分析方法研究与验证思路PPT课件

1 分析方法研究思路 残留溶剂分析方法研究有关物质分析方法研究分析方法验证 2 残留溶剂研究 总原则 合成过程中使用到的有机溶剂 需建立分析方法 并予以测定 质量标准拟定原则 除第一类溶剂外 未检出的有机溶剂可以不拟定 仅拟定最后一步重结晶溶剂首选气相分析方法 部分可以使用液相等手段 3 残留溶剂检测方法 直接进样 产品的分解不干扰溶剂的检测 不容易污染进样器顶空进样 流行的做法 4 残留溶剂检测方法 内标法 预先配制好内标溶液 采用该溶液配制对照品溶液和供试品溶液 内标物 选择与待测溶剂沸点相近的烷烃类化合物 外标法 流行的做法 5 残留溶剂检测方法 对照品浓度 限度浓度溶剂选择 溶解产品和待测物质 例如 DMF DMSO H2O等检测器 FID可应用于大部分的溶剂检测 部分使用ECD 对于具有紫外吸收的溶剂 如吡啶 甲苯等可用HPLC方法 6 气相条件的建立 进样器温度 大于沸点 小于分解温度柱温 必须低于进样器和检测器温度30 70 可以使用恒温或程序升温 检测器温度流速色谱柱 相似相溶原理 7 有关物质分析方法 药典方法国家标准参考文献建立方法 8 有关物质分析方法 1 杂质对照品进行定量测定不受杂质紫外吸收的影响但需要获得杂质标准品 9 有关物质分析方法 2 归一化法方法简单 但是做线性时需要从定量限做到供试品浓度的150 相关系数不低于0 99 且需要满足自身对照法的条件 10 有关物质分析方法 3 杂质对照品定位 主成分自身稀释很难获得纯度较高 满足定量检测的杂质对照品时采用 但仍能提供纯度不高 可供定位的杂质对照品要求杂质与主成分的相对响应因子应在0 9 1 1范围之内 11 有关物质分析方法 4 加校正因子的自身对照法很难获得纯度较高 满足定量检测的杂质对照品时采用 但仍能提供纯度不高 可供定位的杂质对照品杂质与主成分的相对响应因子超出0 9 1 1范围 12 各实验参数的建立过程 波长 取主成分 合成中间体和降解产物对照品 配成一定浓度后进行紫外扫描 通过DAD PDA检测器扫描各物质的紫外吸收图 确定各物质吸收相近的波长测定如采用主成分最大吸收波长 需进行各杂质校正因子的测定 13 各实验参数的建立过程 供试品溶液浓度的确定首先确定LOD 向上推至少10000倍 即为供试品溶液浓度 14 各实验参数的建立过程 最小峰面积的设定一般设置为主峰峰面积的0 01 0 05 15 测定方法中的浓度关系 16 流动相的选择和优化 试验样品取主成分和各杂质对照品 配成主成分浓度100 各杂质浓度为1 的溶液进行测定 验证色谱系统的适用性 同时需要将强制破坏试验供试品分析 17 流动相的选择和优化 中性成分一般选择甲醇 水 乙腈 水两种系统 乙腈 水系统由于粘度小 通常可以得到良好的柱效 被测物为极性较大的中性成分时 系统中甲醇或乙腈的比例可适当小些 被测物为极性较小的中性成分时 可适当增大甲醇或乙腈的比例 18 流动相的选择和优化 碱性成分向流动相中加入胺类扫尾剂 常用三乙胺 二乙胺 乙二胺等 加入反离子 常用的离子对试剂为烷基磺酸盐 如戊烷磺酸钠 庚烷磺酸钠 辛烷磺酸钠及十二烷基磺酸钠 高碳数离子对试剂使保留时间过长 可更换低碳数的离子对试剂 流动相的pH一般为3 5 19 流动相的选择和优化 酸性成分向流动相中加入少量弱酸 常用甲酸 醋酸 适用于分离3 pKa 7的弱酸 加入反离子 常用的离子对试剂为四丁基季胺盐及四丁基磷酸盐等 流动相的pH一般为7 7 5 20 流动相的选择和优化 流动相的要求被测物之间分离良好 分离度达到1 5以上 主成分保留时间以10分钟左右为宜 分析时间通常为主成分保留时间的2 3倍 分析时间过长的可考虑采用剃度洗脱 21 薄层色谱法测定有关物质 正向色谱系统对照品溶液斑点建立梯度对照 如设定杂质斑点1 0 的自身稀释主斑点 需增加0 5 0 2 0 1 三个斑点 如0 1 的斑点不显示出 则增大点样量 22 分析方法验证 准确度对于有定量要求的杂质要通过回收率试验验证方法的准确度 例如某杂质的限度为0 2 可分别配制该杂质浓度为0 1 0 2 和0 3 的杂质溶液各三份 分别测定其含量 将实测值与理论值比较 计算回收率 各浓度下的平均回收率均应在80 120 之间 如杂质的浓度为定量限 则该浓度下的平均回收率可放宽至70 130 23 分析方法验证 线性适用与有定量要求的杂质检查 在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液 分别测定该杂质峰的面积 计算相应的含量 以含量为横坐标 X 峰面积为纵坐标 Y 进行线性回归分析 可接受的标准为 回归线的相关系数 R 不得小于0 990 Y轴截距应在100 响应值的25 以内 24 分析方法验证 精密度适用与有定量要求的杂质检查 重复性配制6份杂质浓度 限度浓度 相同的供试品溶液 由一个分析人员在相同的条件下进行测试 所得6份供试液杂质含量的相对标准差应不大于10 25 分析方法验证 中间精密度配制6份杂质浓度 一般为0 1 相同的供试品溶液 分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试 所得12个含量数据的相对标准差应不大于15 26 分析方法验证 专属性空白对照应无干扰 主成分峰或需定量的杂质峰与其它峰应能完全分离 分离度不得小于1 5 27 分析方法验证 检测限与定量限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10 另外 配制6份最低定量限浓度的溶液 所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2 0 峰面积的相对标准差应不大于5 0 28 分析方法验证 耐用性分别考察流动相比例变化 5 流动相pH值变化 0 2 柱温变化 5 检测波长变化 5nm 流速相对值变化 20 以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时 仪器色谱行为的变化 每个条件下各测试两次 可接受的标准为 各杂质峰的拖尾因子不得大于2 0 杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离 各条件下的杂质含量数据 n 6 的相对标准差应不大于2 0 杂质含量的绝对值在 0 1 以内 29 分析方法验证 系统适应性适用与有定量要求的杂质检查 配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析 该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2 0 保留时间的相对标准差应不大于1 0 另外 杂质峰的拖尾因子不得大于2 0 理论塔板数应符合质量标准的规定 30 分析方法验证 溶液稳定性按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液 平行测定两次杂质的含量 然后将上述溶液分别贮