脾脏，用镊子轻轻将脾磨碎，以Hanks液洗涤3次，用完全1640培养液配成5106个/mL细胞悬液备用。用含有0.5mL（4550）表层培养基的小试管中加入50L 10%SRBC及20L脾细胞悬液，迅速混匀，加于挂玻片上，凝固后，将玻片倒放，置CO2孵箱中培养1.5h，加SA缓冲液稀释的补体，继续培养1.5h，计算溶血抗体生成细胞数5。1.6 统计学分析实验结果采用SPSS 13.0 for windows统计软件进行分析，实验结果用均数标准差（XS）表示。2 结果连续给药7日后，取外周血用流式细胞仪进行检测后，统计结果如表2。与对照组比较，试验组均能显著提高CD4+及CD4+/CD8+比值（P0.05），且复方组与单方组相比，具有显著性差异（P0.05）。茯苓组对CD8+值影响不大，CD4+/CD8+比值低于II、IV组。表2 茯苓、杜仲及两者联合应用对小鼠T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的影响（XS）序号组别CD4+（%）CD8+（%）CD4+/ CD8+I对照组44.943.4420.441.702.210.27II杜仲组56.861.73*15.380.87*3.700.18*III茯苓组52.002.73*19.861.852.640.29*IV杜仲茯苓组60.031.79*#13.131.01*#4.600.39*#注：与对照组相比，*P0.05；与单方组相比，#P0.05。连续给药25日后，测定脾脏中抗体生成细胞数。由表3可知，III、IV组能显著提高脾抗体细胞生成数（P0.05），II组对其影响不显著。复方组与单方组相比，具有显著性差异（P0.05）。表3 茯苓、杜仲及两者联合应用对抗体生产细胞的影响（XS）序号组别抗体生成细胞数/106I对照组196.7017.39II杜仲组209.2023.46III茯苓组345.1024.01*IV杜仲茯苓组372.7013.18*#注：与对照组相比，*P0.05；与单方组相比，#P0.05。3 讨论3.1 检测指标的选择T淋巴细胞亚群是构成机体免疫防御系统的重要细胞。现代免疫学观点认为，外周血中T细胞亚群的数目和CD4+/CD8+比值是估计机体免疫调节平衡状态最有意义的参数之一6,7。T淋巴细胞中包括辅助性T细胞CD4和抑制性T细胞 CD8 2个主要亚群，这2类细胞相互变化、调整，可以维持机体内的免疫平衡。CD4+细胞可起促进、抑制或调节作用，蛋白抗原进入机体，通过一系列途径被递呈给CD4+细胞，CD4+细胞识别抗原表位并被活化，产生细胞因子、增殖和分化成效应细胞。CD4+细胞通过与靶细胞接触释放信号给靶细胞和分泌细胞因子而执行多种免疫调节作用。CD4+T细胞比例高时，外源性病原微生物入侵体内能够快速启动免疫系统从而抵抗病原菌，这表明机体免疫功能强，不易被感染。而CD8+有免疫抑制和细胞毒性的作用，其主要功能是清除被病毒感染的细胞，当CD8+T细胞比例高时，就表明机体细胞受到外源疾病感染严重，机体免疫力低下8-10。CD4+、CD8+分别称为MHCII类分子和I类分子的受体，CD4+和CD8+分别出现在具有不同功能亚群的T细胞表面。在同一T细胞表面只表达其中一种，CD4+与CD8+合适的比例是维持机体健康的重要因素，其比值的减少是免疫缺陷的重要指标10,11。实验中各组的CD4+、CD4+/CD8+值均不同程度地升高，而CD8+下降，表明茯苓和杜仲均可促进CD4+细胞的增殖和活化，维持CD4+与CD8+细胞的平衡，具有增强机体细胞免疫的作用，但茯苓作用小于杜仲。 3.2 茯苓与杜仲联合增效作用CD4+细胞依赖抗原提呈细胞提呈相关的抗原，对之进行特异性激发后分泌淋巴因子，从而激活B淋巴细胞、巨噬细胞、NK细胞，通过其活化的细胞发挥免疫增强作用。由结果可知，杜仲组CD4+及CD4+/CD8+比值增大，但对脾抗体形成影响不大，这提示杜仲对机体的细胞免疫有显著的增强作用，对体液免疫无明显作用。茯苓可显著提高抗体生成量，但CD4+及CD4+/CD8+比值低于杜仲组。将杜仲、茯苓联合应用，各项检测指标与单方组相比，均具有显著性差异（P0.05）。茯苓和杜仲增强机体免疫力的原理不同，联合应用可在体液免疫和细胞免疫两方面增强机体的免疫力，具有增效作用。参考文献1 盛军利，孙桂菊. 杜仲的功效学研究现状及其应用前景J. 医学综述，2006，12（16）：1022-1024.2 张燕平，孙艳，王丽华. 杜仲及其复方抗感染药理研究J. 药物与临床，2003，18（5，6）：183-184.3 张敏，高晓红，孙晓萌等.茯苓的药理作用及研究进展J. 北华大学学报（自然科学版），2008，9（1）：63-68.4 李永喜，陈兴平卡介苗多糖核酸对正常小鼠T淋巴细胞亚群的影响J. 青岛大学医学院学报，2004，40（4）：328-330. 5 保健食品检验与评价技术规范（2003年版）M. 中华人民共和国卫生部，2003：25-266 McMichael AJ，Fabre JUS. Monoclonal antibodies in clinical medical M. London：Academic Press INC ltd，1982. 230.7 Syrijala H，Surcel HM , Ilonen J .Low CD4+/ CD8+ lymphocyte ratio in acute myocardial infection J . Clin Exp Immunol , 1991 ,83 :326.8 曹宇，赵祯，张瑶等. 紫外线照射小鼠T细胞CD4和CD8的表达J.中国应用生理学杂志，2002，18(4)：403-405.9 张志远，王海莉，苗明三. 扶正