蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法

蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法20% （W/V） Glucose配制量100ml配制方法:1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 高温高压灭菌后，4保存。0.5 M EDTA （pH8.0）配制量1 L配制方法:1. 称取186.1 g Na2EDTA2H2O，置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH）。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。1 M DTT配制量50ml配制方法:1. 称取7.71g DTT，加入到100ml烧杯中。2. 加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况0.22um滤膜过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20保存。30%丙烯酰胺（29：1）配制量1 L配制方法:1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。Acrylamide 290gBisacrylamide 10g2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至1 L，用0.45um滤膜滤去杂质。4. 于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。5Tris-甘氨酸电泳缓冲液组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,0.5%（W/V）SDS配制量 1 L配制方法：1称量下列试剂，置于1 L烧杯中。2取下列溶液，加入烧杯中。Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5g3. 加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。4SDS-蛋白上样缓冲液组份浓度Tris-HCl（pH6.8） 200mMSDS 8%溴酚蓝 0.4%甘油 40%巯基乙醇 4%配制量 10ml配制方法：1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。Tris-HCl（pH6.8） 2mlSDS 0.8溴酚蓝 40mg甘油 4ml2. 加去离子水溶解后定容至10 ml。3. 小份（500 ml/份）分装后，于室温保存。4. 使用前将20ul的-巯基乙醇加到每小份中。注意：加入-巯基乙醇的上样缓冲液可在室温下保存一个月左右。此缓冲液可以用DTT替代-巯基乙醇。10ml上样缓冲液中加入0.617mgDTT,溶解后分分装，可-20保存一年。使用时30ul样品加入10ul Loading Buffer 混匀，沸水浴5-10分钟，冷却却可上样。电转缓冲液（western转膜用）组份浓度 0.25 M Tris, 2.5 M Glycine, 0.37%SDS配制量 1L配制方法：1. 称量下列试剂，置于15ml离心管中。Tris 3.0gGlycine 14.4g10%SDS 3.7ml2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至800 ml后，加入200 ml的甲醇。4. 室温保存。注意：对于本公司所产10电转缓冲液（D1060），使用时，取100ml10电转缓冲液，加入700ml去离子水,加入200ml甲醇，混匀即可。TBST缓冲液（western洗膜用）组份浓度 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl0.05%（V/V）Tween 20配制量 1L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1L离心管中。NaCl 8.8g1 M Tris-HCl （pH7.6） 20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加入0.5-1.0ml Tween 20后充分混匀。4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，4保存。常规SDS聚丙烯酰胺凝胶配制方法试剂 分离胶8% 分离胶10% 分离胶12% 浓缩胶4%配制量 10ml 10ml 10ml 5ml30%丙烯酰胺 2.67ml 3.33ml 4.0ml 0.67ml1.5mol/LTris（pH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml -1.0mol/LTris（pH6.8） - - - 0.625ml10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ulddH2O 4.6ml 4.0ml 3.3ml 3.6mlTEMED 10ul 10ul 10ul 5ul10%过硫酸氨 100ul 100ul 100ul 50ul注意：TEMED和10%过硫酸氨最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸氨在4有效期为一周，TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1ml ddH2O封上层，胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶时，先倾去水层，再用吸纸吸干。灌浓缩胶后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中（让电泳液漫过加样孔），轻轻的拨出梳子，可防加样孔变型。考马斯亮蓝染色液组份浓度 0.1%考马斯亮R-250, 25%异丙醇,10%冰醋酸配制量 1 L配制方法：1. 称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。2. 量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。3. 加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。4. 加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。5. 用滤