植物组织培养实验报告.doc

植物组织培养实验报告实验一 母液的配置与保存一 、实验目的通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法二 、实验原理 配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。三 、实验材料、试剂和仪器设备1.试剂NH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,CaCl22H2O ,MgSO47H2O,FeSO47H2ONa2-EDTA,MnSO44H2O,ZnSO47H2O,H3BO3,KI,Na2MoO42H2OCuSO45H2O,CoCl26H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。四、 实验步骤1 大量元素母液的配制先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , MgSO47H2O, CaCl22H2O，待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。2 微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取MnSO44H2O, ZnSO47H2OH3BO3, KI, Na2MoO42H2O，CuSO45H2O, CoCl26H2O,按制备母液I的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。3铁盐母液的制备把FeSO47H2O和Na2-EDTA分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把FeSO4倒入Na2-EDTA溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调PH到5.5，将溶液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容至500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡12min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。4有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：维生素B, 烟酸, 甘氨酸，用蒸馏水溶解后定容后，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。5植物生长物质母液制备NAA母液:准确称取10mg,用少量1mol/L NaOH溶解后加蒸馏水定容至100ml,即配制成0.1mg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。6BA母液配制方法相似，浓度为2mg/ml。五、试验结果分析及注意事项配制母液时注意药品只能出不能进。 实验二 培养基的制备与灭菌一 、 实验目的学习母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法二 、 实验原理组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。三 、 实验材料、试剂和仪器设备1.试剂： 琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/L NaOH,各类母液2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH试纸，锥形瓶瓶等。四、 实验步骤1.将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定位置2 .取50ml烧杯一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入烧杯中。3 .取 50ml烧杯一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入烧杯中。4.取瓷盆一个，加入300ml蒸馏水，置于电磁炉上加热，称量琼脂6克，白砂糖 40 克，依次倒入瓷盆中，待琼脂和白砂糖完全溶解后，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌，并定容至 1 L。5 .用1mol/L NaOH调PH 至 5.86. 把培养基分装到广口瓶中，用牛皮纸包扎好，待灭菌。7.培养基灭菌五、 试验结果分析及注意事项配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。培养基灭菌时注意要放干净冷空气。实验三 无菌植株的建立一 、 实验目的通过实验，初步掌握外植体材料消毒及在超净工作台上接种的方法与注意事项二 、 实验原理植物细胞具有全能型，其外植体接种在无菌的人工培养基上，能长成完整的无菌植株。三 、 实验材料、试剂和仪器设备超净工作台、培养基，大号镊子，剪刀，酒精灯，喷雾器四、 实验步骤1.准备 打开超净工作台，用紫外灯烧2h,关闭紫外灯，将灭菌溶液，无菌水，豌豆，大烧杯等放入超净工作台，在台上点燃2个酒精灯。2.灭菌 在超净工作台上取经浸泡处理的豌豆，先用84消毒液摇晃清洗清洗3次，每次5分钟，后用0.5%HgCI摇晃清洗，处理2次，每次5分钟。后用无菌水摇晃清洗3次。3.接种 将灭菌处理好的材料在超净工作台上用镊子靠近酒精灯的外焰放入倾斜的锥形瓶杯中，每个瓶内装5粒豌豆，接种过程中锥形瓶应一直保持倾斜，直到接种完毕盖上棉塞。4.接种完毕后，用棉线绑好用铅笔标上制作人编号。五、 试验结果分析及注意事项注意事项： 做本次实验时在豌豆灭菌时注意升汞、酒精灭菌时间应严格注意，过长会对种子活性造成影响实验图片见图1。实验四 豌豆根、茎、叶愈伤组织的建立一 、实验目的通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织 学习愈伤组织的建立方法二 、实验原理细胞全能性，已经分化的植物细胞在适宜条件下可脱分化形成愈伤组织。三 、实验材料、试剂和仪器设备超净工作台、无菌豌豆苗、培养基、剪刀、喷雾器四、实验步骤准备歩骤同实验三接种 在超净工作台外用酒精将装无菌豌豆苗的锥形内灭菌。用灭菌后的弯头剪刀分别剪取长势良好，无病菌污染的豌豆的根、茎、叶每个锥形内各接一种，每种接3瓶。标记 将接种好的锥形瓶标记，根为R,叶L,茎S。标记好后