PTEN、p27kip1、VEGF在子宫内膜癌中的表达及意义.doc

PTEN、p27kip1、VEGF在子宫内膜癌中的表达及意义【摘要】目的探讨抑癌基因PTEN、p27kip1、VEGF在子宫内膜癌中的表达、意义及三者之间的相关性。方法采用免疫组化SP法检测32例子宫内膜腺癌，13例子宫内膜不典型增生和10例正常子宫内膜石蜡切片中PTEN、p27kip1及VEGF的表达。结果子宫内膜腺癌组织与子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜组织比较，PTEN、p27kip1阳性表达率明显降低，差异有非常显著性（2=11.09，2=9.466，P0.01），VEGF表达率明显增加，差异有非常显著性（2=21.253，P0.01）。PTEN表达与肿瘤分化、肌层浸润程度、淋巴结转移有关（P0.05）。在子宫内膜腺癌组织中，PTEN与p27kip1表达呈正相关（r=0.744，P0.01），与VEGF表达呈负相关（r=0.738，P0.01）。结论PTEN、p27kip1的失表达与VEGF的过表达在子宫内膜腺癌的发生发展中起着一定的作用，PTEN与p27kip1、VEGF的异常表达密切相关，三者的联合检测有助于子宫内膜癌的早期诊断。 【关键词】 抑癌基因PTEN p27kip1基因 VEGF 子宫内膜癌 免疫组织化学0 引言癌基因的激活，抑癌基因的失活及细胞周期调控的失常与肿瘤的发生密切相关，PTEN又名MMACl、TEP1，是新近发现的肿瘤抑制基因，该基因的高度表达使肿瘤细胞生长受到抑制1，且PTEN是子宫内膜癌中突变率最高的基因2；p27kip1主要通过对CDKcyclinD、CDK2cyclinE的抑制阻滞细胞于G1期3。肿瘤的生长及转移有赖于血管的形成，目前发现血管内皮生长因子（VEGF）是诱导肿瘤血管生成作用较强和特异的调节因子4。因此本研究采用免疫组化对子宫内膜癌组织中PTEN、p27kip1蛋白及VEGF表达进行检测，旨在探讨PTEN、p27kip1、VEGF在子宫内膜癌中的表达及临床意义。1 资料与方法1.1 临床资料 选择兰州医学院第二附属医院19962002年手术切除的子宫内膜腺癌标本32份，选择同期子宫内膜不典型增生标本13份及正常子宫内膜标本10份，子宫内膜癌的细胞分级及分期均按FIGQ（1988）标准，G19例，G210例，G313例，I期11例，期12例，期9例，术前均未行放化疗，患者年龄3971岁，平均55岁，所有HE切片均经病理专家复检确认。1.2 试剂 鼠抗人PTEN、p27kip1、VEGF单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒，DAB显色剂等均为福州迈新生物技术公司产品。1.3 方法 石蜡包埋组织连续切片厚5μm，采用免疫组化SP染色，染色步骤严格按试剂盒要求进行。1.4 结果判定 （1）PTEN判断标准：细胞浆内有橘黄色或棕黄色颗粒者为阳性细胞，计算10个高倍镜（×400）视野下阳性细胞百分数，百分数≤20%为阴性，20%为阳性；（2）p27kip1定位于细胞核，阳性物质呈棕黄色或棕褐色颗粒状，在高倍镜下随机选取10个视野，计数1000个肿瘤细胞，对阳性细胞所占的百分比（0%=0，81%=4）及染色强度（无色=0，淡黄色=1，棕黄色=2，棕褐色=3）进行评分，以两者乘积3为阳性标准，（3）VEGF染色以细胞质和（或）胞膜中出现棕黄色颗粒为标准，以阳性细胞数目的多少进行分级0%5%（-），5%10%（），10%30%（+），30%70%（+），大于70%（+）5，见图14。1.5 统计学处理 采用χ2检验及计数资料的相关分析，所有数据以SPSS 8.0统计软件包进行统计学处理。2 结果2.1 PTEN的表达 10例正常子宫内膜组织中，9例阳性表达，6例（+），2例（+），1例（+），阳性表达率为90%，13例子宫内膜不典型增生组中，6例阳性表达，3例（+），2例（+），1例（+），阳性表达率为46.15%，32例子宫内膜腺癌组织中，9例阳性表达，5例（+），3例（+），1例（+），阳性表达率为28.13%。从正常子宫内膜→子宫内膜不典型增生→子宫内膜腺癌，PTEN阳性表达率逐渐下降，差异有显著性意义（χ2=11.904，P0.01），子宫内膜不典型增生与正常子宫内膜相比较，差异有显著性意义（χ2=4.790，P0.05）,见表1。表1PTEN、p27kip1、VEGF表达与子宫内膜组织学类型关系（略）a表示子宫内膜不典型增生与正常子宫内膜比较，b表示子宫内膜腺癌与子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜组织比较。2.2 PTEN表达与子宫内膜腺癌临床病理特征关系 PTEN阳性表达率在高分化、中分化、低分化腺癌组织中分别为55.55%、30%、7.69%，差异有显著性（χ2=6.052，P0.05），PTEN阳性表达与肌层浸润程度有关（χ2=5.772，P0.05），与淋巴结转移有关（χ2=5.225，P0.05）,见表2。2.3 p27kip1的表达 在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌组织中p27kip1蛋白阳性表达率分别为90%，46.15%，34.38%，即从正常子宫内膜→子宫内膜不典型增生→子宫内膜腺癌，p27kip1阳性表达率逐渐下降，差异有非常显著性（χ2=9.466，P0.01），子宫内膜不典型增生与正常子宫内膜组织比较，差异有显著性（χ2=4.791，P0.05）, 见表1。2.4 VEGF的表达 VEGF在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜腺癌组织中阳性表达率分别为10%，46.15%，87.5%，即从正常子宫内膜→子宫内膜不典型增生→子宫内膜腺癌，VEGF阳性表达率逐渐增加，差异有非常显著性（χ2=21.253，P0.01）,见表1。表2 PTEN蛋白表达与临床病理特征的关系（略）2.5 PTEN和p27kip1表达的关系 在32例子宫内膜腺癌组织中，PTEN和p27kip1表达水平之间存在正相关关系，见表3。表3 PTEN与p27kip1蛋白表达的关系（略）r=0.744，P0.012.6 PTEN和VEGF表达的关系 在32例子宫内膜腺癌组织中，PTEN和VEGF表达水平之间存在负相关，见表4。表4 PTEN与VEGF表达的关系（略）r=0.738，P0.013 讨论基因PTEN是1997年克隆的第一个编码具有磷酸酶活性产物的肿瘤抑制基因， 在许多肿瘤中， 这个基因区域有杂合性丢失， 在子宫内膜癌中， PTEN基因是突变率最高的基因， 它可使PIP3（3， 4， 5三磷酸磷脂酰肌醇）去磷酸化， 抑制PIP3激活的丝苏氨酸激酶PKB/AKT活性， 影响其下游通路靶包括G1期CDK抑制基因p27kip1、 BAD等的磷酸化水平从而介导G1期停顿， 影响基因的表达， 对细胞生长具有负性调节作用6。 此外PTEN还有使局部粘附激酶（FAK）及Schc脱磷酸， 影响细胞迁移、 浸润、 整合素介导的细胞铺展及局部粘附的形成7,8。 Jiang等10研究发现PTEN可通过抑制AKT或PI3K活性抑制血管的生成。本研究发现PTEN、 p27kip1在正常子宫内膜及子宫内膜不典型增生组织中的阳性表达率分别为90%, 46.15%, 差异有显著性（χ2=4.791，P0.05）， 提示PTEN、p27kip1蛋白表达缺失是子宫内膜腺癌癌前病变的早期分子事件。两者表达率相同可能是与病例少有关。子宫内膜腺癌与不典型增生及正常内膜组织比较PTEN、p27kip1阳性表达率均逐渐下降， 说明两者在子宫内膜腺癌的发展中起着一定的作用， PTEN与子宫内膜腺癌病理参数关系表明肿瘤恶性程度越高， 临床预后越差。PTEN与p27kip1表达关系证明PTEN通过PIP3途径使细胞周期停止于G1S期的机制失调进而促进肿瘤的发展10， 而VEGF在三种组织中的表达水平及其与PTEN关系表明PTEN通过AKT或PI3K活性抑制血管的生成， 从而抑制肿瘤的生长及转移。Mutter等11用免疫组化检测132例子宫内膜组织包括正常增生期， 复合型增长， PTEN蛋白失表达率分别为43%， 56%， 63%， 提示PTEN可能作为检测子宫内膜癌前病变的一种方法。总之， PTEN基因突变导致的PTEN功能丧失是子宫内膜癌的早期分子事件， 由于PTEN功能丧失导致p27kip1功能下降及VEGF表达的上升促进子宫内膜癌的发生发展， 因此用免疫组化联合检测PTEN、p27kip1蛋白及VEGF表达有助于子宫内膜癌及其癌前病变的早期诊断。(本文图见封2)（略）【参考文献】 1 Steck PA, Pershouse MA, Jasser SA， et al. Indentification of a candidafe tumor suppressor gene, MMACl, at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancersJ.Nat Genet，1997, 15(4): 356373.2 Maehame T, Dixon JE. The tumor suppressor, PTEN/MMACl, dephosphorytates the lipid second messager phosphatidylionosito (3,4,5,trisphosphate)J.Biol chem，1998, 273(22):1337513378.3 Bullrich F, Maclachlan TK, Nietal S， et al. Chromosomal mapping of members of the cdc2 family of protein kinases, cdk3, cdk6, PISSRE, and DITALRE, and PITALRE，and a cdk inhibitor, p27kip1, to regions involed in human cancerJ. Cancer Res， 1995, 55(6): 1199.4 Maeda K, chung YS, Ogawa Y，et al. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression ingastric carcinomaJ. Cancer, 1996, 77(5): 858863.5 许文涛，杨文涛. 免疫组织化学反应结果的判断标准J.中国癌症杂志，1996,6(4): 229.6 Tamura M, Gu J, Matsumoto K， et al. Inhibition of cell migration spreading, and focal adhesions by tumor suppressor PTENJ. Science，1998，280(5369):16141617.7Gu J,Tamura M，Yamada KM， et al. Tumor suppressor PTENinhibits integrinand growth factormediated mitogenactivated protein (MAP) kinase signaling pathwaysJ.Cell Biol，1998, 143(5): 13751383.8 Hirai Y, Tanaka N, Furuta R， et al. Somatic mutations of the PTEN/MMACl gene associated with frequent chromosomal loss detected using comparative genomic hybridization in endometrial cancerJ. GynecolOncol，2001,83(1):8188.9 Jiang BH, Zheny JZ, Hoki M，et al, Phosphatidylionositol 3kinase singnaling mediates angiogenesis and expression of vascular endothelial growth factor in endothelial cellsJ. Proc Natl Acad Sci USA， 2000, 97(4): 17491753.10Mizumatsu S, Tamiya T, Ono Y，et al. Expression of cell cycle regulator p27kip1 is correlated with survival of patients w