第六章芳酸与其酯类药物分析-3

非甾体抗炎药 NSAIDs 是一类不含有甾体骨架的抗炎药 是目前临床使用最多的药物种类之一 1 水杨酸类 典型药物6种 2 邻氨基苯甲酸类 典型药物 甲芬那酸 7其他类 典型药物 尼美舒利 对乙酰氨基酚 阿司匹林 水杨酸 双水杨酯 贝诺酯 二氟尼柳 3 邻氨基苯乙酸类 典型药物 双氯芬酸钠 4 芳基丙酸类 典型药物 布洛芬 酮洛芬 萘普生 6 苯并噻嗪甲酸类 典型药物 吡罗昔康 美洛昔康 5 吲哚乙酸类 典型药物 吲哚美辛 P199 salycylicacid aspirin salsalate 贝诺酯 benorilate 二氟尼柳 甲芬那酸mefenamicacid 双氯芬酸钠 布洛芬 酮洛芬 萘普生 吲哚美辛 六 苯并噻嗪甲酸类典型药物 吡罗昔康 美洛昔康 其他非甾体抗炎药 尼美舒利 对乙酰氨基酚 扑热息痛 结构特点 共同点 苯环 羧酸 羧基状态 游离 水杨酸 阿司匹林 双水杨酯 二氟尼柳 甲芬那酸 布洛芬 酮洛芬 萘普生 吲哚美辛盐 酯 双氯芬酸钠 双水杨酯酰胺 吡罗昔康 美洛昔康 苯环结构特征 邻羟基苯甲酸 水杨酸 阿司匹林 双水杨酯 二氟尼柳邻胺基苯甲酸 甲芬那酸二苯甲酮 酮洛芬羟基不饱和酮 吡罗昔康 美洛昔康杂环 吲哚美辛 吡罗昔康 美洛昔康特殊元素 二氟尼柳 氟 双氯芬酸钠 吲哚美辛 氯 吡罗昔康 美洛昔康 硫 1 性状大部分是固体 具有一定的熔点 2 溶解性大部分不溶于水 易溶于有机溶剂 1 酸性具游离羧基 呈酸性 其pKa在3 6之间 属中等强度的酸或弱酸 X NO2 OH COOH等吸电子取代基存在使酸性增强 CH3 NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱 邻位取代 间位 对位取代 尤其是邻位取代了酚羟基 由于形成分子内氢健 酸性大为增强 pKa 3 492 954 26 2 水解性酯键 阿司匹林 双水杨酯芳酸酯可水解 利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别 利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质 芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量 芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质 酰胺键 吲哚美辛 吡罗昔康 美洛昔康 尼美舒利 对乙酰氨基酚易水解 利用水解反应鉴别或利用水解产物的理化特性鉴别或含量测定 3 吸收光谱特征 紫外特征光谱 鉴别 含量均匀度检查 溶出度 释放度测定红外特征光谱 鉴别 4 基团或元素特性 酚羟基 对乙酰氨基酚 水杨酸与Fe3 显色 鉴别二苯甲酮 酮洛芬与苯肼缩合显色 鉴别硫 美洛昔康热分解后产生的硫化氢 与醋酸铅生成黑色硫化铅 鉴别 与铁盐的反应 重氮化 偶合反应 缩合反应 水解反应 氧化反应 紫外吸收光谱法 红外吸收光谱法 薄层色谱法 高效液相色谱法 特征元素的反应 1 具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物 直接 水杨酸 二氟尼柳 水杨酸Ch P 2010 鉴别 1 取本品的水溶液 加三氯化铁试液1滴 即显紫堇色 间接 阿司匹林 贝诺酯 双水杨酯 阿司匹林Ch P 2010 鉴别 1 取本品约0 1g 加水10ml 煮沸 放冷 加三氯化铁试液1滴 即显紫堇色 2 苯甲酸的碱性水溶液或苯甲酸的中性溶液 3 丙磺舒 紫堇色 赭色 米黄色 具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物 2 间接 对乙酰氨基酚 对乙酰氨基酚 H2O H 芳伯氨基结构 HCl NaNO2 OH 萘酚 橙红色沉淀 重氮化试剂 HCl NaNO2偶合试剂 碱性 萘酚 直接 盐酸普鲁卡因 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因胺间接 对乙酰氨基酚 扑热息痛 醋氨苯砜 贝诺酯 三 缩合反应 酮洛芬具有二苯甲酮结构 在酸性条件下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物沉淀 1 阿司匹林与碳酸钠试液加热水解 白色 阿司匹林Ch P 2010 鉴别 2 取本品约0 5g 加碳酸钠试液10ml 煮沸2分钟后 放冷 加过量的稀硫酸 即析出白色沉淀 并发生醋酸的臭气 2 双水杨酯 双水杨酯 NaOH 白色水杨酸沉淀 水杨酸沉淀物溶于醋酸铵试液 五 氧化反应 甲芬那酸Ch P 2010 鉴别 2 取本品约5mg 加硫酸2ml使溶解 加0 5 重铬酸钾溶液0 05ml 即显深蓝色 随即变为棕绿色 六 特征元素的反应 1 氯元素的鉴别双氯芬酸钠Ch P 2010 鉴别 3 取本品约50mg 加碳酸钠0 2g 混匀 炽灼至炭化 放冷 加水5ml 煮沸 滤过 滤液显氯化物鉴别反应 附录III 2 硫元素的鉴别美洛昔康Ch P 2010 鉴别 1 取本品约30mg 置试管中 炽灼 产生的气体能使湿润的醋酸铅试纸显黑色 七 光谱鉴别法 一 紫外 可见分光光度法 1 规定一定浓度药物的最大吸收波长 Ch P 2010 萘普生的鉴别 取本品 加甲醇制成每1ml中含30 g的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在262nm 271nm 317nm与331nm的波长处有最大吸收 2 规定一定浓度药物的 max及其吸光度 Ch P 2010 甲芬那酸的鉴别 取本品 加1mol L盐酸溶液 甲醇 1 99 混合液溶解并稀释制成每1ml中含20 g的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在279nm与350nm的波长处有最大吸收 其吸光度分别为0 69 0 74与0 56 0 60 3 规定一定浓度药物的 max及在两波长处的吸光度比值 Ch P 2010 二氟尼柳的鉴别 取本品 加0 1mol L的盐酸乙醇溶液溶解并稀释制成每1ml中含20 g的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在251nm与315nm的波长处有最大吸收 吸光度比值应为4 2 4 6 4 规定一定浓度药物的 max min及肩峰 Ch P 2010 布洛芬的鉴别 取本品 加0 4 氢氧化钠溶液制成每1ml中含0 25mg的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在265nm与273nm的波长处有最大吸收 在245nm与271nm的波长处有最小吸收 在259nm的波长处有一肩峰 二 红外分光光度法 三 荧光分光光度法 甲芬那酸Ch P 2010 鉴别 1 取本品约25mg 加三氯甲烷15ml溶解后 置紫外光灯 254nm 下检视 显强烈绿色荧光 邻双取代苯 CH770 730cm 1 OH3400 2500cm 1 宽 C O 1700cm 1 COOH C O 1770 1720cm 1 酯 O H950 900cm 1 八 色谱鉴别法 一 薄层色谱法 二 高效液相色谱法 Ch P 2010 中二氟尼柳胶囊的鉴别 取本品内容物适量 约相当于二氟尼柳50mg 加甲醇5ml 振摇使二氟尼柳溶解 滤过 滤液作为供试品溶液 另称取二氟尼柳对照品适量 用甲醇溶解制成每1ml中约含10mg的溶液 作为对照品溶液 照薄层色谱法 附录 B 试验 吸取上述两种溶液各5 l 分别点于同一硅胶GF254薄层板上 以正己烷 二氧六环 冰醋酸 85 10 5 为展开剂 展开 晾干 置紫外光灯 254nm 下检视 供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同 请同学们上来讲阿司匹林的结构 性质和分析方法的关系 及其鉴别试验 1 鉴别水杨酸及其盐类 最常用的试液是A 碘化钾B 碘化汞钾C 三氯化铁D 硫酸亚铁 2 阿司匹林加碳酸钠试液加热后 再加稀硫酸酸化 此时产生的白色沉淀应是苯酚乙酰水杨酸C 水杨酸D 醋酸钠 3 水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应 要求溶液的pH值是pH 10 0pH 2 0C pH 7 8D pH 4 6 4 在下列药物中 不能和三氯化铁试液反应的药物是A二氟尼柳B阿司匹林C吡罗昔康D吲哚美辛E对乙酰氨基酚 阿司匹林中特殊杂质的检查 双水杨酯中游离水杨酸的检查 二氟尼柳中相关物质的检查 萘普生中6 甲氧基 2 萘乙酮等有关物质检查 甲芬那酸中特殊杂质的检查 对乙酰氨基酚中对氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查 特殊杂质的由来与方法检查 AcetylSalicylicAcid SA Aspirin 2020 4 15 60 1 游离水杨酸来源 乙酰化不完全 生产工艺 水解产物 精制及贮存期间 游离水杨酸有毒 分子中酚羟基易被空气氧化成有色醌型化合物 如淡黄 红棕甚至深棕色 方法 HPLC限度 0 1 原料 0 3 片 1 5 肠溶片 1 0 肠溶胶 3 0 泡腾片 栓剂 二 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质的检查 1 游离水杨酸HPLC色谱条件固定相 十八烷基硅烷键合硅胶 ODS 流动相 乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 检测波长 303nm 二 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质的检查 2 有关物质杂质 苯酚原料 降解产物醋酸苯酯水杨酸苯酯副产物乙酰水杨酸苯酯方法 HPLC自身对照 二 阿司匹林中游离水杨酸与有关物质的检查 来源 酯化不完全 生产工艺 水解产物 贮存期间 原理 水杨酸 Fe3 有色硝酸铁显色后在530nm测A方法 三氯化铁比色法限度 0 5 原料 1 5 片 三 双水杨酯中游离水杨酸的检查 二 甲芬那酸中2 3 二甲基苯胺的检查查 一 合成工艺 二 2 3 二甲基苯胺的检查 Ch P GC限度0 01 色谱条件聚乙二醇为固定液的毛细管色谱柱对照液恒温150 供试品溶液采用程序升温 起始温度维持至2 3 二甲基苯胺峰出峰后 以每分钟70 的速率升温至220 维持20min 进样口温度250 检测器温度260 一 二氟尼柳合成工艺 三 二氟尼柳中有关物质的检查 杂质 有关物质A B来源 苯或联苯类合成中间体或副产物方法 1 TLC 有关物质A2 HPLC 有关物质B 二 二氟尼柳有关物质检查 五 萘普生中6 甲氧基 2 萘乙酮等有关物质的检查HPLC 一 对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查 对乙酰氨基酚以对硝基氯苯为原料合成 六 对乙酰氨基酚中对氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查 对硝基氯苯为原料合成对乙酰氨基酚时 如发生这样的副反应就能够引入对氯苯乙酰胺 还原 对氨基酚 对氯苯乙酰胺 邻乙酰基对乙酰氨基酚 偶氮苯 氧化偶氮苯 苯醌 醌亚胺等对氨基酚及有关物质HPLC对氯苯乙酰胺HPLC固定相 辛烷基硅烷键合硅胶流动相 磷酸盐缓冲液 甲醇检测波长 245nm柱温 40 二 有关物质检查 请同学们上来讲你所查阅的此类药物有关物质的检查方法 5 阿司匹林原料药中应检查的项目是A 溶液的澄清度B 溶液的颜色C 间氨基酚D 水杨酸 6 8 A高效液相色谱法B气相色谱法C原子吸收分光光度法D紫外分光光度法E薄层色谱法下列药物的检查方法为6 甲芬那酸中的2 3 二甲基苯胺的检查7 二氟尼柳中的有关物质A的检查8 萘普生中的有关物质检查 A E B 9 阿司匹林中含量最高的杂质为A 乙酰水杨酸酐B 乙酰水杨酸水杨酸C 水杨酸D 水杨酰水杨酸 酸碱滴定法 双相滴定法 紫外分光光度法 高效液相色谱法 案例6 1 Ch P 2005 阿司匹林片的含量测定取本品10片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于阿司匹林0 3g 置锥形瓶中 加中性乙醇溶解后 振摇使阿司匹林溶解 加酚酞指示液3滴 滴加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 至溶液显粉红色 再精密加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 40m1 置水浴上加热15分钟并时时振摇 迅速放冷至室温 用硫酸滴定液 0 05mol L 滴定 并将滴定的结果用空白试验校正 每lml的氢氧化钠滴定液 0 1mo1 L 相当于18 02mg的C9H8O4问题 1 阿司匹林片的含量测定能否采用直接滴定法或水解后剩余滴定法 为什么 2 何为 中性乙醇 3 简述该法的原理及优缺点 Ch 2010 阿司匹林片 阿司匹林肠溶片的含量测定改用何种方法 有何优点 请同学们上来讲阿司匹林及其制剂含量测定方法 一 酸碱滴定法 以阿司匹林为例 一 直接滴定法 游离羧基 方法 原理 产物为强碱弱酸盐宜选酚酞为指示剂 NaOH 乙醇对酚酞显酸性 可消耗氢氧化钠滴定液 应用范围 不能用于含水杨酸过高或制剂分析 只能用于合格原料药的含量测定 优点 简便 快速缺点 酯键水解干扰 不断搅拌 快速滴定 酸性杂质干扰 如水杨酸 例称取阿司匹林供试品0 3955g 溶于中性乙醇 用酚酞为指示剂 以氢氧化钠滴定液 0 1015mol L 滴定到终点时 消耗氢氧化钠滴定液 0 1015mol L 21 56ml 每lml的氢氧化钠滴定液 0 1mo1 L 相当于18 02mg的C9H8O4 计算阿司匹林的百分含量 二 水解后剩余滴定法 酯结构 方法 利用阿司匹林分子中的酯键 加入定量过量的NaOH溶液加热使之水解 剩余的碱用硫酸溶液滴定 同时做空白 碱液在受热时易吸收二氧化碳 用酸回滴时会影响测定结果 故需进行空白校正 原理 应用范围 羟苯乙酯 NaOH 定量过量 反应摩尔比为1 2 优点 消除了酯键水解的干扰缺点 酸性杂质干扰 含量计算 取供试品1 5078g 加入NaOH滴定液 0 5mol L 50 0mL混合 加酚酞指示液 用硫酸滴定液 0 25mol L F 0 996 滴定剩余的氢氧化钠液 消耗15 70mL 空白试验消耗49 70mL 已知每毫升的氢氧化钠滴定液 0 mol L 相当于45 04mg药物 试计算供试品的百分含量 三 两步滴定法 酯结构 含酸性杂质 方法 第一步 中和 用氢氧化钠中和所有的游离酸 不计量 酒石酸枸橼酸水杨酸醋酸 NaOH 酒石酸钠枸橼酸钠水杨酸钠醋酸钠 第二步 水解与测定 采用剩余滴定法 NaOH 定量过量 反应摩尔比为1 1 取本品10片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于阿司匹林0 3g 置锥形瓶中 加中性乙醇溶解后 振摇使阿司匹林溶解 加酚酞指示液3滴 滴加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 至溶液显粉红色 此时中和了原来的游离酸 阿司匹林也同时成为钠盐 再精密加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 40m1 置水浴上加热15分钟并时时振摇 迅速放冷至室温 用硫酸滴定液 0 05mol L 滴定 并将滴定的结果用空白试验校正 每lml的氢氧化钠滴定液 0 1mo1 L 相当于18 02mg的C9H8O4 反应摩尔比为1 1 计算 例取标示量为0 3g的阿司匹林片10片 称出总重为3 5840g 研细后称取0 3484g 按药典方法测定 供试品消耗硫酸滴定液 0 05015mol L 23 84ml 空白试验消耗硫酸滴定液 0 05015mol L 39 88ml 每lml的氢氧化钠滴定液 0 1mol L 相当于18 02mg的C9H8O4 求此片剂的标示量 四 剩余量滴定法美洛昔康Ch P 2010 取本品约0 4g 精密称定 精密加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 25ml 微温溶解 放冷 加中性乙醇 对溴麝香草酚蓝指示液显中性 100ml 加溴麝香草酚蓝指示液10滴 用盐酸滴定液 0 1mol L 滴定 并将滴定的结果用空白试验校正 每1ml的氢氧化钠滴定液 0 1mol L 相当于35 14mg的C14H13N3O4S2 五 非水碱量法芳酸碱金属盐 双氯芬酸钠有机弱碱 吡罗昔康冰醋酸作溶剂高氯酸的冰醋酸溶液作滴定剂结晶紫作指示剂指示终点或电位法指示终点 二 紫外分光光度法 三 高效液相色谱法 取装量差异项下的内容物 研细 精密称取适量 约相当于二氟尼柳0 1g 置100ml量瓶中 加0 1mol L的盐酸乙醇溶液适量 超声处理10分钟使二氟尼柳溶解 放冷 用0 1mol L的盐酸乙醇溶液稀释至刻度 摇匀 滤过 精密量取续滤液5ml 置l00ml量瓶中 用0 1mol L的盐酸乙醇溶液稀释至刻度 摇匀 在315nm的波长处测定吸光度 另取二氟尼柳对照品 精密称定 用0 1mol L的盐酸乙醇溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含50 g的溶液作为对照品溶液 同法测定 计算 即得 片剂 胶囊剂 注射用无菌粉末 紫外分光光度法的对照品对照法 吲哚美辛贴片Ch P 2010 取本品5片 分别剪成小条 除去保护层 置干燥的具塞锥形瓶中 精密加甲醇250m1 避光放置 浸渍2h后 摇匀 精密量取浸渍液5ml 置50ml量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 照紫外 可见分光光度法 在320nm的波长处测定吸收度 按C19H16ClNO4的吸收系数 为179计算 即得 片剂 胶囊剂 注射用无菌粉末 紫外分光光度法的吸收系数法 二 柱分配色谱 紫外分光光度法 USP 33 阿司匹林胶囊和栓剂固定相 硅藻土 NaHCO3洗脱液 冰醋酸 三氯甲烷280nm测定 对照法定量 三 HPLC 离子抑制色谱法 阿司匹林栓Ch P 2010 ASA栓剂的含量测定 色谱条件与系统适用性试验色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶流动相 乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 检测波长 276nmn 3000R 1 5 9 乙酰水杨酸片剂可采用的测定方法为 A 非水滴定法B 水解后剩余滴定法C 两步滴定法D 柱色谱法E 双相滴定法 10 测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是 A 重量法B 酸碱滴定法C 高效液相色谱法D 络合滴定法E 高锰酸钾法 11 两步滴定法测定阿司匹林片的含量时 每1ml氢氧化钠溶液 0 1mol L 相当于阿司匹林 分子量 180 16 的量是 A 18 02mgB 180 2mgC 90 08mgD 45 04mgE 4