大蒜根尖诱导微核实验.doc

一、 实验目的1了解细胞微核形成的机理及其形态特点。2学习植物根尖细胞的微核检测技术。二、实验原理微核是间期细胞的细胞质中一个或多个圆形或杏仁状结构，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。微核是染色体畸变的一种表现方式。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。目前研究表明，微核发生率同作用因子的剂量呈正相关，微核发生率来反映诱变物质对生物的遗传危害程度。微核微核试验是一种建立在细胞水平上分析DNA损伤的技术。该技术以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等经典的短期试验方法。目前许多国家和国际组织将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理性安全性评价的必做试验并用于染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。本试验采用大蒜作为试验材料，具有许多优点： 用鳞茎进行无性增殖，避免了有性生殖过程中的遗传性变异，具有遗传背景稳定的优势； 分布广、材料易得，不受地区和季节的限制； 培养方便，操作简单，蒜瓣去皮后将基部浸入净水中即可萌生新根，无需其他条件，且蒜瓣体积较小，萌生新根的数目较多； 价格低廉，对诱变剂敏感，是一种理想的试验材料。本次实验中采用叠氮化钠和水处理的大蒜作为对照组，以四种常用的洗护用品作为实验组。目前在大学生群体，尤其是女生群体中，各种洗护化妆品已经成为必备品，那么经常使用的这些洗护化妆物质是否会对人体造成危害呢？本次实验目的即在于鉴定洗护化妆品的毒理安全性。三、 实验用品实验器具：显微镜、解剖针、盖玻片、载玻片、培养皿实验试剂：改良苯酚品红染液、1M盐酸、叠氮化钠、水、花露水、海昌护理液、黄瓜水、卸甲水实验材料：大蒜根尖四、 实验步骤1、 将大蒜去皮，在培养板上每个孔中放入23瓣，25培养24h。2、 在培养板的六个孔中分别加入叠氮化钠、水、六神驱蚊花露水、海昌、黄瓜水、卸甲水，没过大蒜根部为宜，25继续培养24h。3、 剪下各孔内约1cm长的大蒜根，置于离心管中加入固定液（乙醇：冰醋酸=3：1），固定24h以上。4、 取出固定好的大蒜根，切取12mm根尖，用1mol/LHCl解离10min。5、 吸干解离液，用蒸馏水清洗3次。6、 吸干蒸馏水，用苯酚品红染色15min。7、 压片，镜检，计算微核率 注意事项：1.诱变前培养的大蒜不要让根长得太长。以1cm左右进行诱变最为适宜。2.固定时，要保证固定液可以充分浸润每条根。3.染色时最好轻轻将根尖压开一点，有利于中间的细胞着色。4.压片时要尽量是细胞分散成单层，但也不可分散太过，不利于找到分生区和伸长区进行对比观察。五、实验结果 图（1）生理盐水处理的大蒜根尖 10*40 图（2）黄瓜水处理的大蒜根尖 10*40 图（3）六神驱蚊花露水处理的大蒜根尖10*40 图（4）海昌眼镜护理液处理的大蒜根尖10*40 图（5）卸甲水处理的大蒜根尖10*40 图（6）叠氮化钠处理的大蒜根尖10*40 结果分析：组别检测液1000个细胞中的微核数微核率1水002黄瓜水003六神驱蚊花露水004海昌眼镜护理液005卸甲水006叠氮化钠0（舍去，正常为50左右）50本次实验结果显示，在各处理组和对照组中均没有发现微核。叠氮化钠对照组没有发现微核的原因可能是加入少量的叠氮化钠后，处理液的浓度太低。其他实验组没有看到微核，说明其他溶液中的有害物质含量较低，有很小的可能性造成细胞染色体的突变。微核千分率的计算：微核千分率（MCN）=检出的微核数/检测细胞总数*1000（统计微核数时候，应随机数1000个细胞，计数其中的产生微核的细胞数量。一个细胞核周围若出现了多个微核，算为一个微核。）在10以下时，无污染；10-18时，有轻度污染；18-30时，有中度污染；30，有重度污染根据叠氮化钠在1000个细胞中检测出的微核数量为50，计算出来微核千分率为50。为重度污染，致突变性很高。六、实验反思1、实验选用的实验材料的浓度最好保持原水平，即不要被稀释，这样处理的结果才能反应物质在生活使用状态中的真实毒理特征。2、当鉴定某种浓度可变的物质对染色体的影响时，可以适当的设置浓度梯度实验，根据实验结果判断此物质的毒理安全浓度。在一般情况下，有害物质浓度越高，微核率越高。可以