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文档简介

动物基因组DNA的提取 GenomicDNAISOLATION 分子生态学实验 一 实验目的 学习动物基因组DNA提取的原理和方法 二 实验原理 重要性 DNA是遗传信息的载体 是最重要的生物信息分子 因此DNA的提取也是分子生物学实验技术中最重要 最基本的操作之一 原则一 保证核酸一级结构的完整性 原则二 排除其它分子 如蛋白 多糖 脂类 有机溶剂等 的污染 使下游实验顺利进行 二 实验原理 DNA的结构和性质 双螺旋结构 化学稳定性 物理易碎性 二 实验原理 DNA的结构和性质 DNA与组蛋白构成核小体 核小体缠绕成螺旋管状结构 即染色质 染色质高度螺旋成染色体 染色体存在与细胞核中 外有核膜和胞膜 二 实验原理 提取DNA的原理和方法 先将组织分散成单个细胞 然后破碎胞膜及核膜 使染色体释放出来 除去杂质 如与DNA结合的组蛋白 三 实验材料和试剂 动物组织缓冲液 STE 100mMNaCl 10mMTris Cl 1mMEDTA 消化液 蛋白酶K 20mg ml SDS 20 提取液 酚 氯仿沉淀液 乙醇或异丙醇RNA酶 20ug ml 四 仪器设备 离心机水浴锅电子天平微量移液器 五 方法与操作 破碎动物组织 消化 抽提 沉淀 保存 五 方法与操作 动物组织约50mg 加入500ul缓冲液STE 剪碎 加入消化液 6ul蛋白酶K 25ulSDS 55 1 2h 加入等体积提取液 酚 氯仿 混合5min 离心3min 取上清液 加入2ulRNA酶 37 10min 加入100ulTE至DNA完全溶解 20 保存 去除液体 加入200ul无水乙醇 摇匀后去除液体 静置至乙醇完全挥发 去除上清液 200ul70 乙醇洗涤沉淀 离心1min 加入沉淀液 2倍体积预冷无水乙醇 摇匀 离心3min 加入等体积提取液 氯仿 混合5min 离心3min 六 注意事项 防止外源DNA污染 带手套 操作要轻柔以减少DNA降解 抽提DNA取上清液时 应用剪口的黄枪头 且不应贪多 避免吸入中间蛋白层或下层有机溶剂 抽提液 酚 氯仿 有腐蚀
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