遗传学实验温度对果蝇数目的影响.doc

不同温度对果蝇子代数量性状的影响摘要：实验通过对亲代野生型红眼黑腹扩大培养，将子代果蝇按雌雄比例为7:3装入三个培养瓶中，并置于18、25、32的恒温箱中培养，观察并记录子代果蝇的数目、性别比，通过比较确定最适温度，探讨温度对果蝇数量性状的影响。关键词：果蝇；培养；性别比；温度 果蝇作为一种良好的动物实验材料，具有生长迅速，繁殖力强；后代数量大，便于统计分析；个体小，外饲养管理方便；变异类型多，易于观察和杂交组合；染色体巨大，且数量较少，便于观察研究等优点。1 实验材料及培养基的配制1.1实验材料 野生型红眼黑腹果蝇。1.2培养基的配方 果蝇培养方法采用玉米一琼脂培养基：水100ml，琼脂1.0g，葡萄糖13g，玉米粉12g，酵母膏一团，丙酸4滴。1.3培养基的配制取20ml水于小烧杯中，将玉米粉拌匀至糊状； 取60ml水于大烧杯中，加入琼脂1.0g，煮沸溶解后再加入葡萄糖13g，期间要不断搅拌，防止糊底；将二者混合，继续加热，待煮沸后冷却到60，加入一团酵母膏和4滴丙酸，搅拌均匀后即可分装到两个培养瓶中。注：玉米粉一定要先用凉水拌匀后再加热，不能直接倒入加热的培养基中，否则容易聚集成团，不易溶解。配制的培养基容易出现块状，不易于果蝇的利用。 酵母为活性物质，高温易失活。因此应当在培养基冷却到60左右时加入到培养基中，切勿将酵母粉加入到培养基中直接煮沸。1.4培养基的分装 将干净的培养瓶和棉塞于高压锅内灭菌20min，待冷却至室温，倒入约2cm 厚的未完全冷却的培养基，待培养基冷却凝固后即可将果蝇转入培养。2 实验方法及操作步骤2.1果蝇的麻醉因为果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，可以对作种的果蝇轻度麻醉（果蝇翅膀外展45角表示已死亡）。将培养瓶口与麻醉瓶口对接，使麻醉瓶位于上方，由于果蝇具有趋光性，所以会往上面的瓶子爬。待果蝇全部进入麻醉瓶后，在麻醉瓶的棉塞上滴12滴乙醚，并迅速用棉塞将麻醉瓶塞住。半分钟左右，果蝇被麻醉，活动缓慢。若麻醉过度，果蝇两翅展开且肢体僵硬，说明已致死；若麻醉过轻，则果蝇会马上醒过来，对实验造成影响。因此，必须抓紧时间将果蝇移人培养瓶中。可将培养瓶横卧， 用干净毛笔把果蝇挑人，待果蝇清醒后，再竖立加塞，防止果蝇粘在培养基上。2.2果蝇的扩大培养 将麻醉好的果蝇放入培养瓶中，置于25的恒温箱中培养14天，使果蝇的数目增加至100只左右，培养过程中应每隔三天观察一次，观察培养基是否发霉、果蝇是否死亡等。若培养基发霉，应及时更换新培养基，以便实验顺利进行；若果蝇有死亡，应及时将尸体清除，防止尸体腐烂污染培养基。2.3果蝇雌雄的分辨培养果蝇，关键是要准确分辨雌雄。如果按性梳和腹背板上的条纹数来分辨，往往效果不佳，一则由于果蝇的姿态不同，观察的角度不同。雄性的性梳不易观察到。另外，在分辨处女蝇雌雄时，由于果蝇刚刚羽化，腹背条纹不清，性梳也不易分辨。所以在分辨果蝇的雌雄时，采用果蝇外生殖器的形态来分辨。雄性果蝇在腹部下部有突起的交尾器，上有粗黑刚毛，借助光学显微镜一眼就能看出，而凭肉眼只能看见腹部下部有一小黑点；雌性在腹部末端有管状产卵管，没有黑点。2.3果蝇的分瓶培养将麻醉好的果蝇倒入培养皿中分辨雌雄，具体操作参考2.1和2.3。分别在三个新培制的培养瓶中放入7只雄果蝇和3只雌果蝇，动作一定要迅速，防止麻醉后的果蝇苏醒后飞走。然后将三个培养瓶分别置于18、25和32的培养箱中培养七天，放飞亲代果蝇，继续培养子一代幼虫七天，将子一代果蝇麻醉并记录其数目。3 实验结果及分析3.1实验结果子一代果蝇数目记录表 温度数目性别雄果蝇雌果蝇总和1800025343872321822403.2结果分析 在三个温度中，25最适合果蝇的生长，子一代数目最多。低于或高于25，果蝇的生活周期都要变长，导致子一代数目减少，尤其18一组最明显。处于18的培养箱中的亲代果蝇，在培养时间为一个星期时，产生的幼虫极少。由于18的培养条件下卵到幼虫、幼虫到成虫的时间特别长（见附表1），所以把亲代果蝇放飞后继续培养一个星期，只有21只蛹，没有成蝇的出现。 温度为18一组的培养基，在多次培养过程中都不同程度的长霉。查询相关资料后得知,当环境温度不适应果蝇生长时（温度低于18），培养基接种后的7天内特别容易长霉。而实验时所用的培养箱的温度大多数时间为17.8，所以多次出现长霉现象。且该培养箱中的多数培养瓶都长霉，对于实验结果存在一定影响。 子一代果蝇中，雌果蝇数目略多于雄果蝇，但幅度不是太大，雌雄性别比基本符合1:1，符合孟德尔比数，说明性别和其他性状一样受遗传物质的控制。子一代幼虫培养过程中，32的恒温培养箱偶尔出现断电现象，对实验结果造成一定影响。参考文献【1】杨亚维，不同温度条件下果蝇染色体结构的变化J，四川动物2009,28(1)【2】彭晓云，果蝇培养效果的影响因子J，自然科学2006,27(9）【3】谢德娟，培养基对果蝇生长发育的影响J,自然科学2005，36（3）【4】龚慧明，果蝇培养基长霉