CN104940958A一种荧光磁性纳米靶向药物及其制备方法VIP

CN104940958A一种荧光磁性纳米靶向药物及其制备方法 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号xx10254971.3 (22)申请日xx.05.19A61K49/12(xx.01)A61K49/00(xx.01)A61K31/4741(xx.01)A61K47/36(xx.01)C09K11/88(xx.01) (71)申请人中南大学地址410000湖南省长沙市岳麓区左家垅 (72)发明人丁萍唐媛杨飞陈翠梅李晶黄瑞雪肖稳 (74)专利代理机构长沙朕扬知识产权代理事务所(普通合伙)43213代理人杨斌 (54)发明名称一种荧光磁性纳米靶向药物及其制备方法 (57)摘要本发明公开了一种荧光磁性纳米靶向药物，由磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒与功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点自组装，其中磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒以Fe3O4为磁核、壳聚糖为骨架材料载体、白屈菜红碱为靶向药物；其中功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点是指以ZnSe为内核、ZnS为外壳，经巯基羧酸类化合物修饰后的ZnSe-ZnS核壳量子点。 本发明方法简便、成本低廉，绿色环保；本发明制备的荧光磁性纳米靶向药物荧光性能稳定、生物安全性好，同时具有磁性材料及荧光材料的优势，可同时实现磁性分离、靶向识别、荧光成像及磁共振成像等多功能。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书2页说明书8页附图2页 (10)申请公布号104940958A (43)申请公布日xx.09.30104940958A1/2页21.一种荧光磁性纳米靶向药物，其特征在于，由磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒与功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点自组装，所述磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒以Fe3O4为磁核、壳聚糖为骨架材料载体、白屈菜红碱为靶向药物；所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点是指以ZnSe为内核、ZnS为外壳，经巯基羧酸类化合物修饰后的ZnSe-ZnS核壳量子点。 2.一种如权利要求1所述的荧光磁性纳米靶向药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤步骤 （1）Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒的制备用缓冲溶液将磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子充分溶胀、洗涤，然后加入白屈菜红碱水溶液，室温振荡孵化，用磁铁分离，得到载药复合物和上层溶液，洗涤、干燥，研磨得到Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒；步骤 （2）功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点的制备将ZnSe-ZnS核壳量子点溶于氯仿中，然后加入含巯基的羧酸类化合物，搅拌过夜，离心除去多余的含巯基羧酸类化合物，将剩余的沉淀洗涤、干燥，即得到所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点；步骤 （3）自组装配制Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶液、功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶液，然后将功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶液滴加至Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶液中，搅拌过夜、沉淀过滤、洗涤、真空干燥，即得到所述荧光磁性纳米靶向药物。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子的制备包括以下步骤将磁性Fe3O4纳米颗粒加入溶解有壳聚糖的乙酸溶液中，加入液体石蜡、斯潘-80，超声分散，加入戊二醛溶液，搅拌反应，过滤，用石油醚洗涤，并用丙酮洗涤脱水，干燥，研磨成流动粉末，即得到所述磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子；所述磁性Fe3O4纳米颗粒与壳聚糖的质量比为1:0.52。 4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述磁性Fe3O4纳米颗粒的制备包括以下步骤将七水硫酸亚铁溶于去离子水中，加入聚乙二醇水溶液，搅拌混匀，于常温下恒温水浴，在搅拌条件下滴加氨水溶液，至溶液pH为910，然后加入双氧水溶液，将混合溶液转移至高压反应釜中，于150170下恒温反应，再用蒸馏水洗涤，离心分离，并用无水乙醇洗涤，干燥，研磨得所述磁性Fe3O4纳米颗粒。 5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述ZnSe-ZnS核壳量子点的制备包括以下步骤将硬脂酸锌溶于甲苯中，通氮气、加热，然后冷却至室温，得到Zn前体溶液；将硫粉溶于三正辛基膦中，通氮气，加热，制得S前体溶液；在氮气保护下，将ZnSe量子点溶液、正庚烷、三正辛基氧化膦和十六烷基胺混合，且控制ZnSeZnS的质量比为1（0.53），加热搅拌，直至正庚烷完全挥发为止，然后一边搅拌一边缓慢加入所述Zn前体溶液与S前体溶液，反应保持温度，然后用甲醇洗涤纯化，沉淀、真空干燥后得到所述ZnSe-ZnS核壳量子点。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述硬脂酸锌的重量份为320420份，所述硫粉的重量份为1624份；将所述硬脂酸锌溶于甲苯中，通氮气、加热至5070；将所述硫粉溶于三正辛基膦中，通氮气，加热至80100；所述加热搅拌的温度为180200；所述反应保持温度为180200摄氏度，时间至少1h。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述ZnSe量子点溶液的制备包括权利要求书104940958A22/2页3以下步骤将二水合醋酸锌溶于去离子水中，搅拌下加入巯基乙酸，用NaOH溶液调节pH为910，通N2除氧；在N2保护且搅拌下，加入NaHSe溶液，使反应体系中HSe-与Zn2+的物质的量之比为128，搅拌反应至少10min后，回流，得到所述ZnSe量子点溶液。 8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述NaHSe溶液的配制包括以下步骤将3756重量份的NaBH4溶于除氧去离子水中，冰水浴冷却，在氮气氛围下，加入3960重量份的硒粉，混合均匀，密闭条件下反应至少0.5h，直至黑色的硒粉完全消失，同时瓶底出现白色晶体，上清液即为所述NaHSe溶液。 9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为戊二醛溶液，pH为68；所述充分溶胀的时间大于10h；所述振荡孵化的时间为24h；所述含巯基的羧酸类化合物为3-巯基丙酸、巯基丁二酸、巯基乙酸、半胱氨酸、2-巯基丙酸、巯基丁酸、巯基戊酸、巯基已酸、巯基庚酸中的任意一种；所述步骤 （2）沉淀洗涤所用溶液为二甲基甲酰胺。 10.根据权利要求29中任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶液是将所述Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶于pH为45的乙酸-乙酸钠溶液中配制得到，浓度为12mg/mL；所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶液是由所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶于pH为26的乙酸-乙酸钠溶液中配制得到，浓度为13mg/mL。 权利要求书104940958A31/8页4一种荧光磁性纳米靶向药物及其制备方法技术领域0001本发明涉及靶向药物领域，尤其涉及一种荧光磁性纳米靶向药物及其制备方法。 背景技术0002纳米载体在构造上由于具有1-100nm的尺寸而拥有独特的物理和化学特性。 它们的高表面积与体积比以及对它们的性能进行调节的可能性，使纳米载体成为成像、诊断和治疗的有力工具。 尽管纳米载体促进了医学的发展，它的一些应用仍旧面临挑战，比如对体内细胞活动的实时监控、对于靶部位的特殊靶向或者药物在靶细胞内的有效传递等。 多功能纳米载体的设计能够明显改善现有的纳米载体特性并帮助克服这些不足。 尤其是随着纳米粒子与恶性肿瘤治疗结合的不断深入,越来越多的纳米粒子将被应用于恶性肿瘤诊断和治疗研究,纳米颗粒将可实现肿瘤患者个性化治疗。 肿瘤无损在位诊断和治疗是关系到人类生命健康的重大科学问题。 因此，研制集靶向标记、药物输送和结果报告等多功能于一体的可降解纳米药物,同时实现无损在位诊断、治疗并实时监测这一系列过程,是医药工作者梦寐以求的目标。 为制备这种智能的多功能药物纳米载体。 而磁性纳米粒子与量子点组装的发展应用有望改进肿瘤检测模式,为高性能靶向诊断需将各种化学分子同时组装到同一纳米粒表面和治疗用纳米药物的发展提供了新的机遇。 0003药物靶向技术是化疗、放疗以及基因治疗肿瘤的研究热点及前沿领域。 xx年Science杂志中报道称，药物靶向技术已经成为肿瘤治疗的主流，在现有众多的靶向药物系统中，磁场导向的磁性药物具有明显的优点可以实现直接静脉注射用药，通过磁场作用富集于靶部位，减轻对人体的毒副作用，因而得到了广泛的应用。 0004磁性药物是一种新型的药物靶向系统，主要是由磁性材料、骨架材料以及抗癌药物三部分构成，抗癌药物和适当的磁性材料通过物理或化学的方法进行包裹或吸附在载体材料上制成具有磁响应性的稳定的药物系统，在体外磁场的作用下聚集于肿瘤靶区，提高靶区药物的浓度，降低药物对非靶区组织的毒性和副作用。 药物在体内通过受控缓释的方式从载体材料中释放，在肿瘤组织的细胞或亚细胞水平发挥药物作用，以达到高效低毒的目的。 目前，最常用的磁性材料是铁氧体类材料，粒径在1-100nm内的Fe3O4具有生物安全性高、磁响应性高等特点，因此常用于生物磁性材料。 0005壳聚糖以及其衍生物具有优良的物理化学性质以及生物特性能拉丝、成膜、制粒，能与多种物质(重金属、脂肪、蛋白质、胆固醇及肿瘤细胞等)结合，细胞毒害性极低，有着良好的生物相容性和可生物降解性，并且能通过化学改性获得特征优良的新型壳聚糖衍生物，改良后的壳聚糖衍生物在靶向抗肿瘤药物领域有着广阔的应用前景。 0006随着生物医疗领域的发展对于材料的依赖性逐步增强，需要制备一种多功能微米到纳米级的材料使靶向载体获得了除精确靶向定位外，还必须整合更加适合靶向药物治疗的新型功能，即在靶向病灶部位的药物控释功能和靶向位置及输送过程中的成像功能。 类似具有靶向定位、成像示踪和治疗试剂的复合智能载体，目前正是材料研究者特别感兴趣的研究方向。 量子点(quantum dot,QDs)作为一类新型的纳米荧光探针,具有荧光效说明书104940958A42/8页5率高、发光覆盖范围广和光学性质稳定等特点,在生命活动监测及长时间活体示踪等方面具有独特的优势。 0007白屈菜红碱(CHE)属于苯并啡啶类季铵碱生物碱，具有显著生理活性和消炎、杀菌等多种药理作用。 同时，白屈菜红碱是一种潜在的具有临床实际应用的蛋白激酶C抑制剂，而蛋白激酶C在促进细胞增殖、抑制凋亡信号转导过程中发挥着重要作用，是肿瘤治疗的靶点，故白屈菜红碱(CHE)是一个很好的抗癌药物。 但由于CHE有较强的细胞毒性；CHE在血液中代谢较快，t1/2较短，需要频繁给药，浪费大；CHE的口感很差，不利于直接口服给药，因此限制了CHE在临床上的应用。 0008故寻找并开发合适的剂型已成为白屈菜红碱药物临床应用的关键。 国内外尚无文献将CHE制成纳米粒以实现其定向输送，减小用药量和毒副作用的报道，因此，如何研制集靶向标记、药物输送和结果报告等多功能于一体的可降解纳米白屈菜红碱抗癌药物，这一直是本领域技术人员长期面临的技术难题。 发明内容0009本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种可同时实现磁性分离、靶向识别、荧光成像、磁共振成像以及释药性能良好的荧光磁性纳米靶向药物，还相应提供一种方法简便、成本低廉、绿色环保、效率高的荧光磁性纳米靶向药物的制备方法。 0010为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种荧光磁性纳米靶向药物，由磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱（Fe3O4/CTS-CHE）载药纳米粒与功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点自组装，所述磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒以Fe3O4为磁核、壳聚糖（CTS）为骨架材料载体、白屈菜红碱（CHE）为靶向药物；所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点是指以ZnSe为内核、ZnS为外壳，经巯基羧酸类化合物修饰后的ZnSe-ZnS核壳量子点。 （采用水相合成法合成了功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点，通过静电自组装标记，制备了具有良好荧光性能和磁性的多功能纳米载药微球）。 0011作为一个总的技术构思，本发明还提供一种上述的荧光磁性纳米靶向药物的制备方法，包括以下步骤步骤 （1）Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒的制备用缓冲溶液将磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子充分溶胀、洗涤，然后加入白屈菜红碱水溶液，室温振荡孵化，用磁铁分离，得到载药复合物和上层溶液，洗涤、干燥，研磨得到Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒；步骤 （2）功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点的制备将ZnSe-ZnS核壳量子点溶于氯仿中，然后加入含巯基的羧酸类化合物，搅拌过夜，离心除去多余的含巯基羧酸类化合物，将剩余的沉淀洗涤（至少3次）、干燥，即得到所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点；步骤 （3）自组装配制Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶液、功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶液，然后将功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶液滴加至基本等体积的Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶液中进行自组装，搅拌过夜（搅拌速度优选为600r/min）、沉淀过滤、洗涤、真空干燥，即得到所述荧光磁性纳米靶向药物。 由实验检测可知，本发明制备得到的荧光磁性纳米靶向药物的荧光效率在12%以上且有强磁性。 0012上述的制备方法中，优选的，所述磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子的制备包括以下说明书104940958A53/8页6步骤将磁性Fe3O4纳米颗粒加入溶解有壳聚糖的乙酸溶液中，加入液体石蜡、斯潘-80（span-80），超声分散（一般至少20min），加入戊二醛溶液（25%），搅拌反应（至少4h），过滤，用石油醚洗涤，并用丙酮洗涤脱水，干燥，研磨成流动粉末，即得到所述磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子；所述磁性Fe3O4纳米颗粒与壳聚糖的质量比为1:0.52。 0013上述的制备方法中，优选的，所述磁性Fe3O4纳米颗粒的制备包括以下步骤将七水硫酸亚铁溶于去离子水中，加入聚乙二醇水溶液，搅拌混匀，于常温下恒温水浴（例如30），在搅拌条件下滴加氨水溶液，至溶液pH为910，然后加入双氧水溶液，使部分Fe(OH)2被氧化为三价铁盐至溶液呈现黑色，将混合溶液转移至高压反应釜中，于150170下恒温反应，再用蒸馏水洗涤，离心分离，并用无水乙醇洗涤，干燥，研磨得所述磁性Fe3O4纳米颗粒。 0014上述的制备方法中，优选的，所述ZnSe-ZnS核壳量子点的制备包括以下步骤将硬脂酸锌溶于甲苯中，通氮气、加热，然后冷却至室温，得到Zn前体溶液；将硫粉溶于三正辛基膦(TOP)中，通氮气，加热，制得S前体溶液；在氮气保护下，将ZnSe量子点（QDs）溶液、正庚烷、三正辛基氧化膦(TOPO)和十六烷基胺(HDA)混合，且控制ZnSeZnS的质量比为1（0.53），加热搅拌，直至正庚烷完全挥发为止，然后一边搅拌一边缓慢加入所述Zn前体溶液与S前体溶液，反应保持温度，然后用甲醇洗涤纯化，沉淀、真空干燥后得到所述ZnSe-ZnS核壳量子点。 0015上述的制备方法中，优选的，所述硬脂酸锌的重量份为320420份，所述硫粉的重量份为1624份；将所述硬脂酸锌溶于甲苯中，通氮气、加热至5070；将所述硫粉溶于三正辛基膦中，通氮气，加热至80100；所述加热搅拌的温度为180200；所述反应保持温度为180200摄氏度，时间至少1h。 0016上述的制备方法中，优选的，所述ZnSe量子点溶液的制备包括以下步骤将ZnAc22H2O溶于去离子水中，搅拌下加入巯基乙酸(TGA)，用NaOH溶液调节pH为910，通N2除氧；在N2保护且搅拌下，加入NaHSe溶液，使反应体系中HSe-与Zn2+的物质的量之比为128（更优选为146），搅拌反应至少10min后，100回流至少15min，得到所述ZnSe量子点溶液。 0017上述的制备方法中，优选的，所述NaHSe溶液的配制包括以下步骤将3756重量份的NaBH4溶于除氧去离子水中，冰水浴冷却，在氮气氛围下，加入3960重量份的硒粉，混合均匀，密闭条件下反应至少0.5h，一般不超过2h，直至黑色的硒粉完全消失，同时瓶底出现白色晶体，上清液即为所述NaHSe溶液。 0018上述的制备方法中，优选的，所述缓冲溶液为戊二醛溶液（5%），pH为68；所述充分溶胀的时间大于10h；所述振荡孵化的时间为时间为24h；所述含巯基的羧酸类化合物为3-巯基丙酸、巯基丁二酸、巯基乙酸、半胱氨酸、2-巯基丙酸、巯基丁酸、巯基戊酸、巯基已酸、巯基庚酸中的任意一种；所述步骤 （2）沉淀洗涤所用溶液为二甲基甲酰胺。 0019上述的制备方法中，优选的，所述Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶液是将所述Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒溶于pH为45的乙酸-乙酸钠溶液中配制得到；所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶液是由所述功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点溶于pH为26（更优选为pH为35，最优选pH为45）的乙酸-乙酸钠溶液中配制得到。 所述乙酸-乙酸钠溶液可以是用164g乙酸钠溶于水后再加84ml冰乙酸，并最终稀释到1L说明书104940958A64/8页7后获得。 0020与现有技术相比，本发明的优点在于 （1）方法简便、成本低廉、绿色环保；早期的量子点是在有机溶剂中制备，其制备条件比较苛刻，原料毒性大，反应步骤也比较复杂，成本较高。 相比之下，本发明方法是在水相中进行，是一种廉价环保的绿色水相合成法，也是一种环境友好、方法简单的沉淀聚合法。 0021 （2）本发明制备了巯基羧酸类化合物修饰的带负电的ZnSe/ZnS核壳型量子点，通过一种直接基于电荷作用的层层静电自组装法，使带负电的ZnSe-ZnS核壳量子点与带正电的磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子（衍生物高分子微球）自组装成磁性荧光的Fe3O4-壳聚糖-CHE-ZnSe/ZnS多功能纳米药物材料，方法简便、成本低廉，绿色环保。 0022 （3）本发明制备的荧光磁性纳米靶向药物荧光性能稳定、生物安全性好，通过以硬脂酸锌和硒氢化钠为前驱体，以巯基丙酸为稳定剂，水相合成了高质量的ZnSe-ZnS核壳量子点。 对量子点行表面化学修饰或特异分子连接后，ZnSe-ZnS核壳量子点的荧光性能稳定，细胞毒性小，生物相容性好，可广泛用于生物活体标记和检测。 0023 （4）与单一功能的荧光材料或磁性材料相比，本发明制备的Fe3O4-壳聚糖-CHE-ZnSe/ZnS荧光磁性纳米靶向药物同时具有磁性材料及荧光材料的优势，可同时实现磁性分离、靶向识别、荧光成像及磁共振成像等多功能。 附图说明0024为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。 0025图1为本发明实施例1中荧光磁性纳米靶向载药微球的扫描电镜照片。 0026图2为本发明实施例1中荧光磁性纳米靶向纳米药物在不同介质中CHE的释放曲线（37）。 0027图3为本发明实施例1中荧光磁性纳米靶向纳米药物对肝癌细胞的抑制作用效果图。 0028图4为本发明实施例1中Hoechst染色24h后肝癌细胞的形态图。 具体实施方式0029为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明作更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。 0030除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。 本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。 0031除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。 0032实施例1一种本发明的荧光磁性纳米靶向药物，由带正电荷的磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱说明书104940958A75/8页8载药纳米粒与带负电荷的功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点自组装，磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒以Fe3O4为磁核、壳聚糖为骨架材料载体、白屈菜红碱为靶向药物；功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点是指以ZnSe为内核、ZnS为外壳，经巯基羧酸类化合物修饰后的ZnSe-ZnS核壳量子点。 其扫描电镜照片如图1所示。 0033本实施例的制备方法，包括以下步骤将2.502g七水硫酸亚铁溶解于30mL的去离子水中，加入10mL浓度为50gL-1的PEG-20000水溶液后，充分搅拌于30恒温水浴，滴加一定量的稀氨水溶液30mL，至溶液pH值为10，然后加入一定量的双氧水溶液搅拌20min。 最后，全部转移至高压反应釜中，于160下恒温反应5h，得磁性Fe3O4纳米颗粒。 0034将0.2g上述制得的磁性Fe3O4纳米颗粒加入溶解有0.2g壳聚糖的5%乙酸溶液20ml，再加入液体石蜡40mL，span-800.5mL，超声分散20min后，再加入3mL25%的戊二醛溶液，机械搅拌反应4h，过滤，用石油醚洗涤，并用丙酮洗涤脱水，干燥，研磨成流动粉末，即得磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子（Fe3O4-CTS复合微球）。 0035准却称取50mg磁性Fe3O4-壳聚糖微球放入100ml锥形瓶中，用20.0ml5%戊二醛磷酸缓冲液（pH6.8）将纳米粒充分溶胀（10h），而后倒出缓冲液。 将溶胀后的磁性Fe3O4-壳聚糖微球用缓冲液洗涤2次。 加入一定浓度的CHE盐酸盐水溶液40.0ml，室温振荡孵化2.5h。 用磁铁分离，得到载药复合物和上层溶液。 以2.0ml超纯水洗涤载药复合物2次。 将载药复合物于60真空干燥10h，研磨后即得Fe3O4-壳聚糖-CHE载药纳米粒。 0036将0.426g（10mmol）NaBH4加入20mL小烧瓶中，再加入2.0mL除氧去离子水，冰水浴冷却，在氮气氛围下，加入0.3948g（5mmol）硒粉，混合均匀，密闭条件下反应1h后即得NaHSe溶液。 0037将2.195g（10mmol）ZnAc22H2O于150mL三颈瓶中，加入100mL去离子水使其溶解，剧烈搅拌下加入0.18ml（24mmol）TGA，用1.0mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH值为9.5，通N2除氧1h；在N2保护且搅拌下，吸取制备的NaHSe溶液1.0mL加入混合液中，搅拌反应10min后，100回流15min，得ZnSe量子点溶液。 0038将0.36g硬脂酸锌溶于2.5mL甲苯中，通氮气，加热到60，然后冷却至室温，得到Zn前体溶液；16mg的S粉溶于2.5mL TOP中，通氮气，加热到90，制得S前体溶液。 在氮气保护下，向三颈烧瓶中加入已经准备好的ZnSe量子点溶液（含20mg ZnSe），同时加入4mL正庚烷、2.5g TOPO和1.5g十六烷基胺。 然后一边搅拌一边将已经制得的Zn前体溶液和S前体溶液缓慢加入三颈烧瓶中，加入时间为1h，保持温度在190200；溶液加入后再反应1h，即得ZnSe-ZnS核壳量子点。 0039将20mg ZnSe-ZnS核壳量子点溶于1.0mL氯仿中，然后加入100L0.1M的巯基丙酸，搅拌过夜，即得巯基丙酸修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点。 0040将磁性Fe3O4/CTS-CHE纳米药物溶解于pH=4.5的乙酸乙酸钠溶液中(164g乙酸钠溶于水，加84ml冰乙酸，稀释到1L)，配制成1mg/mL的纳米药物溶液。 将巯基丙酸修饰的ZnSe-ZnS量子点溶解于PH=4.5的乙酸乙酸钠溶液中，同样配制成1mg/mL的量子点溶液。 往三颈烧瓶中加入50ml纳米药物载体溶液，取50ml量子点溶液(1mg/mL)，缓慢滴加到纳米药物载体溶液中，600r/min，搅拌过夜。 沉淀过滤、洗涤、真空干燥后，即得具有荧光性和强磁性的Fe3O4/CTS-CHE-ZnSe/ZnS荧光磁性纳米靶向药物。 说明书104940958A86/8页90041图2为本实施例中荧光磁性纳米靶向药物在不同介质pH1.0和7.4环境下CHE的释放曲线（37）。 由图可知，CHE药物的释放表现为突释和缓慢释放两阶段模式，释放速率随时间延长而增大，但最后释放速率趋于恒定。 在1h后，Fe3O4/CTS-CHE-ZnSe/ZnS荧光磁性纳米靶向药物在pH1.0和7.4中释放了47.2%和20.6%CHE药物。 120h后，荧光磁性纳米靶向药物在pH1.0和7.4中释放69.2%和45.8%CHE药物。 说明所制的荧光磁性纳米靶向药物具有明显的缓释作用，而且其在酸性介质中的释放速率要大于碱性介质。 这对于所制的荧光磁性纳米靶向药物微球用于癌症的治疗是非常有用的，因为肿瘤细胞所处的微环境pH低于正常细胞的微环境pH。 0042图3为本实施例中荧光磁性纳米靶向药物对肝癌细胞的抑制作用效果图。 由图可知，作用24h，36h,48h,60h和72h时，Fe3O4/CTS-CHE-ZnSe/ZnS纳米药物各浓度组对肝癌细胞HepG2增殖有明显抑制作用，高剂量的抑制作用很明显，并呈剂量和时间依赖性。 0043图4为本实施例中Hoechst染色24h后肝癌细胞的形态图。 由图可知，Hoechst33258染色实验说明Fe3O4/CTS-CHE-ZnSe/ZnS荧光磁性纳米靶向药物能诱导HepG2细胞凋亡。 0044实施例2一种本发明的荧光磁性纳米靶向药物，由带正电荷的磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒与带负电荷的功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点自组装，磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒以Fe3O4为磁核、壳聚糖为骨架材料载体、白屈菜红碱为靶向药物；功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点是指以ZnSe为内核、ZnS为外壳，经巯基羧酸类化合物修饰后的ZnSe-ZnS核壳量子点。 0045本实施例的制备方法，包括以下步骤将2.502g七水硫酸亚铁溶解于30mL的去离子水中，加入10mL浓度为50gL-1的PEG-20000水溶液后，充分搅拌于30恒温水浴，滴加一定量的稀氨水溶液30mL，至溶液pH值为10，然后加入一定量的双氧水溶液搅拌20min。 最后，全部转移至高压反应釜中，于160下恒温反应5h，得磁性Fe3O4纳米颗粒。 0046将0.25g上述制得的磁性Fe3O4纳米颗粒加入溶解有0.3g壳聚糖的5%乙酸溶液20ml，再加入液体石蜡40mL，span-800.5mL，超声分散20min后，再加入3mL25%的戊二醛溶液，机械搅拌反应4h，过滤，用石油醚洗涤，并用丙酮洗涤脱水，干燥，研磨成流动粉末，即得磁性Fe3O4-壳聚糖纳米粒子（Fe3O4-CTS复合微球）。 0047准却称取50mg磁性Fe3O4-壳聚糖微球放入100ml锥形瓶中，用20.0ml5%戊二醛磷酸缓冲液（pH6.8）将纳米粒充分溶胀（10h），而后倒出缓冲液。 将溶胀后的磁性Fe3O4-壳聚糖微球用缓冲液洗涤2次。 加入一定浓度的CHE盐酸盐水溶液40.0ml，室温振荡孵化2.5h。 用磁铁分离，得到载药复合物和上层溶液。 以2.0ml超纯水洗涤载药复合物2次。 将载药复合物于60真空干燥10h，研磨后即得Fe3O4-壳聚糖-CHE载药纳米粒。 0048将0.3785g（10mmol）NaBH4加入20mL小烧瓶中，再加入2.0mL除氧去离子水，冰水浴冷却，在氮气氛围下，加入0.3948g（5mmol）硒粉，混合均匀，密闭条件下反应1h后即得NaHSe溶液。 0049将2.195g（10mmol）ZnAc22H2O于150mL三颈瓶中，加入100mL去离子水使其溶解，剧烈搅拌下加入0.18ml（24mmol）TGA，用1.0mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH值说明书104940958A97/8页10为9.5，通N2除氧1h；在N2保护且搅拌下，吸取制备的NaHSe溶液1.0mL加入混合液中，搅拌反应10min后，100回流15min，得ZnSe量子点溶液。 0050将0.36g硬脂酸锌溶于2.5mL甲苯中，通氮气，加热到60，然后冷却至室温，得到Zn前体溶液；将20mg的S粉溶于2.5mL TOP中，通氮气，加热到90，制得S前体溶液。 在氮气保护下，向三颈烧瓶中加入已经准备好的ZnSe量子点溶液（含20mg ZnSe），同时加入4mL正庚烷、2.5g TOPO和1.5g十六烷基胺。 然后一边搅拌一边将已经制得的Zn前体溶液和S前体溶液缓慢加入三颈烧瓶中，加入时间为1h，保持温度在190200；溶液加入后再反应1h，即得ZnSe-ZnS核壳量子点。 0051将20mg ZnSe-ZnS核壳量子点溶于1.0mL氯仿中，然后加入100L0.1M的巯基丙酸，搅拌过夜，即得巯基丙酸修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点。 0052将磁性Fe3O4/CTS-CHE纳米药物溶解于pH=4.5的乙酸乙酸钠溶液中(164g乙酸钠溶于水，加84ml冰乙酸，稀释到1L)，配制成1mg/mL的纳米药物溶液。 将巯基丙酸修饰的ZnSe-ZnS量子点溶解于PH=4.5的乙酸乙酸钠溶液中，同样配制成1mg/mL的量子点溶液。 往三颈烧瓶中加入50ml纳米药物载体溶液，取50ml量子点溶液(1mg/mL)，缓慢滴加到纳米药物载体溶液中，600r/min，搅拌过夜。 沉淀过滤、洗涤、真空干燥后，即得具有荧光性和强磁性的Fe3O4/CTS-CHE-ZnSe/ZnS荧光磁性纳米靶向药物。 实施例3一种本发明的荧光磁性纳米靶向药物，由带正电荷的磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒与带负电荷的功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点自组装，磁性Fe3O4-壳聚糖-白屈菜红碱载药纳米粒以Fe3O4为磁核、壳聚糖为骨架材料载体、白屈菜红碱为靶向药物；功能修饰的ZnSe-ZnS核壳量子点是指以ZnSe为内核、ZnS为外壳，经巯基羧酸类化合物修饰后的ZnSe-ZnS核壳量子点。 0053本实施例的制备方法，包括以下步骤将2.528g七水硫酸亚铁溶解于30mL的去离子水中，加入10mL浓度为50gL-1的PEG-20000水溶液后，充分搅拌于30恒温水浴，滴加一定量的稀氨水溶液30mL，至溶液pH