SOP标准操作程序-APOA1.doc

SOP标准操作程序APOA1 载脂蛋白A1（货号：OSR6142）实验原理：脂肪在人体内通过脂蛋白复合物的形式进行转运。脂蛋白主要分为五类：乳糜微粒，极低密度脂蛋白（VLDL），中密度脂蛋白（IDL），低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白。在过去的十年，血清中高密度脂蛋白（HDL）的下降与低密度脂蛋白（LDL）的升高被认为是心血管疾病的危险因素。与脂蛋白相关的五类，被划分从A到E。脂蛋白A（APOA1和APOA2）是高密度脂蛋白（HDL）的主要组成部分，大约90%的蛋白片断。APOA1还起到了激活卵磷脂胆固醇和清除肝外游离胆固醇的角色。方法学： 免疫复合物在散射光与其适当的浓度、分子量大小、形状相关。透射比浊法测定的是免疫复合物对光信号折射、散射或吸收。在奥林巴斯试剂的反应过程中，光透过抗原-抗体复合物悬液，从而吸光度升高，用来测定复合物的含量。标本：病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。类型：血清标本最好不要溶血。避免高乳糜血清，可能会对散射产生干扰信号。标本稳定性：在冰箱保存的条件下（28）稳定3天，20可以稳定一年。仪器与材料:仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪材料：奥林巴斯AU640载脂蛋白A1（APOA1）参与反应成份的最终浓度：Tris缓冲液（PH 7.4） 8 mmol/L聚乙二醇 3.5%羊抗APOA1抗血清 0.14g/L其中含有稳定剂与保护剂。注意：1.此试剂为体外诊断用。2.不要入口，吞下有害。3.试剂中包含叠氮钠，与下水道中的铜可以形成爆炸混合物。当丢弃试剂时一定要用大量水冲洗。试验用试管的直径在1216mm。定标液：奥林巴斯APOA1&B定标液（Cat. No. ODR3022）试剂准备：奥林巴斯AU640的APOA1试剂是即开即用的。无需特殊准备。执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640 APOA1试剂已经建立的程序。重复性：重复性的评估是根据NCCLS推荐的典型方法，AU640批内重复性小于5%，总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。N=100批 内精 密 度总 精密 度平均值（mg/dL）SDCV%SDCV%47.20.30.70.71.496.70.50.51.31.3方法学比较：奥林巴斯AU640 APOA1（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做175个病人标本。相关系数达到0.9989，回归方程如下：APOA1方法1=（APOA1方法21.05）2.7病人结果数值分布：41216mg/dL试剂的贮存：1.当保存于28，不开盖情况下至标签的失效期。2.开盖后放于AU640仪器中的试剂冰箱可以稳定60天。3.开盖后避免污染。变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。校准：标准液的准备：奥林巴斯APOA1&B定标液（Cat. No. ODR3022）。奥林巴斯定标液是即开即用的，无需特殊准备。校准程序：每7天需要定标一次。载脂蛋白定标程序用奥林巴斯定标物，依照IFCC的参数可追踪到WHO-IFCCAPOA1&B国际参考试剂（SP-01和SP3-07）。当有以下情况时需要重新定标：1 换试剂批号或出现质控漂移时。2 当仪器做完保养后。3 重要零件更换时。质控：应用APOA1& B免疫学质控品，例如：Bio-Rad的脂类质控，在每一批标本中都应做为未知标本进行分析，每个实验室应建立自己实验室的参考范围。操作程序（逐步地）：AU640开机1.认两瓶清洗剂有足够的量。2.打开蒸馏水供应系统的阀门。3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的POWER ON键。4.确认打印机为开机并处于联机状态。5.在Start Condition屏幕，输入所需信息，并按F2退出。6.如果有需要请进入password。7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1N HCL的样品针清洗液。9.ISE（电极）需要以下步骤定标：a.在急诊台相应位置放血清/尿低和高值标准液。b.在系统状态菜单选择ISE状态菜单。c.选择F5，选定合适的定标条目。d.定标完成后，确认斜率和因数是否在范围内。开始分析:1.把定标、质控、和标本架放在仪器的Rack Feed上。2.用鼠标点击在屏幕最上方开始分析图标。3.点击F2退出键退到主屏幕。分析参数样品体积 2微升 吐水量 0微升试剂I体积 65微升 吐水量 130微升试剂II体积 65微升 吐水量 20微升波长 540/800 方法 End读点 0/27 0/10 温度 37完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。计算：无需手工计算，在37每个标本的结果自动以mg/dL打印。报告结果:参考范围： 100200mg/dL参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。不正常结果的处理程序：根据仪器参数的正常值会打印异常标志。报告格式：自动的打印37mg/dL的报告。操作过程注意事项：操作过程的限制性：OlympusAU400 APOA1的线性范围是40250mg/dL。样品浓度超过线性范围应稀释重做。在AU640中应用自动重做功能，标本重做后会自动乘以稀释倍数。超范围的标本也可以手工加一份血清一份生理盐水，轻轻地混匀，在AU640上当常规标本，结果乘以2。干扰物质：ALB受以下物质干扰：乳糜 乳糜达到1000mg/dL时影响小于7%溶血 血红蛋白达到500mg/dL时影响小于3%胆红素 胆红素达到40mg/dL时影响小于1%Olympus的研究结果是根据现时发表的文献，Olympus美国公司正在进行准确性的研究，对于其它物质的干扰，请参看Young发表的文献。参考文献：1. Rose,N.R.,Friedman,H,and Fahey,Manual of Clinical Immunology,third edition American Society of Microgiology,Washington DC 19862. Pesce,A.J. and Kaplan,L.A.,Methods in Clinical Chemistry C.V.Mosby Company,19873. NCCLS,Interference Testing in Clinical Chemistry,EP7-P,19864. In-house data available upon request.5. Young,D.S.,Effects of