临床微生物SOP-呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程.doc

XXXX医院检验科微生物实验室呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程编号：MYCH/ 版本：第1版 第0次修改页数：第 6 页 共 6 页呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。2适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。3标本3.1 标本类型 痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。3.2标本采集3.2.1 采集时间 以晨痰为好；支气管扩张症病人，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。3.2.2 自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。3.2.3气管镜下采集法 在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。3.2.4气管穿刺法 在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。3.2.5棉拭采集法 用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。3.3 标本拒收标准3.3.1 申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。3.3.2 痰标本呈水样或唾液样。3.3.3 痰涂片白细胞25低倍视野。3.3.4 标本容器溢漏，无瓶盖。3.3.5 痰标本留取放置时间太长，超过2小时。3.3.6 未用指定的无菌容器留痰作细菌培养。3.4标本保存 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2小时。4试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3 %过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养箱等。5.细菌鉴定和药敏质控参见质量管理程序。6.检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。6.1 肉眼观察包括颜色、黏度、有无血丝或脓。6.2 涂片检查可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定（表5-29）。并可初步是否有病原菌存在。痰标本镜下分类分级白细胞（个）上皮细胞（个）A252525C25注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合格，应重新留标本。6.2.1 一般细菌涂片 挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，革兰染色后镜检。6-2.2 结核分枝杆菌涂片 参见分枝杆菌属检验标准操作规程o6.2.3 放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，如含血液，则加水溶解红细胞，然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻片上，覆以盖玻片，轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构，如见中央为交织的菌丝，末端呈放线状排列，则揭去盖玻片，干燥后作革兰及萋一尼染色镜检。如查见中间部分的菌丝为革兰阳性，而四周放射的末端为革兰阴性，萋一尼染色为非抗酸性者，可报告为“找到革兰阳性杆菌疑似放线菌”。萋一尼染色弱阳性则报告“找到革兰阳性杆菌疑似诺卡菌”。 6.3分离培养6.3.1 培养标本的选择 应选择黏液脓痰作涂片，排除不合格标本。6.3.2 痰标本培养前处理 用无菌盐水将痰洗涤或加入等量的1%胰酶溶液，使痰液均质化后备用。6.3.3 接种 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯（或EMB、中国蓝）琼脂平板，置5%-10%C02环境中，35培养18 -24小时。6.3.4 根据菌落形态特点，作出初步判断，然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同时作药物敏感试验。6.3.5结核分枝杆菌培养：参见分枝杆菌属检验标准操作规程。7操作流程痰或咽拭子涂片染色消化液或生理盐水处理肉眼观察 血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板，5%10%CO2,35培养1824小时观察菌落特征及涂片、染色仪器或手工细菌鉴定及药敏试验发出报告8结果报告8.1 报告的各菌种可注明各自所占比例情况，可分为纯培养、大量、中等量、少量。8.2未检出致病菌时应报告“正常菌群”。9注意事项9.1 痰标本一般不可采用肉汤或高选择性培养基进行增菌培养。9.2 草绿色链球菌为口腔和鼻咽部的正常菌群，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部损伤而侵入血流，可引起亚急性细菌性心内膜炎等感染，故从血液中分离出草绿色链球菌有临床意义。9.3 咳痰标本不做厌氧菌培养。10临床意义上呼吸道标本培养生长的细菌是否与疾病有关，需各方面综合分析，排除常居菌后，才可作出正确的判断。下呼吸道的痰液应是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从病人痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示可能有呼吸道细菌感染。肺炎链球菌是肺炎最常见的致病菌。儿童细菌性肺炎多为流感嗜血杆菌所致。医院获得性肺炎的常见病原菌是革兰阴性杆菌，主要有肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌属和肠杆菌属细菌等。肺结核由结核分枝杆菌引起的。嗜肺军团菌引起军团菌病，肺部厌氧感染大多是脆弱类杆菌及梭杆菌属的细菌等。疑典型形态细菌所致肺部感染时，常先做痰液和支气管分泌物涂片、染色镜检（如肺部结核痰液涂片、抗酸染色，镜检找抗酸杆菌），有助于细菌培养检查。11危急值报告 如查出抗酸杆菌阳性，则应用时向临床报告并作传染病报告。参考文献 1 中国合格评定国家认可委员会CNAS-GL23：2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南20082 周庭银编著临床微生物学诊断与图解第二版上海：上海科学技术出版社,20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全国临床检验操作规程第三版南京：东南大学出版社 20064 Murray PR. Manual 0/F Clinical Microbilogy.9th ed. Washington：ASM Press