葡萄糖耐量的测定.ppt

葡萄糖耐量的测定,组员：吴雪 张沛露 李建勋 范鎏 万倩,葡萄糖的性质,物理性质：1、旋光性 D-葡萄糖在20摄氏度光时的比旋光度数值为+52.2. 2、溶解度 在20摄氏度时单一的葡萄糖溶液最高浓度为50%。3、甜度 a-D-葡萄糖的比甜度为0.7. 4、黏度 葡萄糖的黏度随着温度的升高而增大。,化学性质：（1）分子中的醛基，有还原性，能与银氨溶液反应：CH2OH-（CHOH）4-CHO+2Ag（NH3)2+2OH-=CH2OH-（CHOH）4-COONH4+2Ag+H2O+3NH3，被氧化成葡萄糖酸 三维模型（2）醛基还能被还原为己六醇 （3）分子中有多个羟基，能与酸发生酯化反应 （4）葡萄糖在生物体内发生氧化反应，放出热量。,测定血清葡萄糖的方法,血糖是指血中的葡萄糖，血糖是临床上的习惯简称。血糖测定对糖尿病的诊断，疗效观察等均具有重要的意义。其测定方法主要有邻甲苯胺法、葡萄糖氧化酶法、已糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法、酶法等。1、酶比色法 由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。 根据Lambert-Beer定律：A=bc，（A为吸光度，为摩尔吸光系数，为液池厚度，c为溶液浓度）可以对溶液进行定量分析,2、酶电极法葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下催化D葡萄糖 (葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D葡萄糖酸内酯和过氧化氢。过氧化氢与过氧化氢型电极接触产生电流。该电流值与D葡萄糖的浓度呈线性比例，在酶电极葡萄糖分析仪上直接显示葡萄糖含量。 3、GOD-POD法,1、掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理2、掌握血糖变化的临床生理意义3、掌握口服葡萄糖耐量实验的原理、适用人群及临床意义,实验目的,实验原理,葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。,试剂与器材,5ml移液管、50ul或100ul微量可调式移液器、721E型分光光度计、1cm比色皿、37恒温水浴锅0.1mol/L磷酸盐缓冲液（PH=7.0）、酶试剂、酚溶液、酶-酚混合试剂、12mmol/L苯甲酸钠溶液、葡萄糖标准储存液(100mmol/L)、葡萄糖标准工作液（5mmol/L）,实验步骤,一、取试管三只，按表操作,混匀，置于37水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。,二、口服葡萄糖耐量试验方法及正常值,1、受试者试验前1天晚餐后即不再进食（即空腹10-14h）2、次晨空腹抽静脉血2ml,测定其血糖含量；3、将75g葡萄糖溶于200-300ml温开水中，令受试者5min内服下，服糖后0.5h、1h、1.5h、2h各抽血一次，做血糖定量测定；4、将各次测定结果与相应的时间制成糖耐量曲线图，以便进行分析。,若血糖测定不能立即进行，血标本应放在含有氟化钠的试管中，每mL全血可用氟化钠6mg。离心分离血浆，血浆可冰冻待测。 正常的血糖水平。空腹不超过6.0mmol/L，服75g葡萄糖0.5、1.5小时都不超过11.1mmol/L，2小时不超过7.8mmol/L。 葡萄糖耐量减低。应具备以下三条：即 空腹血糖7.0mmol/L； OGTT中服糖2小时血糖7.8mmol/L，低于11.1mmol/L； OGTT中，服糖后0.5、1、1.5小时三点中至少有一点血糖11.1mmol/L。 空腹血糖7.0mmol/L，临床已诊断糖尿病，则不再作OGTT,临床意义,生理性高血糖：可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 (2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 (3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 (4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。,生理性低血糖 ：见于饥饿和剧烈运动。病理性低血糖：(特发性功能性低血糖最多 见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等) (1) 胰岛细胞增生或胰岛细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。 (2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 (3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。,临床意义 1OGTT对隐性糖尿病诊断有帮助，在实际应用中亦可简化OGTT，即只取空腹和服糖后2小时标本测定血糖值，2小时值是关键性的。 2.内分泌疾病，如肾上腺皮质机能亢进疾病，有70%80%病人有糖耐量降低；反之肾上腺皮质功能减退，垂体前叶功能不全等，都可呈现低平糖耐量曲线。 3.慢性胰腺炎患者常呈现糖尿病曲线。 4.肝脏疾病，慢性肝炎患者可出现糖耐量降低。 5.心肌梗塞的急性期可能出现糖耐量降低。 6.肾性糖尿：肾小管重吸收机能减低，肾糖阈下降，以致肾小球滤液中正常浓度的葡萄糖也不能完全重吸收，此时出现的糖尿，称为肾性糖尿。 7.急性肝炎患者服用葡萄糖后在0.51.5小时之间血糖急剧增高，可超过正常。,不同年龄段糖耐量结果的 血糖值上限（mmol/L）,注意事项,（1）葡萄糖氧化酶对-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为型，64%为型。葡萄糖的完全氧化需要型到型的变旋反应。新配制的葡萄糖标准液主要是型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 测定标本以草酸钾氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到试管内，在80以下烤干使用，可使23ml血液在34天内不凝固并抑制糖分解。,本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以保证结果可靠。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。(2)1.OGTT受多种因素影响，如年龄、饮食、健康状况、胃肠道功能、某些药物和精神因素等。 糖尿病人检测前三天可正常饮食（每天进食碳水化合物量不少于250-300g），停用胰岛素治疗。实验前一天晚餐即不再进食。 2、 空腹时间1016小时，上午79时开始试验。 3、试验前8小时内，禁止抽烟、饮酒饮用咖啡，但口干时可以适量饮水。 4、避免异常的体力活动、精神紧张及各种刺激。 5、为免除恶心、呕吐，可将葡萄糖稀释成25%的浓度口服。 6、如口服避孕药物、降血糖药、水杨酸钠、心得安和某些利尿剂、激素等，应在试验前三天停用。,OGTT主要适应证： 1.无糖尿病症状，随机或空腹血糖异常者； 2.无糖尿病症状，有一过性或持续性糖尿； 3.无糖尿病症状，但有明显糖尿病家族史； 4.有糖尿病症状，但随机或空腹血糖不够诊断标准； 5.妊娠期、甲状腺功能亢进、肝病、感染，出现糖尿者； 6.分娩巨大胎儿的妇女或有巨大胎儿史的个体； 7.不明原因的肾病或视网膜病。,有以下情况者不宜行OGTT：（1） 空腹或餐后明显升高，明确诊断糖尿病。（2） 各种原因所致肠道吸收功能不良（急性胃肠道症状、胃大部切除术后）；内分泌紊乱疾病（垂体功能不全、肾上腺功能不全）；应急状态（精神紧张、外伤、急性疾病期）；长期卧床。（3） 可能影响血糖水平的药物（升高血糖药物：甲状腺素、皮质激素、噻嗪类利尿药物、左旋多巴、避孕药；降低血糖药物：如肾上腺能阻滞剂）。 应指出的是OGTT对机体所加的糖符合较大的，不宜在短于4周内重复。,（4）对于胃肠道手术或胃肠功能紊乱影响糖吸收的患者，糖耐量试验不宜口服进行，而需采用静脉葡萄糖耐量试验（invein glucose tolerance test，IGTT）。对OGTT正常但有糖尿病家族史者，可进行可的松OGTT，但50岁以上者对葡萄糖的耐受力有下降的趋势，所以不宜做此类试验。,方法评价,本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。一些还原性物质如尿酸、维生素 C 、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。左旋多巴100mg/L ，维生素 C 5mg/L 以上，谷胱甘肽 100mg/L 时，可引起负误差；半胱氨酸达 10mmol/L 时，产生相当0.72mmol/L 葡萄糖的正误差。,怎样预防糖尿病,(1) 必须忌烟