南板蓝根药材质量标准研究.doc

批准文号合同编号资助类别资助形式 重点攻关及产业化科技项目申报（合同）书项目名称： 南板蓝根药材质量标准研究 计划类别： 工业科技攻关 申报单位（盖章）： 江西本草天工科技有限责任有限公司（盖章） 联 系 人： 侯 莉 联系电话：通讯地址： 江西省南昌市阳明路56号 管理部门： 南昌市科技局 南 昌 市 科 学 技 术 委 员 会二五 年八月三十日 填 表 说 明 一、本科技项目申报（合同）书一表两用。在项目申报阶段作为科技项目申报书；经审批列入科技计划后，作为科技项目合同书。 二、封面“批准文号”、“合同编号”、“资助类别”、“资助形式”、“管理部门”由市科委填写。 三、“项目简介”要求内容简明扼要，字数不超过300字，着重说明本项目的主要研究内容、技术特点、项目的投资情况以及项目完成时预期的经济效益。 四、“技术来源”：1、自有技术；2、产学研合作开发技术；3、国内其它单位或个人技术；4、国外引进消化与创新技术；5、其它技术。请在相应数字后“”内打“”。 五、“技术领域”：电子 、信息、生物、医药、新材料、机电一体化、资源与环境、新能源、高效节能、汽车、纺织、精细化工、食品、农业、林业、畜牧、水产等。请在表中注明项目所处技术领域。 六、“所处阶段”：1、研发阶段；2、中试阶段；3、批量（规模化）生产；请在相应数字后“”内打“”。 七、“经济类型”：1、国有企业；2、集体企业；3、联营企业；4、私营企业；5、有限责任公司；6、股份有限公司；7、股份合作企业；8、外商投资企业；9、港澳台商投资企业；10、其它企业。“港、澳、台商投资企业”指与港、澳、台商合资经营企业，合作经营企业，港、澳、台商独资经营企业及港、澳、台商投资股份有限公司；“外商投资企业”指中外合资经营企业、中外合作经营企业、外资企业和外商投资股份有限公司。请在相应数字后“”内打“”。 八、“三项经费预算（分项表）”请据实填写，其中“审批经费”内容由市科委填写。 九、“技术水平”：国际领先、国际先进、国内领先、国内先进、省内领先、省内先进。“技术表达形式”：论文、新材料、新工艺、新产品（品种）、成熟产品（品种）。 十、“项目实施基础条件”要求填写项目实施在技术人才、资金投入、技术装备、企业管理及水电条件等方面的情况。 十一、“技术指标”要求注明项目研究开发产品（品种）执行的标准，项目完成后达到的具体技术性能指标。 十二、“经济指标”指项目完成后，达到的年产量、产值、利润、税收、创汇等。 十三、“社会与环境效益”指项目完成后，资源利用、人员就业、环境污染与防治等方面的 情况。 十四、“管理部门意见”、“项目管理”部分由市科委填写。一、 基本情况1、 项目简介（限300字以内）南板蓝根为感冒、解毒类用药的的主要药材来源之一，现收载于2005版中国药典一部，主产于南方地区，为该地区习惯用药，在我省有广泛的种植前景。近年来随着对南板蓝根化学成分和药理作用的深入研究，以其为原料药材的制剂不断出现。查其质量标准，一般只含有性状、检查、化学鉴别指标，难以对质量进行有效控制，不足以保证人们用药安全，迫切需要提高南板蓝根药材质量标准。本课题计划投资10万元，通过现代分析手段对南板蓝根进行深入研究，建立完善的质量控制体系。对规范药材种植，扩大销售量，稳定南板蓝根制剂的质量与疗效，促进以南板蓝根为原料药材制剂的开发与发展，增加企业的经济效益具有很重要的现实意义。同时为其它中药材质量标准的制定提供依据。2、 项目技术领域及所处阶段技术来源12 3 4 5技术领域医药所处阶段12 33、 项目承担单位主要承担单位单位名称江西本草天工科技有限责任公司单位地址南昌市阳明路56号法人代表吕爱平联系电 政编码330006经济类型1 2 3 4 5 6 7 8 9 10上级行政主管部门南昌市科技局合作或协作单位及其分工4、 项目主成员情况姓名性别年龄职务职称学历所学专业现从事 专业所在单位负责 人魏惠珍女40副教授硕士药物分析中药分析国家中药固体制剂工程研究中心主要参加人员席毅男25助理研究员学士应用化学中药分析国家中药固体制剂工程研究中心崔金国男27实习生硕士药物分析中药分析江西中医学院黎莉女23实习生硕士药物分析中药分析江西中医学院黄周华男22助理实验员大专药剂中药分析国家中药固体制剂工程研究中心张红红女23助理实验员大专药物分析中药分析国家中药固体制剂工程研究中心5、 三项经费预算（单位：10.0万元）费用名称申报经费审批经费备注设备、仪器购置费0.8万材料、样品加工费0 土建安装费0.1万资料、调研费0.5万实验、检测费3.0万鉴定费0.3万技术合作费0.3万其它费用0合计5万二、 立项依据1、 项目的目的、意义及国内外发展趋势、市场预测（一） 项目的目的与意义中药南板蓝根（Radix et RhizomaBaphicacanthi）为常用中药，主产于我国南方地区，为南方地区习惯用药，在我省有广泛种植前景，现收载于2005版中国药典一部，为爵床科植物马蓝Strbilanthes cusia(Nees)O.Kuntz的根茎和根，味苦、性寒，具有清热解毒，凉血等功效，临床主要用于温毒发斑,高热头痛及大头瘟等证。中药南板蓝根是感冒、解毒类用药的的主要的来源之一，近年来随着对南板蓝根化学成分以及药理作用的深入研究，以南板蓝根为主要原料药材的剂型不断出现，常见剂型有片剂（复方南板蓝根片）、冲剂（复方南板蓝根冲剂）、胶囊（感冒清胶囊）、栓剂（复方小儿退热栓）、注射液（板蓝解毒注射液）等。查中国药典以及各地方药品标准，原料药材南板蓝根的质量标准一般只含有有性状、检查、鉴别等指标。在现有质量标准去鉴别药材真伪和控制药材质量存在较大困难，有文献报道在现有标准下检测合格的不同批号原料药材所生产出南板蓝根制剂，其临床疗效存在很大差别，因此严格控制原料药材质量对稳定制剂疗效，保证人们用药具有重要意义，迫切需要提高南板蓝根药材质量标准。中药材质量标准现代化是我国中药现代化的基础，它对提升我国中药在国际地位，有着非常积极的意义。本研究课题通过现代分析手段对南板蓝根药材进行深入研究，提高南板蓝根药材质量标准，对规范药材种植，保证药材质量，稳定南板蓝根制剂的质量与疗效具有很重要的现实意义。 同时希望通过本课题建立南板蓝根质量标准的模式，为其他中药材质量标准的制定提供依据。（二） 国内外发展趋势 南板蓝根所含成分复杂,有靛蓝、靛玉红、有机酸、氨基酸、多糖等。但到目前为止,国内专家学者对板蓝根（南北）有效成分的认识存在很大的争议，现就板蓝根及其制剂在质量研究方面情况做一概述。1、以靛蓝、靛玉红作为有效成分的研究概况靛蓝、靛玉红为脂溶性成分,长期以来,一直被许多学者作为大青叶、南板蓝根、北板蓝根及板蓝根各剂型中的活性成分，作为质控指标用于其质量控制及制剂工艺的考察中。目前南板蓝和北板蓝根都含有靛蓝和靛玉红薄层鉴别项目。薄层扫描法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）是目前测定靛蓝和靛玉红含量最主要的方法，宾祖焕采用薄层色谱法测得广西那坡产南板蓝每g生药含靛玉红360g；王邦林等应用HPLC法建立了南板蓝根、北板蓝根、大青液中靛玉红、靛蓝分析测定方法：流动相为甲醇：水（90：10）色谱柱为C18ODS反相柱；对不同产地，不同品种，不同收集时间的大青叶、板蓝根共50多个品种进行分析的结果表明：它们之间靛玉红、靛蓝含量相差较大，南板蓝根以湖南长沙产的靛玉红含量（8.86g/g），以云南红河产的靛蓝含量（88.05g/g）为最高；北板蓝根则以河北安国产靛玉红含量（8.83g/g）和靛蓝含量（8.95g/g）为最高。目前南板蓝根制剂多采用水煎煮乙醇沉淀法提取及精制有效成分。张建军等通过薄层扫描法对板蓝根的氯仿提取物、水煮物、水煮物残渣、=95%醇提物、=50%醇提物中靛蓝、靛玉红的含量进行了考察,发现醇提法比水提法中靛蓝、靛玉红的含量高,=95%乙醇提取物中靛玉红的含量与=50%乙醇提取物中的含量相当;水提法中,靛蓝、靛玉红的含量极低,几乎全部遗留在残渣中。张建军等通过双波长扫描法追踪了水煮醇沉工艺中靛蓝、靛玉红的去向。发现靛蓝、靛玉红几乎全部存在于残渣中。李影等同样发现水煮醇沉工艺中靛玉红的损失率高达92.4%。 2、以多糖作为有效成分的研究概况 据文献报道,板蓝根多糖具有免疫调节作用,对特异性免疫和非特异性免疫、体液免疫均有一定的促进作用，因此,板蓝根多糖也被作为板蓝根药材及颗粒质量控制的一个活性指标。郑水庆等采用苯酚浓硫酸反应后分光光度法测定了板蓝根药材中多糖的含量。俞中仁等通过碘量法间接测定了板蓝根中还原糖的含量，并以还原糖为指标，讨论了板蓝根适宜的采收期，认为在夏季播种,延长采收时间，可获得质量好、产量高的板蓝根原料。马心舫则通过增加试剂量、温度控制在3035、放置15min的条件优化了还原糖测定的碘量法、改善了滴定前褪色不完全、有棕色物析出、终点不明显的缺点、并认为还原糖的含量可作为板蓝根注射液的一项质控指标。这个观点得到了许多学者的认可,他们同样也把还原糖的含量作为一项质控指标，用于药材及工艺的评价上。尽管板蓝根多糖具有以上功效,且多糖的免疫作用越来越受到人们的关注,但把板蓝根多作为板蓝根及其颗粒的一项主要质控指标仍然值得考虑,因为在板蓝根颗粒的水煮醇沉工艺下，绝大部分的多糖已被=60%的乙醇沉淀除去。4以氨基酸、有机酸作为有效成分的研究概况 板蓝根药材及其制剂中含有大量的水溶性的氨基酸成分，崔熙等认为氨基酸对于改善病人的蛋白营养状况,促进肝脏的修补和恢复,具有重要意义；通过对南、北板通过对南、北板蓝根的比较研究发现,南板蓝根中游离氨基酸的含量极低(几乎检测不到)，北板蓝根中游离氨基酸的总量为生药量的8.75%，许多地方标准及有关制剂工艺的研究文献均建立了离氨基酸的检测项目。据文献报道：南板蓝根中无论是总氨基酸还是精氨酸含量均较低，不易检出。而北板蓝根中精氨酸含量较高，易检出。崔熙等用高速氨基酸分析仪（日立83550型）测定了南板蓝根中游离氨基酸和水解氨基酸，测定结果为南板蓝根中游离氨基酸总量极低，无法列出；水解氨基酸的总量位为2.689%，精氨酸的含量亦较低，仅为0.114%。故采用游离氨基酸作为南板蓝根及其制剂的质控指标不可取。5、其它成分的研究概况刘训红等对四种大青叶中4(3H)喹唑酮的含量进行测定。色谱柱为C18 ODS反相柱，流动相为甲醇一水(4：6)；流速为08ml/min；检测波长为225nm。测定表明，马蓝叶中4(3H)喹唑酮的含量为7.2g/g。李玲等采用SFEHPLC法测定大青叶及板兰根药材中2，4(1H，3H)-喹唑二酮的含量，色谱条件为Nova-PakC18色谱柱， 流动相为甲醇一水(20：80)流速为0.8m1min；检测波长为230nm，板蓝根中喹唑二酮的含量测定结果：菘蓝平均含量为15.598g/g；三倍体菘蓝平均含量为17.752g/g；四倍体菘蓝平均含量为20.133g/g；李玲等采用用高效液相法直接测定马蓝中吲哚苷含量。色谱条件为YWG-C18H37（10m）（200mm x 4.6mm）色谱柱，流动相为甲醇-水(3070,);流速为1.5ml/min;紫外检长:230nm。结果得到马蓝根茎中吲哚苷含量0.070mg/g。（三） 市场预测 南板蓝根药材为我国中药的常用品种，每年的用量大，该项目的投入应用，对规范中药南板蓝根药材的种植，提高南板蓝根药材及其制剂的市场竞争力，保证人们用药安全有重要意义。同时为中药材质量标现代化建立模式，本项目的市场风险和技术风险很小。2、 项目研究开发内容、技术关键、技术方案或技术路线，预期技术水平及表达形式（一） 研究内容本课题通过对南板蓝根药材的系统研究，提高其质量标准，同时为其它药材质量标准的建立提供依据。在原有南板蓝根药材质量标准的前提下，增加药材指纹图谱、含量测定、重金属、农药残留、检查项等指标。（1） （1）建立药材指纹图谱；（2） （2）建立药材含量测定方法；（3） （3）建立药材重金属检测方法；（4） （4）建立药材农药残留的检测方法；（5） （5）增加检查项目中酸不溶性灰份、砷盐、浸出物等指标的限量范围；（6） （6）建立南板蓝根质量标准；（7） （7）比较南北板蓝根在新质量标准下的差异；（8） （8）比较与南板蓝根同科属植物马南与南板蓝根的差别。（9） （二）技术关键（1） 指纹图谱方法的建立；（2） 喹唑二酮含量测定方法的建立；（3） 重金属含量测定方法的建立；（4） 农药残留检测方法的建立。（三）技术方案 1.HPLC指纹图谱的建立南板蓝跟药材成分复杂，其制剂多采用水煎煮乙醇沉淀法，以此为依据建立指纹图谱。（1） 通过对提取方法与流动相梯度的选择，确定指纹图谱条件；（2）通过对10批次以上药材指纹图谱的比较，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（国家药典委员会）建立药材生成对照指纹图谱；（3）比较南北板蓝根、以及南板蓝根同科属植物马南指纹图谱之间的差别。2.含量测定方法的建立喹唑二酮具有抗类毒素和和抑菌作用，同时喹唑在南板蓝根药材、制剂工艺、以及制剂成品中都较稳定，含量变化小，故建立药材喹唑二酮的HPLC含量测定方法；（1） 通过对提取方法与流动相的选择，含量测定条件；（2） 建立喹唑二酮的HPLC含量测定方法，（3） 比较南北板蓝根、以及南板蓝根同科属植物马南喹唑二酮含量之间的差别。3.农药残留检测方法的建立 采用GC方法建立六六六(BHC)（包括BHC，BHC，BHC和BHC 4种异构体）；滴滴涕(DDT)（包括pp DDE，pp DDD，pp- DDT和op DDT 4种同系物）；五氯硝基苯(PCNB)等农药的检测方法。4. 重金属检测方法的建立重金属是药材质量标准重要指标之一，采用AAS建立简便、快速测定As、Cd、Pb、Hg、Cr、Cu等重金属元素的检测方法。5.在原有检查项下（总灰份、水分）增加酸不溶性灰份、砷盐、浸出物等指标。（三）技术路线1、建立指纹图谱技检测方法技术路线药材提取方法的选择色谱条件的选择化学成分的分析方法的确定指纹图谱的建立不同产地、采收期药材的比较2、含量测定方法技术路线药 材提取方法的选择色谱条件的选择检测方法的确定样品的测定（）建立检测方法和质量标准3、农药残留检测方法技术路线药材提取萃取磺化SPE样品检测（GC、GC-MS等）建立检测方法和质量标准4、重金属检测方法技术路线药材粉碎消解样品检测（AAS）建立检测方法和质量标准（四）预期技术水平及表达形式1.建立药材指纹图谱；2.通过对南板蓝根药材质量标准的研究，为其它药材质量标准的建立提供依据；3.提高和制定南板蓝根药材质量标准，申报国家中药材注册标准。4.在国家核心刊物上发表学术论文34篇，申请专利12项；3、 项目实施基础条件（1）2004年，本课题组正在进行板蓝解毒注射液指纹图谱（国家药典委员会课题）的研究，目前已对药材和注射液指纹图谱条件摸索作了初步的研究，为本课题的进行提供了很好的实验基础。（2）本课题组人员搭配合理，技术力量较强，其中拥有博士学位的2人，为本课题的实施提供了很强的人员保障。（3）江西中医学院已经通过了教育部的中药制剂国家重点试验室的立项检查，同时含拥有中药固体制造技术国家工程研究中心，有很好的试验条件，试验场地有6000多平方米，有价值1000多万元的现代化分析检测设备，为本课题的进行提供了很好的试验条件。（4）本课题如果得到资助，江西本草天工科技有限责任公司将提供一定数量的配套，为本课题的完成提供资金支持。三、 项目主要技术、经济指标和社会与环境效益技术指标（1）建立药材指纹图谱；（2）建立药材含量测定方法；（3）建立药材重金属检测方法；（4）建立药材农药残留的检测方法。（5）申报国家中药材注册标准。经济指标对规范企业南板蓝根药材种植，扩大产品的销售量、增加企业的经济效益。具有很重要的意义，本课题的应用有着巨大的市场前景。同时可以带动以南板蓝根为原料药材制剂的开发与发展，为企业带来巨大的经济效应。社会与环境效益中药材质量标准现代化是我国中药现代化的基础，它对提升我国中药在国际地位，有着非常积极的意义。通过本课题研究，建立完善的南板蓝根药材质量控制体系，增强人们对南板蓝根的认识和种植热情，以及鉴别真伪的能力，提高规范南板蓝根药材种植，扩大南板蓝根种植面积，保护南板蓝根资源。可利用该研究模式，给中药材质量标准的现代化研究提供一种思路，为迅速提高国内中药材质量提供借鉴，对中药的现代化有一定的促进作用。同时可以带动以南板蓝根为原料药材制剂的开发与发展，有利于提高南板蓝根制剂的质量标准，保证人们的用药安全。中心有多位多年从事中药质量研究的教授、博士，主持过多项国家课题的研究；有近6000平方米科研场所，近千万元的先进仪器设备，公司科技人员和江西中医学院实习研究生通过参与本课题的研究，可达到提高科技创新意识，增强专业知识和动手的能力。通过本课题的研究，可为中药质量分析专业培养34名专业人才。四、 项目工作进度安排起止年月主要工作资金使用安排（万元）自筹资金三项经费2005年8月12月文献调研，采购药材；喹唑二酮含量测定方法的建立；酸不溶性灰份、砷盐、浸出物等指标的限量范围；10.52006年1月5月南板蓝根药材指纹图谱条件的确定；南板蓝根药材指纹图谱的制定；南北板蓝根、以及南板蓝根同科属植物马南指纹图谱之间的比较。0.51.52006年6月2006年12月南板蓝根农药残留提取方法的确定；南板蓝根样品农药残留的测定以及测定方法的建立1.512007年1月4月南板蓝根重金属提取方法的确定；南板蓝根样品重金属的测定以及测定方法的建立1.51.52007年5月7月相关试验的补充；南板蓝根药材质量标准的建立和提高；专利的申请和试验资料的整理；论文的撰写。0.50.25五、管理部门意见项目管理人意见： 项目管理人(签章): 二 年 月 日科室负责人意见： 负责人（签章）：是否提交评估：是口 否口 二 年 月 日市科委审定意见：市科委资助经费总额： 二 年 月 日六、项目管理项目进展阶段项目进程及完成情况三项经费（万元）项目管理人（签章）第一阶段（ 年 月开始）第二阶段（ 年 月开始）第三阶段（ 年 月开始）第四阶段（ 年 月开始）七、共同条款1、本合同签字生效后，南昌市科委（以下简称甲方）按合同规定进度向项目承担单位（以