第 节 糖化血红蛋白测定.docx

第 节 糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本： A/0页码： 第1 页 共 5页1检测原理本法利用TTAB作为溶血试剂，用来消除白细胞物质的干扰（TTAB不溶解白细胞）。血液样品不需要除去不稳定HbA1c的预处理。全血溶血液中的HbA1c浓度，用浊度抑制免疫学方法测定。先加入抗体缓冲液，样本中的糖化血红蛋白（HbA1c）和抗HbA1c抗体反应形成可溶性的抗原-抗体复合物，因为在HbA1c分子上只有一个特异性的HbA1c结合位点，不能够形成凝集反应。然后，加入多聚半抗原缓冲液，多聚半抗原和反应液中过剩的抗Hb1c抗体结合，生成不溶性的抗体-多聚半抗原复合物，可用比浊法进行测定。同时在另一个通道上测定Hb浓度。在改通道中，溶血液中的血红蛋白转变成特征性吸收光谱的血红蛋白衍生物，用重铬酸盐作标准参照物，进行比色法测定Hb浓度。根据Hb含量及HbA1c含量，计算出HbA1c%。（TTAB：十四烷基三甲基溴化铵）2标本采集及影响因素2.1采血方法空腹抗凝（EDTA-K2）静脉血23ml。2.2标本保存抗凝全血于48可保存7d。2.3注意事项标本应尽量避免溶血。3试剂和设备3.1试剂采用罗氏原装双试剂3.1.1试剂组成：R1试剂：抗体试剂 MES缓冲液：0.025mol/L：TRIS缓冲液：0.015mol/L PH6.2HbA1c抗体（绵羊血清）：0.5mg/mL；稳定剂；防腐剂（液体）R2试剂：多半抗原试剂 MES缓冲液：0.025mol/L；TRIS缓冲液：0.015mol/L，PH6.2 第 一 节 糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号： A/0页码： 第 2 页 共 5 页HbA1c多半抗原：8g/mL；稳定剂；防腐剂（液体）MES=2-吗啉乙烷磺酸TRIS=三（羟甲基）-基氨基3.1.2试剂准备：直接使用。3.1.3试剂保存：28冷藏保存。3.2控制品Roche cobas c 501原装配套控制品。3.3校准品Roche cobas c 501 原装配套校准品。3.4仪器Roche cobas c 501全自动生化分析仪。4操作程序4.1检测过程流程表1-1-1 HbA1c在Roche cobas c 501分析仪上的分析参数测定模式2点终点法反应时间/测定点10/3470波长A/B660/340nm反应方向上升单位mmol/L （g/dL）试剂移液稀释液（H2O）R1120LR224L样本容量样 本样 本 稀 释样 本稀 释 液（NaCl）正 常5L减 少5L增 加5L签收标本离心上机检测审核报告签发报告标本保存。4.2样本签收第 节 糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号： A/0页码： 第 3 页 共 5 页严格按照标本签收程序签收标本。4.3样本处理标本以3500r/min，离心10分钟，分离血清上机检测，若标本不能及时检测，分离血清于28保存。4.4样本检测4.4.1手工编排测试项目：适用于无双向条形码标本或标本复查。将标本按编号次序装载于仪器专用架上，放置于c150模块内。在Roche cobas的操作窗选择选择项目常规工作菜单保 存选择标本类型、输入序列号或样本号常规标本单个标本选择项目常 规重 复输入最后的样本号批量标本急诊标本 急 诊保 存选择项目输入架号位放置标本到置及标本号急诊位4.4.2运行：确认样本已经装载在样本架上，架号、样本号、项目设置无误的情况下，进入如下操作：开 始开 始在相应的标本类型里 输入起始号，回车4.5检验后样本保存样本检验完后将样本由样本架上卸下，放置于试管架上，密封后保存于样本保存冰箱（28）保存期为5d。5校准程序5.1校准品准备和储存每瓶准确加3ml蒸馏水复溶，轻轻旋转摇匀，室温放置30min待充分溶解后分装，-20可保存20d，28可稳定24h。第 一 节 糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号： A/0页码： 第 4 页 共 5 页5.2校准条件在更换试剂批号、更换仪器主要配件、仪器进行维修、大保养、室内质控失控时均需校准，无特殊情况校准周期为7d。5.3校准程序保 存状 态校 准选定定标液 及定标方法开 始开 始加载定标液定标结果查看状 态校 准 红色消失为成功 有红色且出现Failed为失败6质量控制程序6.1质控品准备和储存平时保存在-20低温冰箱，启用时取出，室温放置30min待充分融化后使用，28稳定72h。6.2控制品水平和分析批长度每24小时至少进行1批，每批至少2个水平。保 存选 择6.3质控操作程序状 态质 控选中质控项目开 始开 始加载质控品质控结果查看Levy-Jennings图图表 结果误差判断实时质控运行状态质 控选择项目结果累积累积 7性能参数线性范围：326g/L ，不准确度允许范围X15.0% ，不精密度CV5.0%。第 节 糖化血红蛋白测定文件编号：SMXYY-JYK-3-SH-版本号： A/0页码： 第5 页 共 5 页7性能参数线性范围：326g/L ，不准确度允许范围X15.0% ，不精密度CV5.0%。对于超出线性范围的结果，用生理盐水对标本进行稀释再检测，结果乘以稀释倍数。8生物参考区间 成人：4.8 5.9 %9临床意义9.1此试验用于评定糖尿病的控制程度。当糖尿病控制不佳时，糖化血红蛋白浓度高至正常2倍以上。因为糖化血红蛋白是血红蛋白生成后与糖类经非酶促结合而成的。它的合成过程是缓慢且相对不可逆的，持续存在于红细胞120天生命期中，其合成速率与红细胞所处环境中的糖浓度成正比。因此，糖化血红蛋白所占比率能反映测定前12月内平均血糖水平。本实验已成为反映糖尿病较长时间血糖控制水平的良好指标。如果HbA1c的浓度高于10%，胰岛素的剂量就需要调整。在监护中的糖尿病患者，其中Hb1c的浓度改变2%,就具有明显的临床意义。9.2此试验不能用于诊断糖尿病或判断天-天间的葡萄糖控制，亦不能用于取代每天家庭查尿或血液葡萄糖。9.3HbA1c水平低于确定的参考范围，可能表明最近有低血糖发作、Hb变异体存在或红细胞寿命短。9.4任何原因使红细胞生存期缩短，将减少红细胞暴露到葡萄糖中的时间，随HbA1c%就会降低，即使这一时间平均血液葡萄糖水平可能是升高的。红细胞寿命缩短的原因，可能是溶血性贫血或其他溶血性疾病、链状细胞特征、妊娠、最近显著的血液丧失或慢性血液丧失等，当解释这些患者的HbA1c结果时应当