大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生超光谱β-内酰胺酶的检测方法及其临床应用.doc

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生超光谱-内酰胺酶的检测方法及其临床应用【摘要】超光谱-内酰胺酶（BSBLs）是由质粒介导的能赋予细菌对头孢菌素类（象头孢三嗪，头孢噻肟，头孢他啶等）和单酰胺类抗生素安曲南以及青霉素类耐药的一类酶。自1983年以来德国首次发现产ESBLs肺炎克雷伯菌以来，对ESBLs菌的检测方法，国外已有较多报道。发现产ESBLs菌的种类越来越多，已越来越引起临床的关注。 【关键词】 肺炎克雷伯菌大肠埃希菌耐药性-内酰胺酶 研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生超光谱β-内酰胺酶（ESBLs）的耐药性与临床应用。如何快速准确为临床提供产ESBLs菌株的依据，指导临床合理选择敏感抗生素，提高疗效，监控各种耐药菌是当务之急。检测临床分离的75株大肠埃希菌和33株肺炎克雷伯菌ESBLs产生情况。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株2006年1月2007年12月临床送检各类标本中分离的大肠埃希菌75株和肺炎克雷伯菌33株。1.1.2 药敏感纸片头孢三嗪、头孢他啶、阿莫西林/棒酸（20 μg/10 μg）头孢噻肟、安曲南和亚胺培南，头孢他啶、头孢噻肟、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸均由浙江省军区后勤防疫检验所生产。1.1.3 MH肉汤和MH琼脂江省军区后勤防疫检验所产品。1.2 方法初步筛选试验按常规纸片扩散法在MHA上涂好受试菌，先在平板中心贴上阿莫西林/棒酸（20 μg/10 μg）纸片，然后在其上下左右贴30 μg/片头孢三嗪、头孢他啶、头孢噻肟和安曲南纸片，各纸片中心距复合剂纸片中心30 mm，35 ，孵育1820小时。结果解释，如周围4个药物纸片中有任何一个抑菌环在靠近复合剂纸片一侧的边缘出现扩大或加强，说明该菌株可能产ESBLs。表型确正试验：按常规纸片扩散法在MHA上涂好受试菌，先在平板上贴上头孢他啶、头孢噻肟、然后再贴上头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸，在头孢他啶、头孢噻肢这两个药中加克拉维酸后抑菌环直径比不加克拉维酸大5 mm，判定为产ESBLs。2 结果 从2006年1月2007年12月，共分离大肠埃希菌75株和肺炎克雷伯菌33株，初筛试验和确证试验检出23株肠埃希菌，产ESBLs检出率30.6%，8株肺炎克雷伯菌产ESBLs检出率24.2%。纸片扩散法药敏试验结果，31株产ESBLs菌30 μg/片头孢三嗪、头孢他啶、头孢噻肟和安曲南和亚胺培南敏感性分布见表1。表1 31株产ESBLs菌株对4种β-内酰胺抗生素敏感性分布（略）3 讨论 我们从临床送检的标本中检出30.6%大肠埃希菌产ESBLs肺炎克雷伯菌产ESBLs检出率为24.2%，低于文献报道的检出率，提示这两种菌对超光谱β-内酰胺类抗生素耐药性已到不容忽视的程度。 在本研究中，使用30 μg/片头孢三嗪、头孢他啶、头孢噻肟和安曲南纸片检测产ESBLs，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性时，有51.3%86.5%受试菌产生中介或耐药结果。48.7%大产ESBLs菌株对头孢他啶是敏感的。这个结果与有关研究报道相一致，产ESBLs菌对亚胺培南全部敏感。 产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离，ESBLs提示治疗该菌引起感染不能用青霉素、头孢类及单环菌素类等药物治疗，目前首选泰能及马斯平（四代头孢菌素）。建议治疗期间及治疗后进行耐药监测，避免使用或联合使用β-内酰胺类抗生素。产ESBLs菌株的出现和在临床标本中检出率上升，给临床抗感染治疗带来很大困难，各医院实验室应积极开展对ESBLs检