骨髓移植HLA基因分型程度探讨.doc

骨髓移植HLA基因分型程度探讨286综述钚主垦苤查生旦第l5卷第4期ChinJBloodTransfusion,August,2002,Vo1.15,No.4骨髓移植HLA基因分型程度探讨赵桐茂(美国国立卫生研究院)关键词:骨髓移植白细胞抗原基因分型/HLA血清学分型/LA中图分类号:R457文献标识码:C文章编号:1004549X(2002)04028603自20世纪90年代末期起,HLA基因分型技术日趋成熟.由于HLA基因分型方法比传统的HLA血清学分型方法准确,故已取代后者并被广泛用于骨髓移植中的HLA分型.根据HLA基因分型的精细程度,一般被分为低分辨分型和高分辨分型两种.低分辨分型是指被鉴定的等位基因相当于HLA抗原分解物(split)水平,即通常所说的HLA亚型(即组基因).在wH0基因命名中,HLA亚型相当于星号后2位数的水平.高分辨分型是指精确到核苷酸顺序水平,即wH0命名的星号后4位数.有临床资料表明,骨髓移植供者和受者的HLAA,B,DR抗原相合程度越高,发生移植物抗宿主反应(GVHD)的机会越低,移植存活率也高.对于骨髓移植,HLA基因分型要精细到什么程度?是否分得越细越好?与HLA特异性抗原的对应关系如何?这些问题不仅关系到临床上如何合理地选择骨髓供者,以期达到最佳移植效果,而且涉及到由无血缘关系的随机人群组建的骨髓库如何”恰如其分”地对供者做HLA基因分型.国际知名HLA专家,脐带血库创始人之一Rubinstein最近也提出,”骨髓移植HLA配型要配到什么程度才足够?”的问题.目前,中华骨髓库,中国国内大多数地方骨髓库以及临床骨髓移植也存在选择HLA基因分型精细程度的问题.为此,笔者将有关资料综述如下,旨在为中国同道制定适合中国国情的骨髓移植HLA基因配型标准提供一些参考.生相应HLA抗体,这些抗体是鉴定HLA抗原的基础.用于血清学分型的HLA抗血清,无论是同种抗体还是异种抗体,都是通过HLA抗原或HLA多肽不合的免疫刺激而产生,因此,不同的HLA抗原,反映出免疫学上的差异.而HLA基因分型是以受检者韵基因组DNA为检材,使用人工合成的寡核苷酸探针或引物,通过体外扩增并鉴定特定的HLA基因片段.不同的HLA等位基因反映出遗传学上的差异,即DNA核苷酸碱基顺序排列的差异.因此HLA基因分型技术可以在DNA水平上鉴定全部HLA分子变异体,而HLA血清学分型技术只能检测出其中一部分变异体.由于骨髓移植效果和供受者的HLA抗原配合程度有关,而HLA基因分型结果不能直接代表在移植排斥反应中被免疫系统识别的HLA抗原,因此两者间需要一个转换,以便赋予HLA基因分型结果以免疫学意义.为此美国国家骨髓供者计划(NMPD)和美国加州大学(uCLA)国际细胞交换计划通过世界范围内的大规模对比试验,建立起HLA等位基因和HLA抗原特异性之间的对应关系,以字典形式发表并不断更新.根据HLA字典2001,大约70%的等位基因确立了和抗原特异性的对应关系.其余30%尚未建立对应关系,不过他们都属于基因频率<1/10000的罕见基因_2,临床应用价值较低.使用HLA字典,可以很方便地将HLA基因分型结果转换为HLA抗原特异性.1HLA等位基因和HLA抗原特异性的对应关系2HLA基因配合供者的数量远低于HLA抗原配合供者HLA血清学分型和HLA基因分型结果的生物学意义绝然不同.HLA血清学分型是使用HLA抗体鉴定淋巴细胞表面上的HLA抗原.HLA抗原是一种蛋白质分子,在输血,器官移植或妊娠等过程中,被宿主免疫系统所识别,并产骨髓移植供受着”HLA配合”的标准,在两种HLA分型方法中不尽相同.从HLA字典中可见,每种HLA抗原特异性都是独一无二的,但相应的HLA等位基因可多可少.比如HLADR10特异性只对应HLADRB1*1001一种等位基F:C合格率只有50%.改为每隔2h取血1次后,F:C合格率可达85%以上.5成效自1997年10月2000年12月,本站利用流动献血车共接受无偿献血65040人次,通过对流动献血车血液采集进行严格的质量管理,有力地保证了临床输血的安全有效.例如,在开展献血者的HBsAg快速筛查前的1997年,血液检验结果合格率只达79.04%,其中由于HBsAg阳性淘汰率达11.11%;19982000年开展初筛后合格率分别为89.2%,91.39%,93.70%,HBsAg阳性率分别为4.32%,2.0%,1.65%.采血人员手指细菌培养检测,2000年合格率达100%;采血环境方面,2000年献血车空气细菌培养合格率95%;采血台面细菌数监测的合格率100%;近年来,我们采集的血液质量逐年提高,提供临床使用的血液从未因质量问题发生过医疗纠纷等情况,取得较好的社会和经济效益.(20010423,20020500修回)本文编辑:刘晓明主垦堕盘查堡旦筮鲞第朔ChinJBloodTransfusion,August,2002,Vo115,No.4因.而HLA-DRll特异性对应HLA.DRB1*1101.1102.1103等21种等位基因l2J.因此在骨髓移植患者选择供者时,根据HLA抗原配合还是HLA基因配合,将有不同的选择结果.比如附表示例中的同一对供受者,从HLA抗原角度看他们是配合的.但是从HLA基因分析他们是不配合的.究竟哪个配合标准对骨髓移植更有效,正是目前在探讨的问题.统计学分析表明,在随机人群中找到HLA基因全配合供者的机会,远远低于找到HLA抗原配合供者的机会.到2002年2月此.已检测出的HLA_A,B,DR抗原特异性有93个,其中A座位25个,B座位50个,DR座位18个.这3个座位组合成的单体型约2.210余种,这些单体型组合成的基因型可达2.510”种.而目前已检测出的HLA_A,B,DRB1座位上的等位基因数有1013个,他们组合成的单体型有3.410种,组合成的基因型高达5.7810种.由此可见,要在随机人群中找到HLA基因全配合供者的机会微乎其微.换言之,在随机供者骨髓移植中,供受者HLA基因总是不相合,所不同的只是不相合程度的差异而已.由此产生了”可允许的HLA不相合”(permissiblemismatches)的概念:l.附表骨髓移植供受者HLA抗原配合和HLA基因配合示例配合配合A2,111360,62DR4,8配合不配合A2,111360.62DR4.8不配合不配合A2,111360,62DR4.8A*0202.1l0lA2.1lB*4001.150lB60.62DRBl*0402.080lDR4.8A*0202.1l0lA2.1lB*4001.150lB60.62DRB1*0402.080lDR4.8A*0202.1l0lA2.30B*4001.150lB61.62DRB1*0402.080lDR4.1lA*0202.1l0lB*4001.150lDRBl*0402.080lA*0205.1l02B*4007.1504DRB1*0404.0803A*0201.3001B*4002.150lDRBl*0401.1l023可允许的HLA不相合可允许的HLA不相合,是指在这种供受者HLA不相合的骨髓移植中,发生GVHD的机会以及移植失败率不明显增加,因此可以被临床骨髓移植所接受.目前已报告的资料多为回顾性分析,初步结果显示HLA_I类抗原相合情况下的等位基因不相合以及HLA_DQ,DP座位基因不相合对骨髓移植效果影响较少.3.1HLAI类抗原或等位基因的不相合最近Petersdorf等人比较了471名患者中,HLAI类抗原和HLA_I类等位基因配合程度对骨髓移植成功率的影响_3.在280例HLA_A,B,C基因配合的患者中,移植失败率为O.7%;在有1个HLA-A,B或C基因不配合的47例杂合子患者移植中,移植失败率为0;而在51例1个HLAA,B或C抗原不配合的杂合子患者移植中,移植失败率为14%,显着高于对照组;在76例有2个或2个以上的抗原或基因不配合组中,移植失败率为17%.结果表明一个单独的HLA_I类等位基因不相287合,不增加移植失败率;而一个单独的HLA抗原不相合,或2个或2个以上的基因不相合或抗原不相合,将提高移植失败率.这个结果支持Petersdorf等人的假设,即HLA-A,B,C等位基因不相合的免疫性较抗原不相合为低.因此,在HLA抗原配合的情况下,可以允许HLA_I类基因不相合.Rubin.stein也认为,如单独一个不相合只是涉及到一个等位基因,如患者基因分型为HLA-A*0202,供者为HLA-A*0203,这时可以考虑接受移植,因为这类不相合不增加排斥反应的机会.进一步分析提示,一个单独的等位基因不相合是否在临床上允许移植,与相应不相合氨基酸的类型以及该氨基酸在I类分子中的位置有关.HLA.I类分子由一个重链分子和一个微球蛋白通过共价键连接组成.重链分子细胞外部分又分为a1,a2和oL3等三个活性区.a1和a2活性区组成多肽结合区.在细胞表面上,HLA分子和多肽复合物,与T细胞表面的T细胞受体(TCR)结合,进而引起免疫反应.如果供受者只有一个等位基因不相合,不仅涉及到的不相合氨基酸数量少,而且很少涉及到与T细胞受体结合区的氨基酸.相反如果供受者有一个抗原不相合,不仅涉及到的不相合氨基酸数量大,而且往往涉及到多肽结合区以及与T细胞受体结合区的氨基酸.33.这可以解释为什么HLAI类抗原配合较HLA_I类基因配合更为重要.Petersdorf等进一步比较发现,在7例纯合子患者中,1个HLAA,B,或C抗原不相合的移植失败率为71%.而在98例杂合子患者中,1个HLA-A,B,或C抗原不相合的移植失败率为7%.提示对纯合子患者,在不相合不可能避免的情况下,宜选择在杂合子座位上不相合的纯合子供者.比如患者为HLA-A2;B44,B46;DR8,9.供者1为HLA-A2;B51,B46;DR8,9.供者2为HLAA2,11;B44,B46,DR8,9.在这种情况下,以选择供者1为佳.3.2HLA.类抗原或基因不相合HLA_类基因编码的抗原有HLA-DR,DQ和DP等抗原.为了了解HLA-II类基因在无关供者骨髓移植中的重要性,PetemdoH等分析了的DR,DQ和DP等座位基因不配合对移植结果的影响L4.资料取自美国NMDP1988到1997年问进行的831例慢性粒细胞型白血病骨髓移植患者.在696例HLA-A,B血清学上全配合的患者中,565例(81%)DRB1基因全配合.分析结果发现HLADRB1等位基因配合可明显改善移植物存活以及患者的存活.而HLA_DQA1,DQB1,DPA1和DPB1基因不相合对GVHD的发生以及移植结果无明显影响,提示HLA_DRB1等位基因配合是一个重要因素.4骨髓移植配型中的HLA基因分型标准根据国际骨髓供者协会(WBDA)以及欧洲免疫遗传学联盟(EFI)的标准?,在大规模的骨髓库供者分型中,一般只要求鉴定到WHO命名星号后2位数,即HLA抗原特异性亚型水平.但是对于患者及其HLA配合的供者,应该做高分辨分型.此外,在HLA_I类基因分型中还应该包括C座位.在选择供者时,HLAI类基因主要看抗原特异性是否配合;HLA-DRB1基因要求尽量达到WHO命名星号后4位数288主旦堡盘查生月第l5卷第4期ChinJBloodTransfusion,August,2002,Vo1.15,No.4全相同.如果无其他选择,取DR抗原相同者为佳.虽然HLA基因分型可以鉴定到核苷酸水平,但是如果使用单一的技术,包括以测序为基础的高分辨分型方法(SBT),都还不足以鉴定全部HLA等位基因.比如在SBT方法中,得到模棱两可定型结果的比例,HLAA为1.19%;B为1.68%;DRB1为8.19%,合计为11.06%.换言之,将近11%的HLA.SBT分型结果是各种可能的组合.联合使用不同技术,可以克服此问题.此外,常用的HLA基因分型方法还不能涵盖所有的基因.不过这不影响它在骨髓供者HLA分型中的应用,因为在目前已检测出的上千种HLA等位基因中,绝大部分为低频率的罕见基因,故实际上不需要鉴定所有的HLA基因.现以HLA-DRB1分型为例加以说明:目前在DRB1座位上已检出244个表达基因,其中148个基因(60%)有相对应的DR抗原特异性,其他96个基因(40%)无相应抗原特异性2J.根据美国NMDP资料,在65752例供者HLA.DRB1分型中,86个等位基因的频率为0,105个等位基因的频率小于0.0002,10个无相应抗原特异基因的基因频率总和为0.000084.因此如果实际应用上只鉴定其他43个DRB1等位基因,可以涵盖99.6%的HLA.DR抗原特异性,应该说可以满足筛选骨髓供者的需要.根据目前中国国内实际情况,笔者认为对骨髓库供者的HLA基因分型,鉴定到HLA.A,B,DR特异性亚型水平即可.而对骨髓移植患者及其HLA相合的供者,应尽可能做高分辨分型.这不仅可以向临床提供更多的信息,而且同时也积累资料为今后制定骨髓移植HLA基因配型标准做准备.参考文献lRubinsteinPHLAmatchingforbonemarrowtransplantation:Howmuchisenough7.NEnglJMed,2001,345:18422SchreuderGMT,HurleyCK,MarshSGE,eta1.TheHLAdictionary2001:AsummaryofHLAA,一B,一C,一DRBl/3/4/5,一DQB1allelesandtheirassociationwithserologicaUydefinedHLAA.一B.一C,-DR,andDQantigens.HumImmunol,2001,62:8263PetersdorfEW,HansenJA,MartinPJ,eta1.Major-histocompati-bility-complexclasslallelesandantigensinhematopoietic-celltrans-plantatioNEnglJMed,200l,345:17944PetersdorfEW,KoUmanC,HurleyCK,eta1.EffectofHLAclassIIgenedisparityonclinicaloutcomeinunrelateddonorhematopoieticcelltransplantationforchronicmyeloidleukemia:theUSnationalmarrowdonorprogramexperience.Blood,2001,98:29225HurleyCK,WadeJA,OudshoornM,eta1.Aspecialreport:histo?compatibilitytestingguidelinesforhematopoieticstemcelltransplantationusingvolunteerdonors.TissueAntigens,1999,53:3946http:I(2002.05.10收稿,0620修回)本文编辑:王良华乙型与丙型肝炎病毒感染治疗新进展李志强乐嘉宜(1.上海市第六人民医院,上海200233;2.上海市黄浦区中西医结合医院)关键词:输血肝炎病毒治疗中图分类号:R512.62文献标识码:C文章编号:1004549X(2002)04-0288-04输血后14140d发生的急性肝炎,排除输血以外原因所致即可确诊为输血相关性肝炎.在输血相关性肝炎中,丙型肝炎发生率最高,其次为乙型肝炎.乙型肝炎起病相对较急,症状较重;而丙型肝炎起病则较隐匿,症状较轻.倘若不及时治疗,部分患者可因暴发性肝炎而死亡;部分患者处于长期携带肝炎病毒状态并逐步转变成慢性肝炎,肝硬化甚至肝癌.因