地塞米松实验设计 v - 002.doc

免疫抑制剂（地塞米松）对家兔异型输血的影响（临床专业，07级2班，吴菲43号，李志鹏44号，李媛媛45号，吴剑宏46号）（一）立题依据及实验内容输血是临床上最重要的医疗手段之一，随着其技术的广泛应用，安全输血成为输血工作中的一个重要研究课题。临床上输血不良反应主要有溶血反应、发热反应、过敏反应等，输血后患者可出现不明原因的发热、呼吸困难、心率加快乃至血压下降，甚至发生休克和DIC。糖皮质激素（地塞米松）肾上腺皮质类激素，作用广泛，可影响免疫反应多个环节，包括抑制巨噬细胞的吞噬提呈作用；使淋巴细胞，尤其是辅助性T细胞溶解减少等。有降低自身免疫性抗体水平，缓解过敏反应及对抗异体细胞的排斥反应和抗休克等作用。据此推测糖皮质激素可对抗或缓解输血反应，此实验拟以糖皮质激素对兔异型输血反应的影响加以证明。(2） 实验材料1、 实验动物 无菌健康家兔若干只，雌雄不限，体重2-2.5Kg.2、 实验器材与药品 BL-450生物机能实验系统（含压力换能器），兔手术台，气管插管，哺乳动物手术器械，动脉夹，玻璃分针，静脉插管和输液装置，注射器（含针头），肝素生理盐水，生理盐水，盐酸利多卡因溶液，地塞米松试剂。（3） 试验方法和操作步骤1、 随机选家兔一只，标记为甲兔，筛选十只与甲兔发生体外凝血的兔子。1） 以利多卡因溶液在甲兔股部浸润麻醉，与股静脉取血5ml，收集在加入肝素的烧杯。2） 在其他兔子动脉末梢取少量血，进行体外交叉配血实验，筛选出与甲兔血体外凝血者。2、 取甲兔，分离颈总动脉，取血30ml，收集在加入肝素的烧杯中。3、将10只家兔标记1-10，随机选出5只作为实验组，其余为对照组将其耳缘静脉注射20%乌拉坦5ml/kg麻醉，固定于兔手术台上，减去颈部被毛。 颈部手术 在甲状软骨下颈部正中切开皮肤6cm，分开皮下组织，依次分离：右颈外静脉：用止血钳钝性分离右颈外静脉，动脉夹夹闭近心端，结扎远心端，在颈外静脉侧壁剪一小切口，插入静脉插管，当插管到达动脉夹处，用手捏住血管，放开动脉夹，将插管继续插入约6cm左右结扎固定；气管：用止血钳在舌骨下肌群正中插入，将左右胸骨舌骨肌向两侧拉开，即可看到气管，分离一段气管并穿一根粗线，在气管表面做一倒T形切口，插入气管插管并结扎固定。气管插管的一侧接张力换能器，并BL-450生物机能实验系统相连，记录呼吸；左侧颈总动脉：将胸骨舌骨肌和胸锁乳突肌向外拉开，在气管左侧深处，可见到与其平行的左颈总动脉，用止血钳钝性分离左侧颈总动脉，结扎左侧颈总动脉的远心端，用动脉夹夹闭近心端，用眼科剪在靠远心端结扎出的动脉壁上剪一斜口，向近心端插入动脉插管动脉导管（管内充满0.3%肝素生理盐水），用线结扎固定，接压力换能器。与BL-450生物机能实验系统相连，记录血压。4、打开计算机，启动BL-450生物机能实验系统，分别记下正常的呼吸频率、心率、血压（收缩压与中心静脉压）。实验组输入0.5mg地塞米松生理盐水，对照组输入等量的生理盐水；5、将10只家兔同时输入3ml的甲兔血，受血过程中严密观察各家兔反应，观察上述各指标的变化，并作详细记录。 输血不良反应观察结果（XS）观察指标 观察组 对照组 输血前 输血后 t p 输血前 输血后 t p呼吸频率 心率(次/min)收缩压中心静脉压 （4） 预期实验结果 两组家兔的各项指标在输血前后结果的差别都具有统计学意义。在异型输血后家兔各指标变化中，加入地塞米松的实验组均比未加入地塞米松的对照组变化幅度小，故可推测地塞米松可以减轻或消除异型输血反应； 糖皮质激素（地塞米松）抑制了异型输血反应。（5） 统计方法 采用t检验进行统计学处理。（6） 可能遇到的困难、问题及解决措施:1、 手术操作技术不熟练，须平时加强训练。2、 兔子因个体差异而引起输血反应的差别，应结合同组的其他实验结果进行取舍。（7） 参考文献1、 GrzelakI,Ialeskam,Olesewkiwl,Transfusion,1998,38:11042、 AvallH,Hyllnerm,Grunwald,et,transfusion,1998,39:243、 期刊邓梅英；宁芬；陈宇；唐玉杰；输血不良反应178例分析；就医学；2009年10月