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饲料营养成分的测定1、饲料中水分的测定饲料中的水分存在形式有两种，一是游离水（又叫初水），二是吸附水。因此水分的测定一般包括初水和吸附水的测定，总水的计算。有些饲料如子实、糠麸类饲料和秸杆、干草等都处于风干状态，因此只测吸附水（也就是总水），不测初水和计算总水分的含量。1.1 初水分的测定1.1.1 仪器设备工业天秤，电热式恒温烘箱，剪刀，粉碎机，样本瓶，药匙，培养皿，筛子。1.1.2 测定原理含水分高的新鲜饲料在60-65烘箱中烘干至恒重，逸失的重量即为初水。1.1.3 测定步骤取平均样品200-300g，置于已知重量的培养皿中，先在80条件下，烘15min，然后放在60-65的烘箱中，进行干燥，干燥到样品容易磨碎（5-6h）。将烘干的样品放在室内自然的条件下冷却4-6h（不少于2h），便成为风干状态。称重：重复上述操作，直到两次称重之差不超过0.5g为止。1.1.4计算：初水分=烘干前后重量之差/鲜样品重*100%1.2 吸附水分测定（干物质测定）1.2.1 测定原理在1052烘箱内，在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为试样吸附水分。在该温度下干燥，不仅饲料中的吸附水被蒸发，同时一部分胶体水分也被蒸发，另外还有少量挥发油挥发。1.2.2 仪器设备称量瓶 ，烘箱，药匙，干燥器（用氯化钙或变色硅胶作干燥剂），分析天平，坩埚钳，小毛刷。1.2.3 测定步骤洁净的称量瓶，在105烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min ，称重，准确至0.0002g。重复以上动作，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。在已知重量的称量瓶中称取两份平行试样，每份2-5g（含水重0.1g以上，样厚4mm以下），准确至0.0002g，称量瓶不盖盖，在105烘箱中烘3h（温度到达105开始计时），取出，盖好称量瓶盖，在干燥器中冷却30min，称重，再同样烘干1h，冷却，称重，直到两次重量差小于0.0002g。1.2.4 测定结果的计算1.2.4.1 计算公式见下式：水分=（W1-W2）/（W1-W0）*100%式中：W1为烘干前试样及称量瓶重（g）；W2为105烘干后试样及称量瓶重（g）；W0为已恒重的称量瓶重（g）。1.2.4.2 重复性：每个试样应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。两个平行样测定值相差不得超过0.2%，否则重做。精密度：含水量在10%以上，允许相对偏差为1%；含水量在5-10%时，允许相对偏差为3%,含水量在5%以下时，允许相对偏差为5%。相对偏差=每个平行测定结果与两次平行测定结果平均值之差/两次平行测定结果平均值。1.2.5 注意事项1.2.5.1 加热时样本中有挥发物质可能与样本中水分一起损失，例如青贮料中的VFA。1.2.5.2 某些含脂肪高的样品，烘干时间长反而增重，为脂肪氧化所致，应以增重前那次重量为准。1.2.5.3 含糖分高的易分解或易焦化试样，应使用减压干燥法(70，600mm汞柱以下，烘干5h 测定水分)。1.3 SC69-02C型水分快速测定仪1.3.1 原理:使试样受红外线辐射波的热 能后，游离水分迅速蒸发后，即能通过仪器上的光学投影装置直接读出试样物质含水率的百分比。1.3.2 操作步骤1.3.2.1 干燥预热：预热5分钟，关灯冷却至常温。1.3.2.2 开灯20分钟后，用10g砝码校正零点。在加码盘中放置5克砝码，并在天平或仪器上称取试样5g。1.3.2.3 加热测试：开启红外灯，对试样进行加热，在一定的时间后刻度移动静止，表示水分蒸干，记录读数即为水分数。1.3.2.4 取下被测物和砝码。1.4 饲料总水分的计算饲料分析结果，通常都用风干状态样本的百分含量表示。为了将这些数字换算成原始饲料或绝干饲料的百分含量，必须计算总水分。计算公式：OB=Y+(100-Y)*X/100式中：OB为饲料中总水分的百分数；Y为初水分的百分数；X为吸附水百分数。2 饲料中粗蛋白质的测定2.1 国标法2.1.1 测定原理凯氏法测定试样含氮量，即在催化剂存在下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱并蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用标准盐酸滴定测得含氮量，乘以氮与蛋白质的换算系数6.25，计算粗蛋白质含量。2.1.2 仪器设备样品粉碎机，常量直接蒸馏装置或半微量水蒸汽蒸留装置，凯氏烧瓶（100或150ml），三角瓶（150或250ml），洗瓶（500ml），酸式滴定管（25ml），移液管（10ml），消化电炉。2.1.3 试剂及配制2.1.3.1 浓硫酸：比重1.84。2.1.3.2 硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠。2.1.3.3 40%NaOH溶液：40gNaOH溶于100ml蒸馏水中。2.1.3.4 标准硫酸胺：优级纯于105烘1-2h，干燥器内冷却备用。2.1.3.5 2%硼酸溶液：2g硼酸溶于100ml蒸馏水中。2.1.3.6 0.1mol/L盐酸：8.3mlHCL，加蒸馏水定容于1000ml 容量瓶中，混合均匀标定。2.1.3.7 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存3个月以内。2.1.3.8 盐酸溶液的标定：基准物无水碳酸钠于270-300灼烧1h至恒重，称0.2g(准至0.0002g)，溶于50ml蒸馏水中，加2滴指示剂，用HCL溶液滴定至灰红色。C(HCL)=W(Na2CO3)/0.053V(HCL)2.1.4 测定步骤2.1.4.1 试样的消化取0.5-1g试样（含氮量5-80mg），准确至0.0002g，无损地放入凯氏烧瓶中，加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾，与试样混合均匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃球。把凯氏烧瓶放在通风柜里的电炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加大火力（360-410），直至全部内容物呈透明的浅蓝色或白色为止。试剂空白测定：另取凯氏烧瓶一个，加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃球。加热消化至瓶内溶液澄清。另称量标准硫酸铵0.2g，同时按上述方法处理。结果应为21.190.2%。2.1.4.2 氨的蒸馏2.1.4.2.1 常量直接蒸馏法待试样消化液冷却，加蒸馏水60-100ml，摇匀，冷却。沿瓶壁小心加入50mlNaOH 溶液，立即与蒸馏装置相连，蒸馏装置冷凝管的末端应浸入25ml硼酸吸收液1cm。加混合指示剂2滴，轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀，加热蒸馏。直至馏水液体积约150ml。先将吸收液取下，再停止加热。2.1.4.2.2 半微量水蒸汽蒸馏法待试样的消化液冷却，加蒸馏水20ml，移入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。取20ml硼酸溶液，加混合指示剂2滴，使半微量装置的冷凝管末端浸入此溶液。准确移取试样分解液10-20ml，注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mlNaOH溶液，小心拉起玻璃塞使之进入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。注： 上述两种蒸馏法测定结果相近，可任选一种。2.1.4.3 滴定吸收氨后的吸收液立即用0.1mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色即为终点。将试剂空白测定之消化液和测回收率的硫酸铵的消化液同样处理。2.1.5 测定结果计算2.1.5.1 计算公式粗蛋白质= C(V1-V2)*0.014*6.25/(WV3/V)*100%式中：C为HCL标准液的浓度(mol/L)；W为样本重（g）；V1为滴定样品时所用HCL标准液体积数（ml）；V2为空白滴定所用盐酸标准液体积数（ml）；V为试样分解液总体（ml）；V3为试样分解液蒸馏用体积（ml）；0.014为氮的毫克当量；6.25为氮换算成蛋白质的平均系数。2.1.5.2 重复性每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当CP含量在25%以上，允许相对偏差为1%；当CP含量在10-25%，允许相对偏差为2%；当CP含量在10%以下，允许相对偏差为3%。2.2凯氏定氮仪法2.2.1 仪器及试剂准备同仲裁法2.2.2 操作步骤2.2.2.1 消化前准备2.2.2.1.1将抽气泵的螺口同水咀的内螺纹联接牢，然后将毒气罩上的胶管一头接在抽气泵的横出口处，抽气泵下端用胶管能止下水道（注：出水胶管长度不得超出30cm并不准弯曲），开足水咀，使抽气泵有足够的吸力。2.2.2.1.2 接通消化炉上的电源插座，开电源开关。2.2.2.2 消化操作2.2.2.2.1称取0.3-1g试样、液体2-5ml（含氮量5-80mg）准确到0.0002，干净无损失地转入清洗干净的消化、加入催化剂6.4g再加入浓硫酸8-25ml。2.2.2.2.2 将装有试样的消化管放在消化炉支架上，盖上毒气罩，向下压紧毒气罩锁牢两面锁钩。2.2.2.2.3 手提毒气罩中间连同装有试样的消化管一起移到电热炉上保持消化管在电炉中心，开始样品消化，保持消化管中液体连续沸腾，沸酸在瓶颈部下冷凝回流。待溶液消煮至无微小碳粒、呈兰绿色时继续消煮30-40min。2.2.3 蒸馏2.2.3.1 蒸馏前准备2.2.3.1.1仪器保持目测水平2.2.3.1.2 接通进水口、排水口，注意排水胶管出水口，不得高于仪器底平面，同时关闭排水阀门。2.2.3.1.3 接通电源，电源线必须有良好的接地线，时时必须保持同仪器相同，禁止接地借用零线，再检查电源是否牢靠。2.2.3.2 蒸馏操作2.2.3.2.1 先于电源总开关后开自来水龙头，使自来水经过给水口分别进入冷凝管和稳压泵，由稳压泵对蒸汽发生炉供水并进行汽的稳压。注意水流量以保证冷凝管起到冷却作用并预热15分钟。2.2.3.2.2 开蒸馏开关，待蒸汽导出管放出蒸汽时，关闭蒸汽开关，从观察窗观察待蒸发炉水位稳定（水位保持在电极底部）。2.2.3.2.3 在接收瓶托架上，放上已经加入适量（15ml）接收液（硼酸和混合批示剂）的锥形瓶，使蒸馏导出管未端浸入接收液中。2.2.3.2.4 按下消化管托架将消化好并冷却后的消化管，单个套在防溅管的密封圈上稍加旋转，其保持接口密封，抬上托架，关上防护罩。2.2.3.2.5 开蒸馏水开关，加蒸馏水约10ml左右，再加碱液开关，加适量NaOH溶液至蒸馏液碱性颜色变黑为止。2.2.3.2.6开抽吸开关，抽出消化管内残存废液，然后关抽吸开关，开蒸馏开关至蒸汽清洗约1min后关蒸馏开关，取下消化管，按上步骤可连续蒸馏。2.2.4 滴定吸收氨后的吸收液，用标定后的盐酸溶液进行滴定，溶液由兰绿色变为灰紫色为终点。2.2.5 空白测定用0.1g糖代替样品或不加样品作空白测定。2.2.6 测定结果计算2.2.6.1计算公式粗蛋白质%=(V2-V1)*C*0.014*6.25/W*100式中：V2-滴定试样时消耗酸标准溶液的体积（ml）V2-滴定空白时消耗酸标准溶液的体积（ml）C-酸标准溶液的mol/L浓度W-度样质量2.2.6.2平等测定的结果用算术平均值表示，保留小数后二位。2.3 饲料中真蛋白质的测定2.3.1 原理蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水中。用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀再测蛋白，得出真蛋白质的含量，用真蛋质与粗蛋白质含量之比(蛋白质比率)，可判断出鱼粉中是否掺入水溶性非蛋白含氮物质。鱼粉真蛋白质比率与指标：进口鱼粉中真蛋白质比率不得小于80%，国产鱼粉中真蛋白质比率不得小于75%。2.3.2 仪器设备样品粉碎机，常量直接蒸馏装置或半微量水蒸汽蒸留装置，凯氏烧瓶（100或150ml），三角瓶（150或250ml），洗瓶（500ml），酸式滴定管（25ml），移液管（10ml），消化电炉，中速定性滤纸，表面皿，玻璃棒，漏斗。2.3.3 试剂与溶液2.3.3.1 浓硫酸：比重1.84。2.3.3.2 硫酸铜、硫酸钾或硫酸钠。2.3.3.3 40%NaOH溶液：40gNaOH溶于100ml蒸馏水中。2.3.3.4 标准硫酸胺：优级纯于105烘1-2h，干燥器内冷却备用。2.3.3.5 2%硼酸溶液：2g硼酸溶于100ml蒸馏水中。2.3.3.6 0.1mol/L盐酸：8.3mlHCL，加蒸馏水定容于1000ml 容量瓶。2.3.3.7 硫酸铜水溶液：100g/L。2.3.3.8 25g/L NaOH溶液：25gNaOH溶于1000ml蒸馏水中。2.3.3.9 氯化钡试液：50g/L氯化钡水溶液。2.3.4 样品选取与制备同仲裁法2.3.5 测定步骤2.3.5.1 试样的处理：称取试样1-2克(精确至0.0001g)于200ml烧杯中，加水50ml煮沸，加入10%的硫酸铜溶液20ml和2.5%的氢氧化钠溶液20ml，边加边搅拌，加完后继续搅拌1min，放置1小时以上或静置过夜，沉淀物以中速定性滤纸过滤，用70以上热水反复洗残渣，直至滤液无硫酸根离子为止(取5%氯化钡试液5滴于表面皿中，加2mol/L盐酸1滴，滴入滤液，在黑色背景处观察应无白色沉淀)。将滤纸与残渣包好，放入烘箱，在65-75干燥2h.2.3.5.2试样的消化：将烘干的试样连同滤纸一起放入消化管中，以下操作同仲裁法或凯氏定氮仪法。2.3.6 结果计算2.3.6.1 计算公式粗蛋白质与真蛋白质含量计算方法同仲裁法或凯氏定氮仪法。真蛋白质比率(%)=真蛋白质含量/粗蛋白质含量*1002.3.6.2 重复性蛋白质含量在40%以上时允许相对平均偏差2%；蛋白质含量在40%以下时允许相对平均偏差2.5%。3 饲料中粗脂肪的测定饲料脂肪的测定，通常是将试样放在特制的仪器中，用脂溶性溶剂（乙醚、石油醚、氯仿等）反复抽提，可把脂肪抽提出来，浸出的物质除脂肪外，还有一部分类脂物质也被浸出，如游离脂肪酸、磷脂、蜡、色素以及脂溶性维生素等，所以称为粗脂肪。测定粗脂肪的方法常用的有油重法、残余法、浸泡法等。3.1粗脂肪测定仪法3.1.1 仪器和用具3.1.1.1 分析天平：感量0.0001g3.1.1.2 实验室用粉碎机或研钵3.1.1.3干燥箱3.1.1.4备有变色硅胶的干燥器3.1.1.5脱脂棉、广口瓶、脱脂细纱、脱脂线3.1.1.6脂肪测定仪及用具3.1.1.7滤纸筒：用直径125mm圆形滤纸摺成外径24mm左右，长度50mm左右的滤纸筒3.1.2 试剂无水乙醚，AR级3.1.3 操作步骤3.1.3.1 检查电源上否完好，水源是否接牢，开电源开关，设定温控仪和调温旋扭温度，预热15分钟。3.1.3.2 将抽提筒用开水洗净，洗至筒内无任何杂质，置于干燥箱内烘1小时左右（105）取出编号，称重后移入干燥器内冷却备用，编号并称重。3.1.3.3 试样准备3.1.3.3.1 粮食、饲料等低油样品，可直接称取粉碎样品2克左右，精确至0.0002克，先在滤纸筒内底部塞一层脱脂棉，然后将样品转入筒内，再用脱脂棉盖在试样上。3.1.3.3.2 油料等高油样品在备用试样中称取2克左右试样，倒入烘盒中，放入干燥箱中在105温度下烘30分钟趁热加入研钵中进行研磨，磨粹后，加入适量的脱脂细砂（约2克左右）与试样同磨，将试样研至出油状后，干净地转入在底部塞脱脂棉滤纸筒内，用脱脂棉醮少许乙醚，揩净研钵上试样和脂肪，并入滤纸筒内，再用脱脂棉盖在试样上。3.1.3.4 试样转入仪器，手握提把，使速节通近软轴提至适当位置，将滤纸筒上口对准速节吸合即可，然后拉下提把，将滤纸筒移至适当高度（使抽提筒放入时不碰），并观察滤纸筒时否在冷凝管中心。3.1.3.5 将抽提筒从干燥器中取出，置于托架上，在抽提内加入适量的无水乙醚约50ml，然后手握托架手柄将抽提筒移入加热板上，然后用托架将抽提筒抬上，使抽提筒上口对准下保护套的园柱孔，保证二平面接触良好，拉下压杆使锁紧勾子同座子锁牢，然后再将抽提筒稍加旋转，以保证二平面接触良好。3.1.3.6 接通水源给水管、排水管，开启冷凝管旋塞至手柄方向垂直于水平面。3.1.3.7 手握提把上移，将试样降入抽提筒底浸泡，此时，将温控仪和调温旋扭温度设置为60-70，具体按溶剂沸点及室温度。3.1.3.8 从溶剂挥发开始浸泡适当时间，将滤纸筒年长约5cm，进行抽提，再将滤纸筒提升1cm，同时将冷凝管旋塞塞至手柄方向平行于水平面进行溶剂回收，时间约为15分钟。3.1.3.9 关闭电源，左手握住压杆，拉开锁紧勾子，使冷凝管复位，同时右手握住托架手柄将托架上抬，等冷凝管复位后，用托架皎抽提筒在加热板上取出，待溶剂完全挥发后转入干燥箱中烘去水分，一般为45分钟（105）后移入干燥器内冷却称量，计算含油量，最好使所得油脂达到恒重（即多次烘干、冷却、称量，使最后二次称重，前后重差在0.002g以内）。3.1.3.10 将滤纸筒移至适当位置，摘下滤纸筒后，取出回收溶剂，回收时将溶器放在冷凝管下部，容器口对准冷凝管下口完全打开旋塞，等到聚集在冷凝管内的溶剂流完为止，取出盛有回收溶剂的容器，倒入大容器中以备用。3.1.3.11 使用结束，关闭电源，擦洗干净。3.1.4 时间表含油量(%)浸泡时间(h)提抽时间（h）0.5-50.515-151115-2511.525-351.51.535-452.5245-6032.53.1.5 结果计算粗脂肪%W1/W2*100W1-粗脂肪重量W2-试样重3.2 国标法3.2.1 测定原理用乙醚等有机溶剂反复浸提饲料样本，使其中脂肪溶于乙醚，并收集于盛醚瓶中，然后将所有的浸提溶剂加以蒸发回收，直接称量盛醚瓶中的脂肪重，即可计算出饲料样本中的脂肪含量。3.2.2仪器设备索氏脂肪抽提器，恒温水浴锅，干燥器，坩埚坩，烘箱，镊子，称量瓶，分析天平，滤纸或滤纸筒（中速脱脂）。3.2.3 试剂无水乙醚（化学纯）。3.2.4 测定步骤3.2.4.1 索氏提取器应干燥无水，将抽提瓶洗净于1052干燥箱中烘干30min，然后置于干燥器中冷却30min，称重，如此反复进行，至最后两次重量之差小于0.0008g为止。3.2.4.2 精称风干样品2g左右于滤纸筒中或用滤纸包好，并用铅笔注明标号，放入105烘箱中烘干2h。滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度。应以可全部浸泡于乙醚中为准。3.2.4.3 将滤纸筒或包放入抽提管中，在抽提瓶中加无水乙醚60-100ml，在60-75的水浴上加热，使乙醚回流每小时约为8-10次。浸提时间依样品中脂肪含量而定。一般约需8-16h或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。3.2.5 结果计算3.2.5.1 计算公式粗脂肪=(W2-W3)/W1*100%式中：W1为样品重（g）；W3为抽提瓶重（g）；W2为盛有脂肪的抽提瓶重量（g）。3.2.5.2 重复性每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗脂肪含量在10%以上，允许相对偏差为3%。粗脂肪含量在10%以下时，允许相对偏差为5%。4 饲料中粗纤维的测定4.1 粗纤维测定仪4.1.1仪器和用具4.1.1.1粗纤维测定仪4.1.1.2分析天平4.1.1.3干燥箱4.1.1.4高温炉4.1.1.5粉碎机及分样筛4.1.1.6干燥器4.1.2 试剂硫酸、氢氧化钠、95%乙醇、乙醚、正辛醇4.1.3 操作前准备4.1.3.1试剂制备4.1.3.1.1硫酸溶液（0.128mol/L）：取浓硫酸约75ml，用蒸馏水稀释到1000ml，用已知浓度的NaOH液标定后，调整其浓度至1.280.005mol/L的硫酸原液，用前用蒸馏水稀释10倍即可。4.1.3.1.2碱溶液（0.312mol/L）：取饱和NaOH溶液（680g/L）约190ml，用不含CO2蒸馏水稀释500ml，用已知浓度的酸液标定后，调整其浓度至3.120.005mol/L的碱原液，用前用蒸馏水稀释10倍即可。4.1.3.2样品制备4.1.3.2.1取有代表性的样品，拣去杂质，按四分法取25g左右。4.1.3.2.2 将样品置在60-65烘箱骨干燥8小时左右，冷却后粉碎，全部通过0.84mm2(20目)筛子，其中大于40目的不得小于50%，小于60目不得大于10%。4.1.3.2.3样品中的脂肪含量超过1%需要脱脂，（可用测定粗脂肪后残渣分析）。4.1.3.2.4将坩锅用开水洗净，洗至坩锅内无杂质，置于干燥箱内105烘1小时，移入干燥器内冷却至室温，编号，再置于干燥箱内备用。4.1.4 操作步骤4.1.4.1 在已编号后的坩锅内准确地称取净干的平均试样或烘干无水的脱脂1-3g（谷物2-3g）准确至0.0001g。4.1.4.2接通电源、水源、开启主机电源开关（自来水尽是开足保证冷凝）。4.1.4.3打开酸、碱预热瓶上盖，分别加入已制备的酸碱溶液及蒸馏水，加至预热瓶的90%，盖上冷凝球。4.1.4.4开启酸预热电源开关，预热酸至微沸。4.1.4.5将装有试样的坩锅移入仪器温室中，下部放入坩锅座中心，上部对准消煮管下的保护套的内孔，压下手柄并锁紧再一次检查坩锅位置是否准确后，将下阀全部关闭，逐个拉出加热器手柄。4.1.4.6开启酸阀，逐个开上阀，在消煮管内加入少量约5ml硫酸溶液，再开吸开关，逐个开下阀，抽尽溶液，关吸开关和全部下阀。然后将乙预热好的硫酸溶液加至150ml后，再在每个消煮管内加入3-4滴正辛醇，开定时器同时按需要分别开中热器电源开关，调节选位旋钮可观察单个加热电压。并将电压调至最高（220V）同时开启蒸馏水预热开关（预热水至沸点）。待消煮液微沸，将电压逐个调至样品无沉淀时将定时旋钮旋至30min，保持消煮液微沸（如发现试样粘壁可补加消煮液），到时加温自动停止。4.1.4.7开吸开关，再逐个开下阀将消煮液快速抽掉（在10min内抽尽）并用热水洗涤残渣至中性（约三次）后抽尽洗液，在抽滤过程中如发现坩锅被堵塞时关吸开关，开吹开关用气流反冲，发现消煮管内出现气泡后关吹开关开吸开关继续抽吸。4.1.4.8按4.6步骤进行碱消煮。4.1.4.9按4.7方法抽洗碱消煮液，逐个推进加热器手柄。4.1.4.10脱色和胶脂，全部关闭下阀，用胖肚吸管分别在消煮管上口分三次加入95%乙醇浸泡、抽滤（总共约20ml，每次泡浸时间约1min）后，再分三次加入乙醚冲洗（每次约20ml），若已脱脂样品不需要用乙醚冲洗。4.1.4.11左手压下手柄拉出锁紧勾子缓缓上升，使其复位，带好手套取出存有试样的坩锅，待乙醚和乙醇全部挥发完，再移入干燥箱内在130温度下烘2小时，取出置于干燥器内冷却至室温称重（A1）。4.1.4.12将称重后的坩锅置入550电阻炉内灼烧30min，待炉温降至200以下，从电阻炉内取邮置于干燥器内冷却至室温称重（A2）。4.1.5结果计算CF%（A1-A2）S1100CF粗纤维的百分含量（%）A1坩锅+粗纤维+残渣及灰分质量（g）A2坩锅+残渣及灰分质量（g）S1-试样重量(g)4.2 国标法4.2.1 测定原理用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去醇溶解物，经高温灼烧扣除矿物质量，所余量即为粗纤维。粗纤维不是一个确切的化学实体，主要由纤维素和少量半纤维素、木质素等组成。4.2.2 仪器设备抽滤装置（抽真空装置、抽滤瓶及漏斗），电炉，马福炉，高型无嘴烧怀，冷凝球，古氏坩埚，干燥箱，量筒（200、50ml）、酸洗石棉。4.2.3 试剂及配制4.2.3.1硫酸溶液（0.128mol/L）：取浓硫酸约75ml，用蒸馏水稀释到1000ml，用已知浓度的NaOH液标定后，调整其浓度至1.280.005mol/L的硫酸原液，用前用蒸馏水稀释10倍即可。4.2.3.2 碱溶液（0.312mol/L）：取饱和NaOH溶液（680g/L）约190ml，用不含CO2蒸馏水稀释500ml，用已知浓度的酸液标定后，调整其浓度至3.120.005mol/L的碱原液，用前用蒸馏水稀释10倍即可。4.2.3.3 乙醚、95%乙醇、正辛醇。4.2.4 测定步骤4.2.4.1 酸处理：精称样本1-2g左右（若样本脂肪含量在8%以上，须先用乙醚脱脂），小心放入500ml高型无嘴烧杯，用量筒准确加入200ml硫酸 ,加一滴防泡沫剂，并在液面处划一刻度线。然后放在电炉上，装上冷凝球，通入冷水，加热使溶液在1min内沸腾，记时，维持微沸状态30min，取下加入蒸馏水200ml，静置15-20min，待样品下沉后，在抽滤装置上抽去上清液，再用少量蒸馏水冲洗漏斗。滤布处附着样本于无嘴烧杯中，然后用NaOH溶液中和至沉淀液呈中性（用广泛试纸检查）。4.2.4.2 碱处理：在无嘴烧杯中加入NaOH溶液至200ml刻度处，将无嘴烧杯在电炉上如酸处理一样微沸处理30min，取下加入蒸馏水200ml，静置15-20min，抽去上层清液，冲洗滤布后，用硫酸调至中性。4.2.4.3 抽滤：将经酸、碱处理后的中性沉淀液移入辅有石棉的古氏坩埚中抽滤，然后将烧杯壁残渣完全洗于坩埚中抽滤，再用乙醇25ml冲洗坩埚中的残渣。4.2.4.4 烘干灰化：取下坩埚，用纱布将其外壁擦净，放入105烘箱中烘至恒重，然后于电炉上小心炭化至无烟后，放入550高温电炉灼烧30min，称重，再灼烧15min，冷却称重，直至恒重为止。4.2.5 结果计算4.2.5.1 计算公式同粗纤维测定仪法4.2.5.2 重复性：每个试样应取两个平行样测定，以其算术平均值为结果。粗纤维含量在10%以下，允许绝对值相差0.4；粗纤维含量在10%以上，允许相对偏差为4%。5 饲料中粗灰分的测定试样经灼烧完全后，余下的残留物质（如氧化物和盐）称为灰分。灰分有水溶性与水不溶性，酸溶性、酸不溶性。水溶性灰分大部分是钾、钠、钙、镁等氧化物和可溶性盐，水不溶性灰分除泥沙外，还有铁、铝等的氧化物和碱土金属的碱式磷酸盐。酸不溶性灰分大部分为污染掺入的泥沙和原来存在于动植物组织中经灼烧成的二氧化硅。5.1 测定原理饲料中灰分的测定一般采用灰化法。将试样在550烧灼，使构成饲料有机物的主要元素C、N、H、等氧化，所余残渣即饲料中所含各种矿物元素的氧化物、氯化物及碳酸盐，以及混杂在饲料中粘土、砂粒等，称为粗灰分。5.2 仪器设备样品粉碎机，分析天平（感量0.0001g），电炉，坩埚钳，马福炉，瓷坩埚(50ml)，干燥器（变色硅胶作干燥剂）、40目分样筛。5.3 试剂及配制0.5%氯化铁墨水溶液（称0.5g氯化铁溶于100ml蓝墨水中）5.4 测定步骤5.4.1 将带盖坩埚洗净烘干后，用钢笔蘸0.5%氯化铁墨水溶液编号。5.4.2 将坩埚和盖一起放入马福炉，在55020下灼烧30min，称重再重复灼烧，冷却、称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重量。5.4.3 在已知重量的坩埚中称取2g左右试样（不超过坩埚容量的一半，灰分重量应在0.05g以上），在电炉上低温碳化至无烟为止。5.4.4 炭化后将坩埚移入马福炉中，于550下灼烧3h，使全部样品变成灰白色或红棕色（含有锰）。待灰化结束后，待炉温降至200下时打开炉门，将坩埚取出于空气中冷却1min.，放入干燥器中冷却30min，称重。再同样灼烧1h，冷却，称重，直至两次重量之差小于0.001g 为恒重量。5.5 结果计算5.5.1 计算公式：粗灰分=(W2-W0)/(W1-W0)*100%式中：W0为已恒重量空坩埚重（g）；W1为坩埚加试样重（g）；W0为灰化后坩埚加灰分重(g)。5.5.2 重复性：每个试样应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗灰分含量在10%以上，允许相对偏差为0.5%；粗灰分含量在5-10%以上，允许相对偏差为1%；粗灰分含量在5%以下，允许相对偏差为5%。5.6 注意事项5.6.1 样品开始炭化时，应打开部分坩埚盖，便于气流流通；温度应逐渐上升，防止火力过大而使部分样品颗粒被逸出的气体带走。5.6.2 为了避免样品氧化不足，不应把样品磨得太细，压得过紧，样品应松松地放在坩埚内。5.6.3 灼烧温度不宜超过600，否则会引起磷、硫等盐的挥发。5.6.4 灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关，含铁高时为红棕色，含锰高为淡蓝色。但有明显黑色炭粒时，为炭化不完全，应延长灼烧时间。6 饲料中钙的测定钙的测定方法有高锰酸钾氧化还原滴定法、EDTA络合滴定法、原子吸收分光光度法等。高猛酸钾法操作繁复，但准确度高，重复性好，为国家标准仲裁分析法。EDTA络合滴定法手续简便、快速、适合于大批样品的测定，为国家标准快速测定钙方法。6.1 高锰酸钾氧化还原滴定法6.1.1 测定原理饲料样品灰化后，用盐酸溶解，然后在溶液中加入草酸铵，使钙成为草酸钙白色沉淀，然后用硫酸溶解草酸钙再用标准高锰酸钾溶液滴定游离的草酸根离子。6.1.2 仪器设备烧杯，量筒,吸耳球，定量滤纸，洗瓶，电炉，容量瓶（100ml），漏斗，移液管（10、20ml），表面皿，玻璃棒，酸式滴定管（25ml:）。6.1.3 试剂及配制6.1.3.1 1:3盐酸溶液。6.1.3.2 1:3硫酸溶液。6.1.3.3 1:1氨水溶液。6.1.3.4 4.2%草酸铵溶液。6.1.3.5 甲基红乙醇溶液(0.1g溶于100ml乙醇中)。6.1.3.6 浓硝酸6.1.3.7 0.05mol/L高锰酸钾溶液6.1.3.7.1 配制：称取高锰酸钾约1.6克，溶于1000ml水中，煮沸10min，冷却静置1-2天，用沙芯漏斗过滤，滤液保存于洁净的棕色瓶中备用。6.1.3.7.2 标定：准确称取0.1克基准草酸钠(105烘干2h)，准确至0.0002g，溶于50ml水中，再加硫酸溶液10ml，将此溶液加热至75-85。用配好的高锰酸钾标准溶液滴定。-滴定至溶液呈粉红色且1min内不褪色为止。滴定结束后，溶液温度应保持在60以上。按以下公式计算：C=m/0.067(V-V0)C为高锰酸钾标准溶液浓度(mol/L)V滴定时消耗高锰酸钾标准溶液体积(ml)V0空白滴定时消耗高锰酸钾标准溶液体积(ml)M基准草酸钠质量(g)6.1.4 测定步骤在粗灰分测定样本中，加HCL10ml和数滴浓HNO3 ，小心煮沸，将此液转入100ml容量瓶中，再加以热水冲洗坩埚，冷至室温后，定容混匀备用。用移液管准确吸取样本液10-20ml于烧杯中加入甲基红两滴，滴加氨水溶液至溶液由红变橙黄色。再滴加盐酸溶液至溶液又呈红色（PH为2.5-3.0）为止。加热煮沸后趁热加入草酸铵10ml边加热边搅拌。若溶液由红变黄（或桔黄），则需滴加HCL又呈红色，煮沸3-4min后，放置过夜（或在水浴上加热2h）。用定量中速滤纸过滤，弃去滤液，用1:50氨水溶液冲洗烧杯及滤纸上的草酸钙沉淀6-8次，直至草酸钙被洗净为止（接取滤液2-3ml，加硫酸数滴，加热80后，加高锰酸钾1滴，如溶液呈微红色，且1-2min不褪色即可）。沉淀和滤纸转移入原烧杯中，加硫酸溶液10ml，蒸馏水50ml，加热至75-85，立即用高锰酸钾-滴定至溶液呈微红且30s不褪色为止。在干净烧杯中加滤纸1张，硫酸10ml,蒸馏水50ml,=# 1#3 后，加热至75-85，立即用高锰酸钾-滴定至溶液呈微红且30s不褪色为止。6.1.5 结果计算6.1.5.1 计算公式：C(Ca)=(V3-V0)*C*0.02*V1/V2/W*100%式中：W为样本重（g）；V1为样本灰化液稀释用量（ml）；V2 为测定钙时样本溶液用量（ml）；V3 为滴定样本高锰酸钾用量（ml）；V0为滴定空白液高锰酸钾用量（ml）；C为高锰酸钾溶液浓度（mol/L）。6.1.5.2 重复性：样品应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。Ca含量在5%以上，允许相对偏差3%；含量在5-1%时，允许相对偏差5%；含量在1%以下，允许相对偏差10%。6.1.6 注意事项6.1.6.1 高锰酸钾溶液浓度不稳定，至少每月标定一次；6.1.6.2 每种滤纸空白值不同，消耗高锰酸钾标准液的用量不同，至少每盒滤纸做一次空白测定。6.2 EDTA络合滴定法6.2.1 试剂及配制6.2.1.1 硝酸6.2.1.2 三乙醇胺（分析纯）(1+1)水溶液6.2.1.3 钙红指示剂,1g钙试剂羧酸钠盐与99gNaCl（分析纯）混匀研细。6.2.1.4 盐酸羟胺（分析纯）6.2.1.5 孔雀绿指示剂：0.1g 指示剂溶于100ml蒸馏水。6.2.1.6 20%NaOH6.2.1.7 EDTA标准液(0.05mol/L)：精称分析纯乙二胺乙酸二钠盐19g溶于水，稀释成1000ml，摇匀备用。6.2.1.7.1 标定滴定度：含钙1mg的标准液10ml按样品测定法进行，这时EDTA:对钙的滴定度为：T=CV/V0C为钙标准溶液浓度；V为吸取钙标准溶液的体积；V0为EDTA标准溶液滴定消耗的体积。6.2.1.7.2 浓度标定：称取1克于800灼烧至恒重的基准氧化锌，称准至0.0002g。用少量水湿润，加20%盐酸溶液至样品溶解，移入250ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。取30-35ml，加70ml水，用10%氨水溶液 中和至PH7-8，加10ml氨-氯化铵缓冲溶液(54gNH4CL，溶于水，加15mol/L氨水394ml，稀释至1L)及5滴铬黑T指示液(5g/L)，用配制好的EDTA滴定至溶液由紫色变为纯蓝色。同时作空白试验。计算公式为C=m/(V1-V0)*0.08138其中：V1为EDTA之用量；V0为空白试验之用量；m为氧化锌之质量。6.3 测定步骤按高锰酸钾法制各样本分解液后，准确吸取分解液10ml于150ml三角瓶中，加三乙醇胺溶液2ml，蒸馏水50ml，孔雀绿指示剂1滴，用20%NaOH溶解至无色，再加以NaOH液2ml，立即加0.1g盐酸羟胺和少量钙红指示剂，并立即用EDTA标准液滴定至溶液由紫红色变为纯蓝色为止。6.4 结果计算C(Ca)=TV2V0/(10mV1)式中：T为滴定度V2实际消耗EDTA标准液的体积V1分取试样分解液的体积V0试样分解液的部体积m试样的质量或C(Ca)=CEDTA(V-V0)40.1/m式中V为消耗EDTA的体积，V0为空白试验之用量m为试样的质量。7 总磷的测定7.1 测定原理先将试样中有机物破坏，在酸性溶液中使磷酸与偏钒酸和钼酸铵生成黄色化合物，在波长420mm下进行比色测定。7.2 仪器设备分光光度计，容量瓶或具塞比色管（50ml），容量瓶（100ml或1000ml），刻度移液管。7.3 试剂及配制7.3.1 盐酸（1:1水溶液）7.3.2 浓硝酸7.3.3 钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加硝酸250ml；另取钼酸铵25g，加蒸馏水100ml溶解之，在冷却条件下将此溶液倒入上溶液，且加蒸馏水调至1000ml，避光保存。如生成沉淀则不能使用。7.3.4 磷酸标准溶液：将磷酸二氢钾在105干燥1h，在干燥器中冷却后称0.2197g，溶解于蒸馏水中定量转入1000ml溶量瓶中，加硝酸3ml，用蒸馏水稀释到刻度，即成50ug/ml的磷标准溶液。7.4 测定步骤在粗灰分测定样本中，加HCL10ml和数滴浓HNO3 ，小心煮沸，将此液转入100ml容量瓶中，再加以热水冲洗坩埚，冷至室温后，定容混匀备用。7.4.1 标准曲线绘制：准确移取磷标准溶液0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色试剂10ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min以上。以0ml溶液作参比，用1cm比色池，在420波下，用分光光度计测各溶液的吸光度，以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。7.4.2 试样测定：准确移取试样分解液1-10ml（含磷量50-500ug）于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色试剂10ml，按标准曲线绘制的方法显色和比色测定，测得试样分解液的吸光度，由标准曲线查得试样分解液的含磷量。7.5 结果计算7.5.1 计算公式:P(%)=100X/mV式中：m为试样重（g）；V为比色测定时所移取试样分解液体积（ml）；X为由标准曲线查得试样分解液含磷量（ug）。7.5.2 重复性：每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含磷量在0.5%以上允许相对偏差3%；含磷量在0.5%.以下，允许相对偏差10%。7.6 注意事项7.6.1 比色时，待测液磷含量不宜过浓，最好控制在每毫升含磷0.5mg以下。7.6.2 待测液在加入试液后应静置10min，再进行比色，但不能静置过久。8 饲料级DL-蛋氨酸的测定8.1 测定原理在中性介质中准确加入过量的碘溶液，将两个碘原子加到蛋氨酸的硫原子上，过量的碘溶液用硫代硫酸钠标准滴定溶液回滴。8.2 试剂与材料8.2.1 磷酸氢二钾溶液：500g/L8.2.2 磷酸二氢钾溶液：200g/L。8.2.3 碘化钾溶液：200g/L。8.2.4 碘溶液：C(1/2 I2)约0.1mol/L。8.2.5 硫化硫酸钠标准滴定溶液：C(NaS2O4)约0.1mol/L。8.2.6 淀粉溶液：10g/L 。8.3 分析步骤称取试样0.23-0.25g(精确至0.0002g)移入500ml碘量瓶中，加入70ml无离子水，然后分别加入下列试剂：10ml磷酸氢二钾溶液、10ml磷酸二氢钾溶液、10ml碘化钾溶液，待全部溶解后准确加入50ml碘溶液，盖上瓶盖，水封，充分摇匀，于暗处放置30min.，用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定过量的碘，近终点时加入1ml淀粉指示剂，滴定至无色并保持30s为终点，同时做空白试验。8.4 结果计算8.4.1 计算公式以质量分数表示的蛋氨酸含量（X1）按下式计算：X1=C(V-V0)*0.0746/m式中：C为硫代硫酸钠标准滴定溶液的实际浓度（mol/L）；V为滴定试样时消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积（ml）；V0为空白消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积（ml）；m为试术的质量（g）0.0746为与1.0ml硫代硫酸钠标准滴定溶液C(NaS2O4)=1mol/L相当的、以克表示的蛋氨酸的质量。所得结果应表示至一位小数。8.4.2 允许差取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不得大于0.1%。9 饲料级L-赖氨酸盐酸盐含量的测定9.1 试剂和溶液甲酸、冰乙酸、a-萘酚苯基甲醇指示剂0.2%(m/v)冰乙酸指示液、高氯酸：浓度约为0.1mol/L的冰乙酸标准溶液。9.2 测定步骤试样预先在105干燥至恒重，称取干燥试样式0.2g，称准至0.0002g，加3ml甲酸和50ml冰乙酸，再加入5ml乙酸汞的冰乙酸溶液，加入10滴a-萘酚苯基甲醇指示液，用0.1mol/L高氯酸的冰乙酸标准溶液滴定，试样液由橙黄色变为黄绿色即为滴定终点。用同样方法另作空白试验以校正之。9.3 结果计算9.3.1 计算公式：赖氨酸盐酸盐的百分含量按下式计算：0.09132*C*(V-V0)/m式中：c为高氯酸标准溶液之浓度（mol/L）；V为试样消耗高氯酸标准液之体积（ml）；V0为空白试验消耗高氯酸标准溶液之体积（ml）；m为试样之质量（mg）；0.09132为每毫摩尔赖氨酸盐酸盐之质量（g）。9.3.2 两个平行试样测定结果之差不得大于0.2%，以其算术平均值报告结果。10 饲料中水溶性氯化物的测定方法本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。检测范围氯元素含量为0-60mg。10.1 方法原理溶液澄清，在酸性条件下，加过量标准硝酸银使样品溶液中的氯化物形成氯化银沉淀，除去沉淀后，用硫氰酸铵滴定过量的硝酸银，根据消耗的硫氰酸铵的量，计算出其氯化物的含量。10.2 试剂实验室用水应符合GB6682中三级水用水的规格。使用的试剂除特殊规定外应为分析纯。10.2.1 硝酸。10.2.2 硫酸铁（60g/L）：称取硫酸铁60g，加水微热溶解后，调成1000ml。10.2.3 硫酸铁指示剂：250g/L硫酸铁水溶液，过滤除去不溶物，与等体积浓硝酸混合均匀。10.2.4 氨水：1+19水溶液。10.2.5 硫氰酸铵c=0.02mol/L ：称取硫氰酸铵1.52g溶于1000ml水中。10.2.6 氯化钠标准贮备液：基准级氯化钠于500灼烧1h，干燥器中冷却保存，称5.8454g溶解于水中，转入1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此氯化钠标准贮备液的浓度为0.1mol/L。10.2.7 氯化钠标准工作液：准确吸取氯化钠标准贮备液20.00ml于1000ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此氯化钠标准工作液的浓度为0.02mol/L。10.2.8 硝酸银标准溶液c=0.02mol/L ：称取3.4g硝酸银溶于1000ml水中，贮于棕色瓶内。10.2.8.1 体积比：吸取硝酸银溶液20ml，加硝酸4ml，指示剂2ml，在剧烈摇动下用硫氰酸铵溶液滴定，滴至终点为持久的淡红色，由此计算两溶液的体积比（F），计算公式为：F=20/V2式中：F为硝酸银与硫氰酸铵溶液的体积比；20为硝酸银的体积（ml）；V2 为硫氰酸铵溶液体积（ml）。10.2.8.2 标定：准确移取氯化钠标准溶液10ml，于100ml容量瓶中，加硝酸4ml，硝酸银标准溶液25ml，振荡使沉淀凝结，用水稀释至刻度，摇匀，静置5min，干过滤入干锥形瓶中。吸取滤液50ml，加硫酸铁指标，用硫