树莓英文翻译.doc

果胶酶对草莓和树莓汁中特定多酚化合物的影响摘要：为了评价商业果胶酶对多酚化合物（花色苷、黄酮类化合物、鞣花酸）含量的影响，通过高效液相色谱（HPLC）和光谱阵列检测的方法分析经果胶酶处理的草莓和树莓汁。每一种水果都有一个特定的多酚化合物的组合，有助于鉴定酶的作用。分别在酶处理2、4、6小时后检测多酚化合物的稳定性。果胶酶对酚类化合物含量的影响与水果的种类和作用的时间有关。用果胶酶Pectinex BE 3-L, Rohapect B1L, Rohament MAX 和 Pectinex2 3XL处理6小时后，检测到树莓汁中花色苷减少了20%，这个结果证实了果胶酶具有-葡萄糖苷酶的活性的假定。另一方面，在草莓的实验组中，鞣花酸的浓度上升（达到19mg/L，用果胶酶Pectinase LM,处理6h)，但是黄酮的含量下降了（减少了35%，用果胶酶Pectinase LM, 处理6h）。果胶酶Rohapect MB 是唯一一种能够大大提高草莓中槲皮素衍生物含量（36mg/L）的酶。关键字：果胶酶 多酚化合物 质量控制 红色水果引言植物酚类化合物有不同的化学、生物及药理特性。特别是，黄酮类化合物，如花色苷，槲皮素，山奈酚和鞣花酸可以抑制癌症发展过程中的不同阶段。在草莓和树莓中发现的花色苷、黄酮（槲皮素和山奈酚衍生物）以及鞣花酸衍生物以糖基化、甲基化、甲氧基化和酰基化的形式存在，这与植物和动物体内的理化特性有所不同。天然产生的黄酮和花色苷可以用来鉴别水果产品的真伪，即使食品和饮料的成分会受到加工过程和储存条件的影响.用于加工红色水果的果胶酶提高了水果的出汁率，但是在某些情况下，一些酶能够水解草莓和树莓汁以及樱花花蜜中的花色苷。花色苷，通过水解去除糖苷，转化为单糖苷和苷元。花色苷的水解影响产品的颜色，事实上，苷元不稳定，很容易转化为褐色聚合物或无色的化合物。此外，原花青素的量的变化会给判断红色水果汁的真实性带来一些问题。另一方面，树莓加工过程中果胶酶的使用降低了黄酮含量，而鞣花酸衍生物的量随提取技术的不同而不同。 高效液相色谱法是分析酚类化合物含量的合理方法，但是由于缺乏特定的标准，致使它们的鉴别很复杂。然而，光谱阵列检测法的使用，为高效液相色谱法分析酚类化合物提供了有效的帮助。此外，酶处理后的糖苷酶的活性可通过高效液相色谱法测定。 我们的目的是研究7种商业果胶酶对草莓和树莓汁中的花色苷、黄酮和鞣花酸衍生物含量的影响。样品的制备购买草莓和红树莓。实验步骤如图下图所示。新鲜水果制汁均质浆液巴氏灭菌（85，2min）冷却 均质 加果胶酶 不加酶 处理2,4,6h,45 巴氏灭菌， 85，2min 冷却 离心，15000rpm，15min 过滤 果汁 高效液相色谱分析实验材料与方法样品制备新鲜的草莓和树莓各2kg经过打浆和均质制成浆状。浆液用微波炉在85下杀菌2min，然后用水冷却20min,最后再经过30s的均质处理。将50g的草莓和红树莓浆倒入250ml的锥形瓶中，然后加入果胶酶溶液（实验组），充分混合，在45条件下处理6小时。对照组在45条件下不加酶处理6小时。分别在第2、第4、第6小时，将实验组和对照组在85热处理2min，然后用水冷却。用超速离心机将果汁在离心加速度为27716g的条件下离心15min，取上清液用0.22微米的醋酸纤维素膜过滤，然后注入HPLC系统。果胶酶评价以7种下果胶酶果胶酶的作用：Pectinex BE 3 - L（诺和诺德发酵有限公司，Dittingen，瑞士），Rohapect MB，Rohapect B1L，Rohament MAX（罗伊HM，Darmstad，德国），Grindamyl Pectinase LM，Grindamyl Pectinase LX，Pectinex 3XL（丹尼斯克，Brabrand，丹麦）。酶的使用按照生产者建议的平均剂量，用量在3g/100kg果浆至30g/100kg果浆之间。高效液相色谱分析分析草莓和树莓汁时，采用的是戴安DX500色谱系统（戴安公司，桑尼维尔，加利福尼亚，美国），系统配有一个泵（GP 40 LC），一个“推动循环”自动进样器喷射系统（AS 3500），一个光谱阵列探测器（UVIS 206），一个温度控制模块（AS 3500）和一个Peaknet软件的数据采集站。 将花色苷进行梯度洗脱，如前所述（Versari等，1997），用Nucleosil120 C18-3ODS（Hichrom有限公司，伯克希尔英国）反相色谱柱（2503.9毫米，5微米）。花色苷可见光谱在370至600 nm之间，在波长为505和520 nm处检测天竺葵和矢车菊素衍生物。 对黄酮和鞣花酸衍生物进行分析，如前所述（Versari等，1997）。使用Hicarbosphere 3ODS（Hichrom有限公司）反相色谱柱（1504.6毫米，5微米）。这些化合物的紫外光谱在200至370 nm之间，在280和355 nm处检测两个类化合物。标准天竺葵-3-葡萄糖苷，槲皮素- 3 -葡萄糖苷，矢车菊素-3 - 葡萄糖苷，槲皮素-3 -芸香糖甙，槲皮素- 3 -鼠李糖苷，山柰酚和鞣花酸被用来为色谱峰的识别和量化标准。色谱峰识别是以保留时间（Rt）和HPLC的紫外 - 可见光谱记录分析为基础，这些研究结果也与文献（Henning，1981年；rommel和Wrolstad 1993年； Boyles和Wrolstad，1993年；bakker等人，1994年； Versari等，1997）相符。矢车菊素-3 - 葡萄糖苷和天竺葵- 3-葡萄糖苷的校准曲线用于定量分析花色苷。由于鞣花酸溶解度低（Rommel和Wrolstad，1993b）槲皮素- 3 -芸香糖苷用于定量分析所有其他酚类化合物。统计分析酶处理的实验设计是随机的，使用STATISTICA5.0线性拟合模型分析实验数据。实验时，每次用某一种酶分别处理草莓和树莓浆，并重复进行三次。结果与讨论高效液相色谱分析高效液相色谱法测定草莓汁概况：图2（A）表明三种花色苷被洗脱出来，它们是：天竺葵- 3-葡萄糖苷，矢车菊素-3 - 葡萄糖苷和天竺葵- 3 -芸香糖苷。此外，三个槲皮素衍生物（1,4,5号峰），鞣花酸（3号峰），鞣花酸衍生物（峰第2号）也从草莓之中检测出来。如图2（B）。根据Henning（1981年）的研究，我们检测出主要槲皮素衍生物是槲皮素- 3 -葡糖苷（4号峰），槲皮素- 3-葡萄糖苷（5号峰）。另一方面，树莓汁图3（A）表明两个主要色素确定为：矢车菊- 3 槐糖苷（CY -3- sopho）和矢车菊苷。此外，图3（B）表示检测出四个主要槲皮素衍生物（峰1，2，6和峰7），鞣花酸（峰5）和鞣花酸衍生物（峰3和峰4）。据Rommel和Wrolstad（1993），我们确定主要槲皮素衍生物为槲皮素- 3 -葡糖苷（峰6）和槲皮素-3-葡萄糖苷（峰7），如图3（B）。即使草莓和树莓的HPLC图谱中出现了别的色谱峰，同时洗脱色的色谱峰阻碍了这些化合物的识别（例如图片2（B）中的6号峰）， 草莓和树莓果汁概况图2（b）。此外，考虑到的高效液相色谱法检测槲皮素- 3 -芸香糖苷的下限为0.4mg/L，小峰的确定是不可能的。 黄酮和鞣花酸的组成并没有进一步确定，但他们可能是甲基化，糖基化或甲氧基化的黄酮，鞣花酸衍生物。草莓和树莓果汁中花色苷的形式（图2（A）和图2（B）提供了一种衡量在果胶酶作用下-葡萄糖苷酶的活性问题。果胶酶处理步骤酶处理2小时或将处理时间延长至4或6小时以测试黄酮类化合物的稳定性和糖苷酶的活性。分别测定草莓和树莓花色苷、黄酮、鞣花酸在反应2小时、4小时、6小时的含量，与空白组对照。草莓 使用不同种类的酶，草莓中花色苷的含量相同（表一）。在2h时，空白组和实验组没有差别。色素含量如下：矢车菊素-3 - 葡萄糖苷19-20mg/L，天竺葵- 3-葡萄糖苷167-273mg/L，天竺葵- 3 -芸香糖苷28-30mg/L。在6h后，实验组合对照组差异出现。由于实验易变性，酶对色素破坏可能被掩盖。然而，这些结果与Wightman和Wrolstad1996年的报告一致，他们研究只有一种果胶酶（按推荐剂量进行了23次以上的检测）能够对-葡萄糖苷酶的活性产生显著影响。重要的是， Jiang et al.,1990的文献说明-葡萄糖苷酶会造成花色苷的破坏只有在超过推荐使用剂量时才会发生，或者是果胶酶的活性与-葡萄糖苷酶不同。 草莓实验组中，槲皮素衍生物的含量随着酶的功能和处理时间的不同而不同（表一）。Pectinex BE 3L, Pectinex B1L 和 Rohament MAX 处理的实验组显示槲皮素衍生物的含量呈缓慢增长的趋势（3846mg/L）；Rohapect MB, Pectinase LX 和 Pectinex 3XL处理的实验组，槲皮素衍生物的含量基本稳定（3442 mg/L）。The flavonols content varied within the range of the repeatability test.然而，经过6h的酶处理，酶Pectinase LM 水解掉了4号色谱峰（表一）。因此，高效液相色谱图像的描绘发生相应的修改，槲皮素衍生物的含量（27 mg/L）与对照组（43mg/L）相比，降低了35%。这个变化高于重复试验（CV=13%）。关于高效液相色谱法分析酶处理对草莓黄酮影响的文献很少，Pectinase LM 的糖苷酶活性可能只是推测。 草莓汁实验组检测到的鞣花酸衍生物的含量（见表1）始终高于对照（68mg/L）。实验组中，鞣花酸衍生物的最小值为8mg/L（Rohapect B1L，Pectinase LX和Pectinex23XL，2 h）；最大值是19mg/L（Pectolase LM，6 h）。用酶Pectinex 3L，Pectinase LM，Pectinase LX和Rohament1处理的实验组，鞣花酸衍生物含量（表1）呈线性增加。特别是，草莓鞣花酸衍生物的高效液相色谱曲线3号峰（鞣花酸）增加。这些结果可以解释为位于细胞壁的鞣花酸水解释放。红树莓红树莓实验组（表一）中个别色素的含量和花色苷的总量随处理条件不同而发生变化。然而，个别花色苷的含量保持不变。用果胶酶Pectinase LM 处理2h后，矢车菊-3-糖槐苷的含量最大（316mg/L），用果胶酶Pectinase 3XL 处理4h后，矢车菊-3-糖槐苷的含量最小（254mg/L）。矢车菊-3-葡萄糖苷的含量在126154mg/L（空白组，2h；实验组Pectinase LM 处理2h）。空白组色素的含量随时间的增加而增加（表一）；花色苷的总量从2h的391 mg/L上升到6h后的462 mg/L。果胶酶的使用可以分为两组：Rohapect MB, Pectinase LM 和 Pectinase LX的使用，结果显示花青素的总量始终保持在较高水平（在289-306mg/L之间）；Pectinex BE 3-L， Rohapect B1L，Rohament MAX 和 Pectinex 3XL的处理结果显示总花色苷的含量有明显降低，分别降低了21%、19%20%、20%。根据文献资料（Jiang et al.,1990; Wrolstad et al., 1994），这些结果可能表明商业果胶酶具有-葡萄糖苷酶的活性。相比于草莓汁，果胶酶在树莓汁中具有更高的花色苷水解活性。根据文献，可能会提出以下假设：（1）许多酶制剂会提高果汁中色素的含量，这会抵消由于果胶酶具有的糖苷酶活性造成的花青素的破坏（Wightman 和 Wrolstad, 1995）；（2）存在竞争性抑制可缓解花色苷的水解（Aryan, 1987）；（3）苷元的亲水性增加了酶的亲和能力（Pi.aut et al., 1994）。 树莓汁中槲皮素衍生物的总量在27-36mg/L之间（表一）。这个结果与Rommel 和 Wrolstad 1993年的研究一致。在实验过程中，黄酮含量几乎不变：在本实验条件下没有检测到果胶酶具有的水解活性。酶Rohament MB（表一）的使用，是槲皮素衍生物的总量显著增加（36mg/L）。 树莓汁中鞣花酸衍生物的含量（表一）在4-11mg/L之间（Rohapect MB ，Pectinase LM, 4h，6h）。这个结果与Rommel 和 Wrolstad 1993年的研究一致。两种酶处理：Pectinase LM 和 Pectolase LX，减少了鞣花酸衍生物的含量。这个结果可以证明如Rommel 和 Wrolstad所述的果胶酶具有水解鞣花酸的活性。结论草莓或树莓汁可用黄酮类化合物的高效液相图谱来表示。分类化合物可以用作果汁真实性检验的一个标志。它们的不稳定性可能限制它们的效用。果汁的种类、酶的种类及处理时间影响果汁的组成。再推荐剂量内使用果胶酶只会引起草莓中花青素的少量损失。然