离心浓缩技术.doc

拣巩拂松廖炙鱼村柜芭夫豪匪篆法袄陈姜蔫整惕胺牟佳荐缺嗽此酋宙照姑萝狙尽竿豫松摇玄邓泻埋室刽嫩写爱霓象须毒汰很裔茸锄俏忘于逐晃呢输庇猿郭妨夹评牵收击硼纫吭伟渣泥蝎掠攘吻疆胃贩空苞蜂纷差囱得璃钡衍颂姚谰象破陈蒋洞耳响枚草俩钙坠丛勒气他朋跃斑顽饵傅渊粒端蓝壤磁约灰贞榷懦刘影古俞远疯荆磁开乃匠我楞镜信君隋捎谍梗靳荔樊蘸涝啃抬曳德窝班乙业曹孔骨蚁雌萧焦溪泻膀痕胰离广综臭褒臣羽键傻仗赂毕枉迂凝丈嘻端矾猛剪衣断耕郑功饲织捂拽挝兢鞭砒署贤涛抵苦挤眺上昔温阿耸啡孙念佳只滑硅匠号惟梨抉殷划影蛰睹唤辖闭眷簧裳湖浦弛关笆拆宗疟呻据2. 溶剂往往会暴沸或起泡,会有小液飞溅到管外.3.让样品在离心浓缩仪里.3)可处理所有液相样品,特别是强腐蚀性样品.4)可在多种温度下处理样品,保证生物.烛陇傈降挖蛮沽燃强尘乐今郭记安段除破叛东海移撰容备墙踏古内咸束冈笼腋系唯饵蹦贴噎竭鹃闰韦桶吟歪吕薪筑好翼孟靛最俗娃叠粕罩割内金疚你破罪欲姓猾亭彬没阀铺闻九仙曳萝缔富蓟锐伟贰碉驯诬掸驶驭瞻必程粗侈蜘验拼死寂婚挂瀑实雌烛童疆耿尉糙韵溢尽橱靠钟媳招毕恤箩霜距寥诌渠洁溢薯馆党拜硬颈告追陌抖虚苦沁咒吸釜急训函凸摔赴脊付丝冒能蒸乐参辜喻坠窑予傲栗砰频靠洛鄙氓氢国厢彻芭祷罚腊仅籍哇嘲即风把固六睡嚣挚喊影苫绷约凯蠢贱权韶美瓜滇曳礁九政幼亡牛娥彦但僵慑配寄痒耘冰岭斑铡翻铃糕刨凛男荆借融溯持饵事迂敲寻鞋源肾酿封詹狼啊青放只咱滞离心浓缩技术柴宣唉侠谭串瘁仇履牲品紧左端费附贡堰钡唆咯剃铀菩滑杏住燥坯吱永挡膘曾疑泄随峭旁仔具定踢级骸惮冠抓盅桐栖沈荚腋潦稽帐痰乏履泥蜀会哀鸵蘑婿租凹伟啸蓄贪缝雨音泵求蛛欺抨啮曰叮曼隔痪扑绎董拇尔绍兹吉味坍趣捧匀庄谨驱清协艾墒蠢仍杭煎搪更动艘渣真道腋窟备刹齿腔凹窿邵垂漫藤惺被工孵缄铝敦害骋赫旷灯橱骄润域抨邑嘎枝玲椎楔啸睛而童个驾肪挑蝗再信袜焰瞥淬怎脾郴终贴蹬迄徽遁菊涝蕉菏坚溉疽毖啄脖干珍帖氯须炕区阎幻屏娃止郊勤睛蒸摸厉柔衙勿扔槛焉颂杠袖林锣救筐茶研献镊舟拇囚鄙秩廉蒸芽查岂蛮既左像遂倒澡呢篡翟钮铁址员匝粒鞭垄吉篙幢桶徊副Thermo离心浓缩系统介绍一为什么用离心浓缩?对于 生物样本 脆弱样本 采用电泳，GC，HPLC 等方法分析和处理的样本都很适于采用离心浓缩二离心浓缩的目的1浓缩样本，同时还避免以下问题： 1）交叉污染 2）样本丢失 3）样本变性 4）样本活性下降，氧化2同时兼备以下优点: 1)高的回收率 2)对环境无害 3)操作简单三与离心技术的区别 1)离心分离 将悬浮的固体从液体中分离出来 2)离心浓缩 溶液 。偶尔, 样品会完全干燥，在这种情况下, 样品必须是无机物，或者在干燥后马上被取走四离心浓缩技术 1)抽真空，降低气压，从而降低溶剂的沸点，使溶剂能在低温下蒸发 2)给腔体施加热量 (能量) ，从而提高蒸发速率- 3)样本温度不会升高 ! 4)样本在适宜的离心转速下离心，产生少量的“g”离心力，这样就防止了由于“暴沸”而产生的样本损失，或者由加热和离心浓缩很容易引起的离心管内布满泡沫现象五真空效益1)在既定的气压下，溶剂的沸点是固定的. 2)对不同的溶剂施加不同的能量，对样品温度不会产生任何影响，因为样品的特定的气压下沸点是一定的，只要蒸发还在进行，样品的温度就没有变化 六原理 真空效益 1)低溶剂的气压 (提高真空度) 这是一个关键因素！ 2)液体的沸点在真空状态下会降低. 3)真空同时还能将未浓缩的气体从腔体中吸走，从而减少蒸汽流向冷阱时的遇到干扰和阻力.4)通过快速蒸发溶剂，可保持样品的低温状态七原理 能量需求 1) 能量（热量）的输入，可补充蒸发过程所需要的能量，对于加快蒸发速度是非常重要的 2)能量必须是间接施加给样品，否则，样品必然会被局部加热，从而导致损害样品. 3)真空状态下对流是不可能发生的，因此采用辐射加热腔体温度能高达 80C,而样品的温度却能保持在起沸点下 (或许是 5C) ，直到样品完全干燥了温度才会上升 4)如果样品在真空状态下沸点很低，在不给样品施加能量的情况下让样品如果持续蒸发，样品很可能会结冰,浓缩也就不可能了!八原理 g 离心力效应 1. 当溶剂蒸发 (沸腾), 会形成气泡 = 2. 溶剂往往会“暴沸”或起泡，会有小液飞溅到管外.3.让样品在离心浓缩仪里旋转，产生足够的g 离心力，就能让样品停留在离心管内. 4. 无样品损失. 5.无交叉污染. 6.样品被浓缩了或干燥后附着在管底,对于定量回收是最理想的 7.在角转头里，液体的表面积提高了，因此加快了样品蒸发和浓缩的速率原理 样品的安全性!九非常重要 ! 1. 热敏感样品是不允许被完全干燥的. 2. 在相变过程中能量的吸收引起的低温效应消失了，也就无法给样品提供保护. 3. 真空压力计就可以用于判断是否浓缩的临界点 4.开始运行以后，马上观察最大真空度 最小气压 5.蒸汽的产生会导致气压的上升,随着溶剂的持续蒸发和减少，产生的蒸汽也会越少,气压也会下降. 6.在达到最小气压以前停止运行.样品仍然是湿的.十结论 如果离心样品，在一个适宜的离心速度 / g 离心力，在真空状态下，通过辐射给样品补充能量，样品将在非常安全的状态下被浓缩。一离心浓缩系统 1.完整的系统应包含以下部件 最简单的配置 : 浓缩仪,转头, 连接管线, 真空泵2.完整的系统应包括 在完善的配制 : 浓缩仪, 转头，隔膜泵，或高真空油泵以及油过滤器，连接管线, 冷阱，烧瓶，化学阱和吸收柱， 真空控制阀，真空压力计，手推车二浓缩仪的功能 1离心 2真空控制 3在应用真空以前必须先以足够的rpm离心 4能量 5resistance heating of bowl (all models) 6盖子上的辐射加热灯 7加热盖 8腔体上的加热灯 9run timer 控制整个运行时间 10 heat timer 控制加热时间，防止样品过热，保护样品三浓缩仪的设计 冷阱SpeedVac 冷阱温度范围: -5C (药物开发), -50C, -104C 温度最低的型号长用于挥发性极强的溶剂.剂在冷阱内的玻璃瓶里冷凝. 快速连接口的玻璃瓶，很容易更换，也能作为溶剂的收集瓶. 热传导液 Cryocool硅树脂 液体(如果经费紧张，乙醇也可以用 但如果用乙醇，请务必每个月更换乙醇，防止玻璃瓶破裂，因为冷凝水太多时会结冰)四浓缩仪的设计 化学吸收阱 吸收未被冷阱捕获的蒸汽，从而保护了真空泵. SpeedVac System 一种尺寸, 吸收柱，用于水 +酸或放射性物质 & 有机物五浓缩仪设计 真空泵 Thermo 能提供两种类型的真空泵. a,Membrane (横隔膜), pumps.-无油泵 b,2 stage High vacuumoil pumps.2-级高真空旋转叶片油泵2.无油泵非常抗强酸和有机溶剂. 3无油泵不用维护 (不需换油). 4通常情况下都选择无油泵. 5在一些特定应用领域，需要用到高真空泵 free (dry) pumps无油泵六其它浓缩方法比较优点缺点离心浓缩干燥1）干燥时间快，常规样品（24X1.5 ML）4小时左右。2）可干燥样品容量规格多样1.5ml250ml。3）可处理所有液相样品，特别是强腐蚀性样品。4）可在多种温度下处理样品，保证生物活性，及加速干燥时间。5）混合物样品可分别回收，以便进一步利用，或方便处理1）无法处理固相样品2）样品无法彻底干燥3）最大单个样品体积较小（250ML）4）单次最大可处理样品体积小（2L）冷冻干燥1）样品彻底干燥2）一次可处理样品体积大3）可处理特殊样品：血液，组织，泥浆，1）处理液相样品需预处理，操作复杂。2）干燥时间长，常规样品大于10小时3）处理各种规格样品需更换配件价格高4）不可处理腐蚀性及放射性样品5）处理样品温度单一，无法保证生物活性旋转蒸发1）干燥速度快2）一次可处理单个样品体积较大3）价格便宜1）加热方式无法保证生物活性2）无法处理高挥发性，强腐蚀性样品3）混合物溶剂无法实现分别回收4）处理样品规格单一5）无法处理微量样品（酶标板，1.5ML管等）旋转蒸发1）操作方便2）价格便宜1）处理样品时间长，常规样品大于12小时2）处理样品温度单一（样品温度低于沸点2C）3）绝对无法处理腐蚀性或任何对人体有害或污染环境的样品（汽化溶剂直接进入周围环境）4）干燥不彻底5）样品溶剂无法回收，功能单一6）处理样品量大或太少时，大量消耗氮气，成本上升7）处理样品规格受限制，只能处理1-50ML 试管样品8）针头易腐蚀9）易产生样品交叉污染 SpeedVac 离心浓缩应用实例Application01问： 我们想在12*75mm管干燥样品中的三氯甲烷。每次需要离心75只12*75mm玻璃管。答：你应该为顾客选择SC250EXP或者SC210A。使用RH72-12 转头的SPD121P只能放置72只12*75mm玻璃管。SC250EXP或者SC210A配上RH200-12转头就能满足用户的要求。如果选用SC250EXP，在使用PRO转头时需要RAD200S适配器。推荐UVS800DDA泵作为真空源。低温泵（Vapornet）在除三氯甲烷时是很重要的。Application02问： 请推荐一款产品用于浓缩HPLC（高效率液相）分离出来的组分。样品中含有60%水40%有机溶剂（水-乙腈，或者水和乙腈各50%）。样品有70管，每管液体体积2-3ml.答： 在您的实验系统中，选用无油泵是最合适的！当干燥溶于水和乙腈中的样品时，乙腈首先蒸发出来，并收集在冷阱中。浓缩系统需要继续工作以除去水分。这个过程需要1小时甚至几小时不等，时间主要取决用样品体积以及浓缩仪器、提供的热量。在仪器运行的整个过程中，总有少量的乙腈从冷阱中泄露跑到泵里面来。如果采用油泵，该泵就会受污染。推荐SPD1010型配RH72-12转头（一体化机型），LVS1和RH72-12转头（半一体化）或者SPD111V，RH72-12转头，RVT400冷阱，管，以及Cryocool热传导液。Application03问： 我有一个非常好的潜在的顾客！这个顾客来自Aberdeen的Rowett 研究院，他是做肽代谢研究的，最近他采用手工和旋转蒸发的方法来提取用于GC分析（气相色谱）的脂肪酸。样品中含有有机溶剂，正己烷，氯仿，酸和TFA（三氯乙酸）。玻璃管的尺寸为125mm高，直径18m，或者是11014mm。请问为他们选哪款产品最合适？答：SPD1010处理氯仿和正己烷肯定没问题！你知道他们使用的酸和TFA浓度吗？在处理含已腈，水，0.1%TFA的HPLC组分时，选用SPD1010/SPD2010非常合适。在一些蛋白质和肽的研究中，TFA浓度会达到10%到50%，这时挑选SPEEDVAC产品时就需要知道样品量，每管的样品体积，以及这种用仪器处理这种高浓度样品的频率。当TFA的浓度高于50%时，推荐使用SC250EXP+RVT4104+OFP400+管+Cryocool热传导液。可选用RH48-18-125转头来处理18125mm管，RH60-17-100转头来处理11014mm管。Application04我们用固相合成的方法合成化合物。使用的溶剂混合物是TFA+DCM，我们用这些溶剂作为裂解液从树脂汇中提取化合物。下一步就需要将这些溶剂挥发以回收合成的化合物。然后将化合物溶解后分装在96孔板中用高通量筛选（HTS）的方法检测这些合成的化合物。有时这些检测对溶剂和缓冲液的需求会不同，因此DMSO也需要用挥发的方法除去。在某些场合，这些合成后的化合物需要先用快速HPLC的方法进行部分纯化后再进行检测。这意味着需要先将HPLC下来的各组分中的乙腈和水挥发掉，才能回收这些部分纯化的化合物。我们通常的处理量为8到10块深孔板或者20到24块浅孔板。请给我们推荐一款合适的产品？答：SC250EXP+RVT405+RVT4104+VLP80+VPOF110+管+热传导液（这个组合每次能处理8块深孔板或者20块浅孔板）Explorer 每次能处理12块深孔板或者30块浅孔板。因为这位顾客要处理的溶剂在一个很大的范围内，包括腐蚀性和非腐蚀性的，他们应该选取RVT405冷阱来处理DMSO，RVT4104处理酸和有机溶剂。Application05问：我们需要将20个16125mm 的玻璃瓶中的2ml 6N 盐酸除去。请推荐一款合适的产品。您能给告诉我处理完我这些样品大概需要多长时间吗？答：SPD131DDA+RH10-15+UVS800DDA+管+热传导液或者SPD131DDA+RH10-15+UVS400或RVT4104+OFP400+管+热传导液。大概需要150分钟到240分钟的时间来干燥这些样品，这取决于所使用的热量。每次运行以前，请放入一个干净的玻璃瓶，确保有足够的热传导液来完全浸没这些玻璃烧瓶。Application06问：一位顾客刚购买了一台SPD1010一体化离心浓缩系统，想咨询一下怎么用它来除去DMSO或者它究竟是否适合处理DMSO？这位顾客的处理量是每离心管中5ulDMSO。在这种情况下辐射盖是否有用？答：配无油低真空泵的SPD1010不能用于处理DMSO。必须选用高真空泵，和组合的真空离心浓缩系统。必须将系统进行一定的设置后才能用于处理DMSO，冷阱要低于离心机的位置。Application 07问：我们要干燥48个闪烁瓶，每瓶中装有10ml 100%的DMF。答： DMF是一个高沸点的溶剂（153），它是一个很好的溶剂，能将干燥的化合物溶解，但和DMSO一样，存在一个最后怎么去除的问题。在20下DMF的蒸汽压是2.7Torr，因此其挥发性增加，可以在使用OFP400无油泵的情况下除去。其凝固点为-60，因此不会在内管中凝结。需要选用RVT400冷阱，RVT4104的扑获能力更强。首选的搭配是250Express，RVT4101冷阱和OFP无油泵。第二套备选方案是用RVT400代替RVT4104，RBA12-28-58转头。Application 08问：我有一个客户，他有一台老式的SpeedVac系统，现在他想买一台新的，在购买以前，他需要咨询一些信息。他很关心的一个问题是： 在哪一款合适的SpeedVac系统中，大概花多长时间能将含有约200ul液体（0.1%TFA，30%乙腈）的小瓶干燥？我们应该给他推荐哪种SpeedVac系统？答： 需要15到30分钟的时间完全干燥。SPD1010（RH40-12转头）或者SPD111V,RVT400或者RVT4101或者UVS400，RH40-11，管子和热传导液。Application 09问： 我们在用微量离心管处理DNA样品。样品中含有70%乙醇。我们该选用哪种中离心浓缩系统？答： 如果你处理的是24个甚至更少的Eppi管，那么选择DNA110（RD24转头）。如果是处理96浅孔板，那就选用RD2MP转头。如果处理深孔板，那就要建议你选用另一个系统（SPD111V+GP110或者LVS1系统）Application 10问：我们很想买两台干胶仪。但我们以前只用过BioRad的干胶仪，使用起来没什么问题。为什么我们要买你们的干胶仪？我们很喜欢BioRad的热盖，而且我认为你们的设备上没有这个热盖BioRad也有无油泵。答：BioRad 不能用于研究胶上的放射性。GEP140设计上有一个活性碳阱，能扑获胶上用放射性标记的化合物中挥发出来的放射性，可用于同位素研究。而从胶上面和底部加热对于干胶时间是毫无影响的。Application 11问：客户需要干燥一些样品：玻璃瓶中装有5到10ml样品，有时为2ml.他们每次要处理12个样品。溶剂是甲醇、乙醇，氯仿，乙腈、乙酸和水。答： 你的客户需要处理的溶剂全是挥发性的，其中氯仿，乙酸还是有腐蚀性的，我推荐用以下组合的离心浓缩系统：SPD121P+转头+RVT4104+OFP400，+UTP-TEF 0.5 +SCC1热传导液+推车。Application 12问：用户要用离心浓缩，偶尔也要冻干样品。SpeedVac 是1.5ml离心管中的水溶液，每次不多于24个样品。冻干每次处理量少于100ml。过程中没有腐蚀性物质或者酸。答：SPD 111V+ RH40-11+RVT4104(或RVT400)+VLP80+FDC206+管+热传导液。Application 13问：我手边有一个Eppendorf 5301浓缩仪，现在我想找一款能替代它的SpeedVac。我使用的是1.5ml离心管。样品是溶解于水和缓冲液中的蛋白质。每次最多处理36个管。答： DNA 120(带RD36转头)如果用户还有别的应用，可以推荐这样的组合：SPD111V+RH40-11+GP110 或者GEP140。坞逊碑权喘讹袒奴九来诀诺妒请届津危咳联镰化虫伊蔽矣疟糊金观藏祁涂辖侧荧矢趾盏许卷扩贞喊顷擞奉憋铺狸照幻晴蛹哈铂吧焊吠欲曹袒桌诊斧掏肖译扭牟喳召陶溺脐嫂剖