L05065陈金体

项目类别项目批准号附件3 华南农业大学大学生科技创新活动项目结题书 项目名称：利用RAPD分子标记鉴定甜瓜、苦瓜种子纯度申 请 人： 陈金体 巫峡 所在院部： 生命科学学院 专业年级： 2002级生物技术（人才基地班） 联系电话：38675351 指导教师: 王晓峰 职称 教授 申报日期： 二五 年 四 月 二十 日 结题日期： 二六 年 四 月 十 日华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心 填 表 说 明 一、 填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。 二 、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报大学生科技创新活动项目指导中心。三 、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；四级标题四号仿宋，用“”标示。示例：一、XXXX课题立项与研究的目的意义（一）XXXX课题立项与研究的目的的意义1、XXXX课题立项与研究的目的意义XXXX课题立项与研究的目的意义四、如表格不够，可以加附页。一、简表项目简况项目名称利用RAPD分子标记鉴定甜瓜、苦瓜种子项目类别 B、理科类申请经费1500元起止年月2005.4.2006.4.项目组成员姓 名性别出生年月年级专业班级所在学院上学年综合测评分项目中的分工本人签字陈金体女1983.1202级生物技术基地班生命科学学院81.53甜瓜巫峡男1983.4.02级生物技术基地班生命科学学院83.91苦瓜指导教师情况姓名王晓峰性别男学位博士职称教授研究方向种子科学与技术授课名称植物生理学、 植物生理研究技术等项目简介甜瓜、苦瓜是我省重要的水果，有较大的种植面积。近年，种子市场上出现了以假冒真、以次充好的情况，制假、售假事件时有发生，使国家和农民利益受到极大的损害，成为良种推广、作物产量提高的一大潜在障碍。为此，我们利用一种快速、准确、成本较低的实验室方法RAPD分子标记来鉴定甜瓜的种子纯度。本实验把该方法运用到我省甜瓜的种子纯度的研究上，希望得到一个快速、准确的测量结果，并且对规范我省种子市场，保护育种者和农民的合法权益起到促进作用二、项目研究的内容与方法1）研究内容1、苦瓜、甜瓜种子的DNA提取2、PCR扩增反应优化3、引物筛选4、种子纯度与真实性的鉴定2）方法1、单因素实验设计法2、正交实验设计方法3、概率统计与统计软件应用三、项目研究过程与资料查阅情况1）研究过程1、实验材料、仪器、试剂溶液的配制2、DNA提取（从幼苗到种子）3、PCRRAPD反应条件的摸索 单因素实验 研究了退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、模板浓度、Taq酶量、镁离子浓度、反应循环在PCR反应的影响，找出最适反应条件。 正交实验 从节约的角度，科学地设计了引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶量、镁离子浓度的L9（34）实验方案，取得了成功。在正交系统建立的基础下，同时研究了退火温度、模板DNA在反应中的影响。4、特异引物的筛选利用随机的原则，找到能够区别若干品种（甜瓜间、苦瓜间）的引物。5、种子纯度与真实性的检测利用特异引物检测某个品种内种子的纯度。2）资料查阅情况不仅在图书馆借阅了相关文献，而且还利用网络资源，搜索了最新的研究进展和品种资源。可参考本结题论文的参考文献。四、项目成果完成形式和价值建立了比较稳定的PCR-RAPD反应体系。目前，所能查到研究甜瓜的文献多以厚皮甜瓜为实验材料。在广东近年来兴起了种植薄皮甜瓜，为此薄皮甜瓜的种子纯度鉴定应该要十分重视，不能让假种子流入种子市场。因此本实验材料选择的是薄皮甜瓜。在参考文献中有很多种子纯度的检测方法。本实验所用的方法是总结了前人的一些实验方法再加以改进而成的。研究目的是建立起用RAPD分子标记检测甜瓜种子纯度的方法，为甜瓜种子纯度检测提供一些参考。在找到有关于甜瓜种子纯度鉴定的文献中都是黄化的幼苗来提取DNA，在陆璐等（2005）从甜瓜子叶中提取总DNA的研究中提到一般方法不能直接提取甜瓜成熟的干种子DNA。而本实验尝试改良的方法直接用甜瓜种子来提取DNA进行RAPD检测，这样可以大大缩短了种子检测的时间。 苦瓜在华南地区的种植范围很广，建立RAPD分子指纹标记后，可以快速检测其品种类型。结合各地区的气候特点，找出品种与区域的最佳组合，无疑是对农民的一个福音。五、经费使用情况1500元主要用于甜瓜、苦瓜种子的选购和各类相关试剂的购买。当然还要感谢指导老师王晓峰老师和种子科学技术实验室为我们提供了各类先进仪器，提高我们的实验质量。六、申请人对该项目研究工作完成后的认识总结1、分子学实验是一门要求精度性的实验，实验的材料及结果不在于多，而在于精。2、实验强度比想象中要大许多。要预先好好计划实验时间，不能因为有其它事情而影响到实验进度。3、要好好看一些参考资料，对实验有整体的想法后在开始进行实验。4、实验过程中要与导师多交流，遇到问题要多向老师、师兄师姐请教。5、实验过程中要不断总结。3.实验过程中要与导师多交流，遇到问题要多向老师、师兄师姐请教。4.实验过程中要不断总结。七、指导教师对项目完成情况的意见陈金体和巫峡同学的课题，拟采用RAPD分子标记技术鉴定甜瓜和苦瓜种子的纯度，找到了两种材料的适