健脾消积口服液的研制.doc

目录摘要.1英文搞要.21. 前言.32. 材料与仪器.42.1药材.42.2仪器.43. 健脾消积口服液研究方法设计.53.1药材制备及设定评价标准.53.2对健脾消积口服液有影响的各单因素考察.63.3正交设计研究健脾消积口服液的工艺.104. 健脾消积口服液质量标准初步研究.135. 讨论.16结论.19参考文献.20致谢.22健脾消积口服液的研制摘要：目的 分析处方的的合理性与观察理气健脾汤临床治疗功能性消化不良患者疗效和安全性方法：利用百度查找处方的作用，再取体质量适合的一定数量的小白鼠随机分分组。结果：健脾消积口服液对利血平所致的“脾虚”症状有明显的改善作用。结论：健脾消积口服液(1ml含生药量1g)具有健脾助运、消食化积之功效,关键词：消化不良；中医药疗法；理气健脾汤doi：103969jissn10038914201009074 文章编号：10038914(2010)一09144502Clinical rvation on Efect of Jianpi Xiaoji Oral Liquid ineating 40 Patients、vitlI Hepatocarcinoma Stage、llIfor Supplementary IIealment HUANG Zhifen，LI Han-zhong，SHI Zhiyan，et al Department ofTraditional Chineseand Western Medicine，Tumor Hospital，Guangxi Medical University，Nanning(580021)objectiveTo study the clinical effect of Jianpi Xiaoji Oral Liquid(JXOL)in treating patients with latestage hepatocarcinoma for supplementary treatmentM ethods：Seventyfive patients were randomly divided intothe treated group(40 patients)and the control group(35 patients)Both groups received the same westernmedical treatment，including the supporting therapy and analgesia，to the treated group JXOL was addedTheshortterm effect，quality of life，changes of TCM Syndrome and immunologic criteria were observedResults：The complete remission(CR)rate in the treated group and the control group was 5 and 0 respectivelystablerate was 625 and 371 respectively，quality of lire：iiaproving rate was 475 and 257 ，TCM Syndrome improving rate was 80 and 543 respectivelythere was significant difference in co-nparison of thetwo groups(P005)After treatment，the criteria(CD3，CD4，CD4CDs ratio)，except CDs，improued significantly inthe treated group(P005 or P001)and were better than those in the control group(P005 or P005)，而C因素的差异仅对总黄酮指标总多糖和总黄酮为处方药材中的有效部位，药理作力。总固体物中既含有效成分又有无效成分，其作工艺条件为C3A2Bl，即加13倍水，煎煮三次，每次05h。4讨论正交试验结果显示：煎煮时间越长，有效成分含高。这表明煎煮过程中制剂所含有效成分有一定损失。故煎煮时间不宜过长，而宜短时间、多次煎煮。其原因可能是有效成分受温度的影响或是各化学成分之间的相互作用，有待进一步研究。表二：正式实验结果 因素实验号总固体总多醣总黄铜ABCD1111177.77676.722.25121222262.16952.452.93761333308.38766.493.26512123238.484 72.25 2.92982231318.77192.90 3.77972312180.28064.531.87693133267.67880.22 3.03123213146.7753.661.4493321296.182 79.86 2.50863.3 正交设计健脾消积口服液研究的工艺消食口服液中的黄芪、白术、甘草进行定性鉴别：1. 含量测定2. 总多糖的测定3. 标准品溶液的制备：精密称取105oC干燥至恒重的葡萄糖20.6mg，加水溶解并定容在250 ml容量瓶中，摇匀即得 312供试品溶液的制备：精密吸取样品液20 ml于10ml离心管中，以中性氧化铝2g吸附，用80乙醇洗涤4次，每次8ml，离心10rain，弃去洗液，残渣用沸水提取5次，每次5ml，合并水提液置250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀即得。 313标准曲线的制备：精密吸取标准品溶液00，02，04，06，08，10，12，14ml，置20ml试管中，分别加水补至20ml，再分别加人6苯酚14ml，摇匀，等充分混合后，再迅速滴加浓硫酸55 ml，摇匀，室温放置30rnin，于紫外分光光度计在4901-1111处测吸收度，以标准品溶液加人体积为横坐中药材第27卷第11期2004年11月。线的回归方程为：A=05405V一00167(r=09994)。4. 重现性试验：分别吸取标准品溶液10ml5份于试管中，同前操作，结果RSD=278。5. 样品含量测定：取同一批样品，同法制备供试品溶液5份，吸取04m1分别置于20ml试管中，按标准曲线的制备项下“分别加水补至20ml”起操作，测其吸收度，再根据回归方程求得总多糖的百分含量，结果见表1样品中总多糖含量测定结果6. 加样回收率试验：精密吸取已知葡萄糖含量的样品液20ml，分别加人不同量的葡萄糖，以下按供试品溶液的制备和样品含量测定项下操作(n=5)，结果平均回收率为9517，RSD=226。7. 总黄酮的测定8. 标准品溶液的制备：精密称取105干燥至恒重的芦丁对照品3986mg于200ml容量瓶中，加60乙醇适量水浴上微热溶解，再加60乙醇至刻度，摇匀即得。9. 供试品溶液的制备：精密吸取样品液20ml于10ml容量瓶中，加无水乙醇至刻度，边加边振摇，等沉淀完全后，移至10ml离心管中，离心10rain，取上清液即得。10. 标准曲线的制备：精密吸取标准品溶液00，10，20，30，40，50，60，70ml于25ml容量瓶中，分别加人5亚硝酸钠10ml，混匀，放置6rain，然后加人10硝酸铝10ml，混匀，再放置6rain，加入1molL氢氧化钠溶液100ml，用60乙醇稀释至刻度，混匀，放置15rain，于510Flnl处测吸收度，以标准品溶液加人体积为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，并求得标准曲线的回收方程为：维普资讯A=0100357V一000757l(r=09999)。11. 重现性试验：分别吸取对照品溶液30ml5份置25nl量瓶中，同前操作，结果RSD=0623。12. 样品含量测定：取同一批样品，同法制备供试品液5份，精密吸取40ml于25ml容量瓶中，按标准品方法显色，于510nrn处测吸收度，再根据回归方程求得总黄酮的百分含量，结果见表2。表2样品中总黄酮含量测定结果13. 加样回收率试验：精密吸取已知黄酮含量的样品液20ml，分别加入不同量的芦丁对照品，以考证下按供试品溶液的制备和样品含量测定项下操作(n=5)，结果平均回收率为98046，RSD=216四健脾消食口服液质量标准初步研究1材料与方法11材料消食口服液由武汉市某保健品有限公司提供产品批号20000111，规格250ml瓶。产品原料主要为鸡内金、麦芽、神曲、党参、黄芪、谷芽、陈皮、自术、厚朴、山楂、黄苓、黄莲、炒枳壳、甘草、木通等中药材。12试验动物昆明种小鼠，体重1822g，由湖北省医学实验动物中心提供，批准号为鄂动医管字第19一OO7号。Wistar大鼠，体重8O100g，由湖北省医学实验动物中心提供，批准号为鄂动医管字第19一OO8号。13样品处理受试物直接供急性毒性试验、精子畸形试验、微核试验、3O天喂养试验等灌胃使用。14检测仪器血细胞分析仪、sABA一18全自动生化分析仪。15方法 151急性毒性实验用体重1822g的小白鼠2O只，雌雄各半。按15mlkg体重(O15ml10g体重)经口灌胃小鼠，灌胃前停食16小时，连续观察1周，并记录动物中毒症状及死亡情况。 152骨髓嗜染红细胞微核实验选用昆明种小鼠体重2428g，雌雄各35只。动物按体重随机分成7组A组为阴性对照组，G组为环磷酰胺阳性对照组，B、c、D、E、F组为试验组。动物经口灌胃两次，间隔24小时，于第2次灌胃6小时后处死动物，取胸骨骨髓涂片，Giemsa染色阅片。每只动物油镜下观察1000个嗜多染红细胞，并记录微核形成率。 153精子畸形试验选用昆明种雄性小鼠，体重2530g共3O只。动物按体重随机分成5组，A组为阴性对照组E组为环磷酰胺阳性对照组B、C、D组为受试物试验组。动物经口连续灌胃5天后，再继续喂养3O天，处死动物，取两侧副睾涂片，伊红染色。每只动物高倍镜下观察1000个精子记录畸形精子数。 154Ames试验采用经鉴定符合生物学要求的鼠伤寒作者单位：430079武汉湖北省卫生厅卫生监督局(尹章汉)；湖北省疾病预防控制中心(许四元、樊柏林、蔚茂)沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验；采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆作为体外活化系统(+S9)。受试物分为3个剂量组，每皿加入量为05ml。同时设置空白及阳性对照组。采用平板掺入法记录二次重复的平行样品结果。 15530天喂养试验选用动物Wistar大鼠，体重8O100g，雌雄各半，共8O只。随机分为4组，即受试物低、中、高剂量组和空白阴性对照组；受试物采用经口灌胃，高剂量组分1日多次灌胃，对照组同时给予等量蒸馏水，连续灌胃3O天，然后观察一般临床症状，记录并计算体重和食物利用率，测定血液常规及血液生化指标，同时进行大体解剖检查，并对心、肝、脾、肺、肾等主要器官进行病理学检查，记录并计算脏器称重和脏器系数。 156统计方法采用及ttest。2结果21急性毒性实验经1周观察，两种性别的老鼠无死亡，均未出现任何中毒症状LD。15mikg体重。按急性毒性分级该受试物属无毒级类物质。22微核实验结果见表1。表1消食口服液微核试验结果删旒，观效微率由表1可见各实验组与阴性对照组结果比较，差异无显著性；表明该受试物骨髓微核试验结果为阴性。23精子畸形试验结果见表2。表2消食口服液小鼠精子畸形率结果-+-s维普资讯湖北预防医学杂志2003年第14卷第6期由表2可见各实验组与阴性对照组结果比较，差异无显著性，表明该受试物精子畸形试验结果为阴性。五讨论5.1正交试验结果显示：煎煮时间越长，有效成分含量越低；煎煮次数越多，水提液中有效成分含量越量越低；煎煮次数越多，水提液中有效成分含量越高。这表明煎煮过程中制剂所含有效成分有一定损高。这表明煎煮过程中制剂所含有效成分有一定损失。故煎煮时间不宜过长，而宜短时间、多次煎煮。其原因可能是有效成分受温度的影响或是各化学成分之间的相互作用，有待进一步研究。 基质种类选择当聚乙二醉(PEG)的分子量大于1000时，呈固态，PEG4000与PEG6000的熔点分别为4853和5560，其本身无生理作用，化学稳定性好，易溶于水，可用以从中释放水溶性或油性药物，对药物有助溶作用，同时还能吸附部分液体，是目前较为理想的一类水溶性基质。PEG6000是常用的水溶性固态基质，因其熔点低，极易与药物熔融成固体分散体，故适于药物的溶解、熔融、滴制和成形。PEG6000还可使整个工艺简化，产品质量和药效得以优化。在考察基质种类时，大量的文献都是研究PEG4000、PEG6000或两者的混合物对滴丸的影响。但对于葛根芩连滴丸，上述研究方向都会出现一个问题，就是会有一个较明显的小孔存在，而且在滴丸表面会有大量的裂纹状纹路。这会使得无法搽干净小孔里面的硅油，而且裂纹状纹路会使滴丸在一天以后裂碎成数块碎片。严重地影响了滴丸的质量，以及阻碍了葛根芩连滴丸的发展。以PEG4000和PEG6000的混合物为基质，可向其中加入吐温80、司班80等乳化剂，加入后，滴丸小孔消失，裂纹状纹路也消失，但滴丸呈现不规则形状，稍压即扁，易于互相粘连；也可向其中加入少量水，随着水含量的增加，滴丸小孔逐渐变小变浅，碎裂期也逐渐延后，但当水量过多时，滴丸硬度下降，形状开始变得不规则，表面开始粘连，对加水量难以把握及控制；而当向其中加入少量的PEG400时，裂纹状纹路消失，小孔变浅，是目前所得滴丸效果最好的一个，但PEG400是液体，加入后硬度会有所下降，因此，就以PEG400与PEG6000的混合物为基质，适当增加PEG6000的含量。5.2 不同滴丸间的比较为了考察自制滴丸与市售滴丸之间的差别，特从市场上购回一丹参滴丸进行考察，所得结果如表所示。由表可见，两滴丸的硬度差别不大，丹参滴丸由于早已批量生产，技术及仪器或其他方面较成熟，圆整度较好；但也因其为大批量生产，相对于科研的少量制备，对每粒滴丸重量的控制不及后者，故丹参滴丸的丸重变异系数较大；丹参滴丸的平均丸重较小，所以其溶散时限较小。从总体观察，自制葛根芩连滴丸与市售丹参滴丸的差别不大，可达到生产要求。表11 两批滴丸外观质量检查批次圆整度平均丸重（mg）丸重变异系数溶散时限（min）硬度葛根芩连滴丸9.33丹参滴丸9.625.3 TLC鉴定中提取方法的确定2005版药典葛根芩连片中有关葛根及黄连项下提取方法并不适合滴丸中相关成分的提取，PEG400的水溶性及脂溶性均较好，极易溶于水和甲醇中，所得的供试品很粘稠，展开距离变短，各成分难以分开。因此，得另行选择提取方法。药典中对葛根使用乙酸乙酯超声提取，但在现实操作中，此方法得到的供试品葛根素含量很低，斑点亮度不明显，改用甲醇提杂质较多。参考其他文献后确定了4.1.2项的提取方法。根据盐酸小檗碱不溶于水的性质，可向水中加入适量的盐酸，并分离沉淀物，用含氨水的甲醇再次溶解。如此就可把PEG400溶于水中过滤弃去，很大程度上地减少了杂质的干扰，有利于薄层鉴定。而对于黄芩苷的提取，药典上使用乙酸乙酯超声提取，且PEG400等基本不溶于乙酸乙酯，因此提取液中杂质含量低，所得到的供试品展开效果较好。5.4 存在问题与解决方法 就目前最优工艺所制备的滴丸，因使用了液态基质PEG400，且结合南方潮湿的天气，使滴丸暴露在空气中时极易吸潮，不利于滴丸的生产、运输、携带与服用，对葛根芩连滴丸的推广起到了极大的阻碍作用。对此，在生产上，除了各个工序要保持环境干燥外，最有效的方法就是在滴丸的表面包上一层防水薄膜，并定量小量干燥密封包装，以期避免滴丸长时间地暴露在空气而影响疗效和口服效果。结论健脾消积口服液能改善儿胃肠道功能，促进消化吸收同时对肝癌患者细胞免疫功能的恢复有促进作用。治疗组治疗后患者的IgA、IgG明显改善,NK细胞活性增高,与治疗前比较差异均有显著性,而对照组上述指标则有恶化趋势。能改善患者的临床症状,提高生活质量,延长生存期,并有稳定瘤体的作用,有效地控制及延缓病情发展。经鉴定委员会评审认为该课题研究成果达到国内同类研究先进水平。健脾消积口服液广泛应用于肝癌、胃癌、食管癌、结(直肠)癌、胰腺癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌等恶性肿瘤的辅助治疗