实验常用试剂、缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml 组份浓度 100mg/ml Ampicillin配制量 50mL配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22m滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。Kan（卡那霉素）50mg/ml组分浓度 50mg/ml卡那霉素配制量 50mL配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用 0.22m 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。IPTG(异丙基-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml 组份浓度 24mg/L IPTG配制量 50mL配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。 2.加入 40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22m 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20保存。X- Gal 20mg/m 组份浓度 20mg/L X-Gal配制量 50mL配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20避光保存。LB培养基 组份浓度1（W/V）Tryptone，0.5 （W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl配制量 1L配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨） 10g Yeast Extract（酵母提取物） 5g NaCl（氯化钠） 10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。 4.加去离子水定容至1L。 5.高温高压灭菌后，4保存。注：1. LB固体培养基每100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。2. 5N NaOH新配后溶液加入需要重新测定。3.待培养基温度降至50时，以手不烫为准，按比例加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。50TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 100m L配制方法 1.称量下列试剂，置于200mL烧杯中。 Tris 24.2 g Na2EDTA2H2O 3.72 g 2.向烧杯中加入约80 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加入5.71 ml的冰乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至100mL后，室温保存。注：1xTAE的稀释（如500ml1xTAE即10mL 50xTAE稀释于490mL的去离子水）。1琼脂糖凝胶（核酸电泳用）组份浓度 1琼脂糖凝胶配制量 100m L配制方法 1.称量1g琼脂糖置于200mL锥形瓶中。 2.加入100ml1TAE Buffer，摇动混匀。 3.放入微波炉加热2min至琼脂糖完全溶化。 4.插入梳子，等温度降下来，倒胶。1.M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl（pH6.8） 配制量 100mL配置方法 1.称量 12.11gTris 置于 200mL 烧杯中。 2.加入约 80mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加入11mL的浓盐酸。 4.定容至100mL，室温保存。1.5M Tris-HCl 组份浓度 1.5 M Tris-HCl（pH8.8） 配制量 100L配置方法 1.称取18.17gTris置于200mL烧杯中。 2. 加入约80mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至100mL。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值。5 N NaOH 组份浓度 5N NaOH配制量 100mL配置方法 1. 量取 80mL 去离子水置于 100200mL 塑料烧杯中 2. 称取20g NaOH 逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌以放热。 3. 待NaOH完全溶解后，定容至100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。注：NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂。2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl配制量 100mL配置方法 1.在 78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸 （11.6N），均匀混合。 2.室温保存。25xPB Buffer组份浓度 25xPB Buffer配制量 100mL配制方法 1. 称量下列试剂，置于100 ML烧杯中。 Na2HPO4 (磷酸氢二钠) 2.74g NaH2PO4（磷酸二氢钠） 0.79g 2. 向烧杯中加入约80 ML去离子水，充分搅拌溶解。 3. 定容至100 ML。1xPBS Buffer 组份浓度 1xPBS Buffer配制量 100mL配制方法 1. 称量8.5g Nacl置于100 ML烧杯中。 2. 向烧杯中加入40 ML 25xPB Buffer搅拌溶解。 3. 滴加5N NaoH调节PH值至7.2，将溶液定容至1L. 4. 高温灭菌后，室温保存。注：PBST的配制:1L 1xPBS加1ml吐温-20。10%（W/V）过硫酸铵组分浓度 10%（W/V）过硫酸铵配制量 10mL配制方法 1.称取1g过硫酸铵； 2.加入10ml的去离子水后搅拌溶解， 3.贮存于4。注：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。10%（W/V）SDS 组份浓度 10%（W/V）配制量 100mL配制方法 1.称量10gSDS置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水， 68加热溶解。 2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2 。 3.将溶液定容至100mL后，室温保存5X Tris-Glycine Buffer组分浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5% (W/V)SDS配制量 1L配制方法 1.称取下列试剂，置于1L的烧杯中 Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。 3.加入去离子水定容至1L后，室温保存。注：1X Tris-Glycine Buffer（500ml即量取100ml稀释于400ml去离子水中）。考马斯亮蓝 R-250染色液组份浓度 0.1（W/V）考马斯亮蓝 R-250，25%（V/V）异丙醇，10（V/V） 冰醋酸配制量 1L配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝 R-250,置于1L烧杯中。 2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。 3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。 4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。 5.用滤纸去除颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度 10（V/V）醋酸，5（V/V）乙醇配制量 1L配置方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。 醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。膜转移缓冲液（Western杂交用）组份浓度 39mMGlycine，48mMTris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇配制量 1L配制方法 1.称量下列试剂，置于lL烧杯中。 Glycine 2.9g Tris 5.8g SDS 0.37g 2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定溶至800ml。 4.加入200ml的甲醇，室温保存。封闭缓冲液 （Western杂交用）组份浓度 5%(W/V)脱脂奶粉/PBSTBuffer配制量 100mL配制方法 1.称0.5g脱脂奶粉加入到10mlPBSTBuffer中，搅拌溶解。 2.4保存待用(本封闭液应该