胡萝卜组织培养教学设计

胡萝卜组织培养教学设计小组成员：何家会、宋亚伟、冯海艳、尹化、黄洁、牛伟坤一、教学目标1、知识目标：说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行胡萝卜的组织培养。2、能力目标：掌握培养基制备、外植体消毒、接种、培养、移栽以及栽培等基本操作技术。3、情感目标：关注植物组织培养技术在实践生活中的运用，养成严谨的科学素养。二、实验目的1、掌握植物组织培养过程中的愈伤组织诱导和生根培养技术。2、掌握植物组织培养过程中使用的无菌技术。三、实验原理植物组织培养：指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的那部分材料。 愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则薄壁细胞，多在植物体切面上产生。 脱分化：已分化好的组织细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。或者说是由高度分化的植物组织或器官产生愈伤组织的过程。 再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。或者说是由愈伤组织再生出小植株的过程。 植物体的任何一个细胞都具有全能性。分化了的植物根、茎、叶等组织器官在一定的条件下进行离体培养，给于一定的营养和激素，可以脱分化为愈伤组织。愈伤组织在不同的营养和激素的作用下，又可以再生出完整的小植株。植物的脱分化和再分化培养，证明分化了的植物细胞仍具有形成完整植株所需要的全套基因。四、实验材料与方法实验材料 胡萝卜（新鲜幼嫩） MS培养基+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA 70%酒精2.5%NaCLO无菌水超净工作台、光照培养架、高压蒸汽灭菌锅、恒温振荡器、打孔器、小刀、培养皿、解剖刀、镊子、植物组培试剂盒。 实验方法 培养基的配制。 小麦籽粒用无菌水浸泡10小时。 取材、消毒和接种。五、实验过程胡萝卜愈伤组织的诱导 1、外植体消毒用清水洗干净胡萝卜直根，用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧杯中。先用70%酒精对胡萝卜直根消毒5min，用无菌吸水纸吸干，再用10%的次氯酸钠溶液消毒10min（或用0.1%的升汞消毒10min,接着用无菌水漂洗一遍，再用无菌水浸泡30min），放入无菌水中漂洗23次，用无菌吸水纸吸干待用。 2、外植体接种把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度1mm左右的小圆片，然后将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再将形成层切成大约长5mm、宽5mm、高1mm的小长块。为了操作简便、快速，外植体美观，建议使用打孔器切取胡萝卜外植体。具体操作方法: 把消毒好的胡萝卜直根放于无菌培养皿中(建议使用一次性塑料培养皿)，用小刀将其切成2-3cm的小段，用灭过菌的打孔器沿着形成层穿入胡萝卜中，取得一段含有形成层的2-3cm的圆柱体，然后用无菌解剖刀片将其切成厚1mm的小薄片。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心以避免封口膜接触瓶口的一面被污染，左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取胡罗卜直根，插入培养基中，插入时应注意方向不要倒插，每瓶接种6-8块外植体，接种后将封口膜重新扎好。3、培养 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒放于黑暗处25条件下进行暗培养，50d后长出淡黄色愈伤。4、愈伤组织转移到生根培养基将愈伤组织转移到生根培养基，长出根后，壮苗，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。六、注意事项1、培养基消毒、外植体消毒、超净台消毒和操作者无菌操作是否符合规范，是防止菌类污染的关键；2、每剥离接种完一个胚，接种工具均要在点燃的酒精灯上进行烧灼消毒。3、每一步操作都不要远离酒精灯火焰无菌区。4、注意防火（盛有酒精用于浸泡接种工具的器皿要远离酒精灯）。5、接种结束后，清理和关闭超净工作台。七、预期实验结果胡萝卜的离体组织经植物组织培养技术长成完整植株。八、结果分析与评价1、接种3-4天后，观察外