有关McCoy细胞1.doc

动物衣原体病及其防制王文泉北京市兽医生物药品厂(100101)动物衣原体病(Chlamydiosis)是由各类衣原体(Chlamydia)感染哺乳动物、禽类、节肢昆虫所发生的一类十分重要的自然疫源性传染病。该病属人畜共患，呈地方流行，常造成很大危害及经济损失。目前已发现18个目、29个科的190余种鸟类(包括70余种观赏鸟和家禽)以及绵羊、山羊、牦牛、马属动物、猪、犬、猫、猴、兔、豚鼠及小鼠等许多哺乳动物、野生动物受到过感染。衣原体可分为沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)和鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsittaci)。近年来的研究发现，原列入鹦鹉热衣原体的独特的TWAR株(台湾株)，在原体形态结构、核酸组成、天然宿主及致病性等方面与鹦鹉热衣原体有所不同，因此，将其从鹦鹉热衣原体中独立出来，定名为肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)。动物衣原体病的研究始于19世纪末，Marange(1892)在阿根廷首都布宜诺斯艾利斯发现，与鹦鹉鸟接触的人会突然发病，从而最终肯定了鹦鹉鸟在人类感染和罹病中的重要作用，并提出了鹦鹉热(Psittacosis)这一新病名。l病原学(见表1)表1三种衣原体的主要区别种名原体包涵体包涵体吐酸盐的形态形态中糖原生物合成沙眼衣原体圆形卵圆形,有空泡+鹦鹉热衣原体圆形多形态,致密-肺炎衣原体梨形卵圆形,致密-衣原体只能在细胞内繁殖，繁殖过程会产生两种大小不同的颗粒，较小的称为原体(Elementarybody,EB)，直径约为0.2一0.5m，呈球形或卵圆形，是具有感染性的形态。较大的称为网状体(Reticularbody,RB)，直径约为0.6一1.5m，呈球形或不规则形，是具有繁殖性的形态。在衣原体的发育周期中，还有一种过渡形态，称为中间体(Intermediatebody,IB)。2发病情况衣原体可以引起哺乳动物的流产、肺炎、肠炎、脑脊髓炎、多浆膜炎、多关节炎,角膜结膜炎、尿道炎及鸡的输卵管炎等。根据对北京市郊区畜禽流行病学调查发现:猪场、鸡场(有的是种鸡场)、兔场都查出了衣原体病原，引起了种猪的流产和肺炎(鹦鹉热衣原体)，鸡的输卵管炎(沙眼衣原体)，造成了很大的经济损失。在观赏鸽和信鸽中也查到了鹦鹉热衣原体的存在，甚至在进口的种山羊中也出了鹦鹉热衣原体。由于衣原体病是人畜共患病，可以引起人类(尤其是青少年)的肺炎。妇女感染后可引起输卵管炎和阴道炎，能造成宫外孕和不孕，男性附辜炎有2/3是由衣原体感染引起，也导致不孕。特别是由沙眼衣原体引起的人类的沙眼，据估计已使全球5亿患沙眼病。某些人群的感染机会比较大，如饲养宠物者、宠物店售货员、养禽场工人、屠宰厂工人等与家畜家禽密切接触者。根据Strauss等(1964)统计分析了捷克斯洛伐克罹患鹦鹉热的病人，在1072个病例中，有1014例(94.59%)是养禽场职工，其余病例也有接触史，患者的职业及工作场所见表2。表2职业工作场所与患病的关系工作场所职业患病人数大型养禽场雇员853大型养禽场兽医3大型养禽场流行病学家1大型养禽场参观人员8小型养禽场工人178小型养禽场参观人员2禽品商店售货员4厨房厨师2实验室工人6不明其他职业32衣原体传染性强，能够耐受多种抗菌药物，诊断困难，病后恢复缓慢，免疫水平低，能够长期带菌，甚至反复发作，对人畜构成越来越严重的威胁，引起了许多国家的重视和深入研究，将其列为法定传染病。3衣原体病的诊断3.1光学显微镜检查根据不同的发病对象及病期采集不同的病料涂片，用姬姆萨氏染色(EB被染成红色，RB被染成蓝紫色，胞浆内包涵体被染成紫红色)、斯坦帕(Stamp)氏染色(背景呈淡绿色，衣原体被染成鲜红色)、碘染色(Rice)法(在低倍显微镜下观察，沙眼衣原体的包涵体因含有糖原呈棕褐色,鹦鹉热衣原体的包涵体不含糖原不着色)。3.2电子显微镜观察将病料处理后在电子显微镜下一般可见到两大颗粒:一类为EB，呈圆形或卵圆形颗粒，中央核心部分电子密度大;另一类为RB，颗粒的电子密度低，形状不规则。除上述两大类颗粒之外，有时尚可见到介于二者之间的中间体(IB)。3.2免疫荧光试验又可以分为直接法和间接法。直接法是将待检标本(涂片、切片)等浸入冷冰酮中固定10分钟，取出晾干后，置于无离子水中漂洗10分钟，干后滴加48UFITC(异硫氰酸荧光素)标记的已知衣原体特异性IgG。用0.005%伊文思蓝稀释荧光抗体作对比染色，置37湿盒染色3060分钟，漂洗后用缓冲甘油封固检查，靠近细胞核一端出现发亮的黄绿色光点或团块，亮度在+以上的可判为阳性；间接法是将标本滴加已知衣原体感染的不同血清型的人阳性或家兔免疫血清，置37湿盒染色4560分钟，漂洗后吹干，加荧光素结合物，前素加4-8UFITC标记的羊抗人IgG，后者加同单位荧光素标记的羊抗兔IgG，同时也加对比染色液，用直接法冲洗、封固、镜检。3.3补体结合试验(CF)CF试验是一种特异性强、敏感度高的经典血清学方法，被广泛用于衣原体感染的诊断和衣原体抗原研究上。3.4间接血凝试验(lHA)IHA试验是将抗原或抗体吸附(包被)于红细胞表面，使之成为致敏的载体，然后与其相应的抗体或抗原作用，在有适宜的电解质存在的环境中，致敏红细胞发生被动的特异性凝集，又称为被动血凝试验。IHA又分为正向和反向两种。用已知抗原致敏红细胞，检测未知特异性抗体称为正向IHA;以已知抗体包被红细胞，检测未知抗原者称为反向IHA。另外，还有琼脂免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、血凝抑制试验等。综合防制关于衣原体病的防制除采取兽医综合措施，如坚持卫生消毒、全进全出、自繁自养不从疫区引种、隔离制度、消灭场内的鼠类等啮齿类动物外，还有疫苗和药物治疗等措施。应用人工免疫方法来控制动物衣原体的发生与蔓延，国内外已进行了大量的研究，各国研制衣原体疫苗的技术及抗原材料大同小异，所生产的疫苗有:(1)胎膜疫苗。以衣原体性流产的胎膜制成悬液，甲醛灭活后，用明矾沉淀制成疫苗。(2)鸡胚卵黄囊膜粗制疫苗鸡胚卵黄囊纯化疫苗。这是目前常用的方法。将感染鸡胚卵黄囊膜以pH7.27.6PBS制成10%20%悬液，加甲醛0.1%0.2%乳化。或进一步纯化制成疫苗。(3)减毒活疫苗。Mitscherlich(1965)用羊胎膜分离株在鸡胚上移植64代后制成减毒疫苗。(4)细胞培养疫苗。原苏联的专家用鸡成纤维细胞培养，Wills等(1987)用经鸡胚致弱的猫肺炎菌株为种毒，以McCoy细胞(鸡成纤维细胞)培养制成冻干疫苗。衣原体病常用的治疗药物有盐酸四环素，静脉、肌内注射剂量(日量):每公斤体重，牛、马510mg，猪、羊715mg，犬1020mg，分作12次注射;片粉剂，内服(日量)，每公斤体重，猪2050mg，犬30100mg，分23次服用，家禽拌料浓度0.04%0.06%，连用57天为一疗程。氯霉素，每公斤体重，牛、马、猪、羊510mg，犬、猫20mg。每日二次。家禽拌料浓度0.1%0.2%。连用57天为一疗程。螺旋霉素、卡巴霉素对衣原体也有较好的疗效。中药制剂，川芎5克、薏仁米100克、柴胡5克、黄连5克、当归10克、贝母7克、双花10克、麻黄3克、大青叶50克、甘草5克，大家畜50100克，家禽2