脂肪肝模型动物及建立方法汇总.doc

1. 中药药理与临床2007标题：大鼠高血脂及脂肪肝模型的建立（本实验选用高脂饲料诱导大鼠高血脂、脂肪肝，为预防脂肪肝药物的筛选提供实验模型。）目的：建立大鼠高血脂及脂肪肝模型。方法：SD大鼠随机分为2组，分别接受正常饲料、高脂饲料，连续3周，测定大鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、极低密度脂蛋白(VLDLC)。11动物：SD大鼠，SPF级，20只，雌雄各半，体重180220g, 实验动物质量合格证明号：2006A12高脂饲料：高脂饲料由猪油(12自制)、胆固醇(2)、丙硫氧嘧啶(0.2)、3号胆盐(0.5)、普通混合饲料粉(85.3)组成，将以上各物先人工充分混匀，再经搅拌，压成圆条状颗粒，真空包装后，经”co辐照消毒备用，由南方医科大学实验动物中心制作。13方法：将大鼠随机分为正常对照组(10只)、高脂模型组(10只)，雌雄各半。正常对照组投喂普通颗粒饲料，高脂模型组以高脂饲料替代普通饲料投喂，平均每天每只约20克左右。动物造模3周，实验结束前1天晚上禁食，不禁水，次日上午麻醉后，腹主动脉采血，分离血清，送南方医科大学附属南方医院医学检验中心检测血脂五项。取肝脏，称肝湿重，计算肝指数，并在肝右叶离边缘1cm处，横切一块肝组织用10中性福尔马林固定，常规脱水，HE染色。讨论：本文用高脂饲料成功地复制了大鼠高脂血症及脂肪肝模型，严重的肝细胞的变性可导致部分动物出现不同程度的肝细胞坏死。高脂模型组大鼠肝脏体积增大，重量增加，质软切面油腻为奶黄色。高脂模型组大鼠血清TG、TC、LDLc、VLD含量都非常显著升高。对于HDLc所占Tc的百分率，正常对照组非常显著高于高脂模型组，虽然高脂模型组HDLC含量明显高于正常对照组，但由于正常对照组TC含量远远低于模型对照组，故HDLC含量必然低于模型对照组。HDLC为动脉粥样硬化性心脑血管病的保护因子，本实验可知，正常对照组HT明显高于模型对照组，故将HT作为一项衡量HDLC在体内相对含量高低的指标，更有实际意义。在本实验中，正常对照组平均每只大鼠饲料消耗量为5369，高脂模型组平均每只大鼠饲料消耗量为M89。高脂模型组大鼠体重的减轻，与大鼠形成严重脂肪肝后，影响摄食量有关。2. 吉林大学学报(医学版)标题：大鼠脂肪肝模型的建立目的：探讨脂肪肝动物模型的制作方法。方法：用缺乏蛋氨酸和胆碱的饲料喂养大鼠，复制脂肪肝模型，并进一步研究门静脉压、肝重体重比以及肝脏病理结构的变化。结论：用缺乏蛋氨酸和胆碱的饲料喂养大鼠复制脂肪肝模型，喂养时间短，价格低廉，是一种较好的脂肪肝模型制作方法。配方成分：蔗糖360g，右旋麦芽糖200 g，猪油250 g，植物纤维素50g，玉米粉50g，食盐7.5g，黑豆30 g，CaCO32.5 g，MgO1.5 g,维生素A15000u，维生索D2 1500u，维生素E0.5 g。一、方 法 雄性wiscar大鼠36只，体重(200士l0)g，随机抽取12只，作为对照组用正常饲料喂养21 d后行门静脉压、肝重测定以及肝脏病理检查。其余24只大鼠作为实验组行脂肪肝模型复制，用该饲料喂养后的第8、14、2l和28天各取3只大鼠处死，进行肝脏病理切片(锇酸染色，观察肝脏脂肪变性程度，第21天另取12只大鼠行门静脉压和肝重测定。实验前14h禁食，可以自由饮水，戊巴比妥纳30 mg/kg腹腔内注射麻醉。上腹正中横行切口入腹，游离肝十二指肠韧带，用54头皮针(接有脑脊液I，型测压管)穿刺测门静脉压。取肝行肝重量测定后，另取部分肝，用lo甲醛固定，行常规病理切片检查。二、目前文献报道脂肪肝模型建立有以下几种方法：给予营养全面、包含乙醇的渡体饲料(低碳水化合物，占能量的55)喂养。该方法能够建立酒精性脂肪肝模型，但难于控制乙醇的平均浓度。乙醇加入饮水中(浓度40)，同时给予鼠维持正常生长所需的蛋白质和胆碱喂养。这是种比较简单的复制酒精性脂肪肝动物模型方法但缺点是用时较长。雄性wIslar鼠先禁食48h，然后给予高碳水化合物和脂肪的混合饲料。该方法时间较短，但禁食时间较长，对指标的测定影响较大。通过近亲交配建立的FIS(fatty liver shionogi)鼠。这是一种较理想的方法，但国内尚无此种鼠出售。用CCL4和四环素诱导鼠脂肪肝动物模型。该法费时长，毒性大。用HarlanT验室的CMDD饲料喂养14 d即可诱发肝脂肪变性。CMDD饲料能提供大鼠生长所需成分，用食用脂肪配制增加饲料的可食性，无需再增添其他成分，但价格昂贵。目前国外大多数鼠的非酒精性脂肪肝模型均采用HarlanTeklad实验室的饲料。本实验所用的饲料是由CMDD饲料改良而成，具有CMDD饲料的可食性，并且喂养时间短，价格低廉。用CMDD饲料诱发非酒精性脂肪肝的机理是饲料缺乏蛋氨酸和胆碱，前者为合成载脂蛋白所需，后者缺乏引起卵磷脂合成不足，从而导致极低密度脂蛋白合成下降，无法将甘油三酯运出肝外，引起肝内脂肪堆积，形成脂肪变性。文献报道用CMDD喂养的大鼠肝脏，经气相色谱法证实肝脏沉积的脂质大部分为甘油。甘油在1周内增长快，至2周达高峰，保持恒定至42 d，组织学检查发现超过23的肝细胞内含有脂滴，1442d脂肪肝中脂肪含量无明显差别。3. 中国老年学杂志标题：酒精合并高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型目的：探讨建立大鼠脂肪肝动物模型的方法。方法：60只雄性SD大鼠随机分成3组：正常对照(NS)组每日灌胃生理盐水和普通饲料喂养，高剂量模型(HM)组和低剂量模型(LM)组每天按照5g/kg体重对大鼠灌胃浓度为60(VV)和30(vV)的乙醇和按照5mlkg灌胃脂肪乳剂的方法，连续3 W，分别在第2周末和第3周末随机选取各组大鼠10只，观察其肝脏病理改变及血液生化指标的变化。11动物3月龄SPF级SD大鼠60只，雄性，体重(220+/-10)g，由广东医学院实验动物中心提供(广东省动物质量合格证编号：2007A021)。饲养室内温度保持在24一26，湿维持在50-60，专室饲养，专人负责。高脂饲料：高脂高糖脂肪乳剂(50gL胆固醇、500gL猪油、50g/L胆酸钠和50gL丙基硫氧嘧啶、270gL蔗糖)12方法60只SD大鼠随机分为正常对照组(NS组)、高剂量模型组(HM组)和低剂量模型组(LM组)，每组20只。所有大鼠均于晚上10点后禁食不禁水，次日NS组每Et灌喂生理盐水和普通饲料乳剂5mlkg；HM组和LM组分别予60(V和30(VV)按照5gkgd“灌胃，1h后予脂肪乳剂灌胃5mlkg，随后恢复饲料喂养，每日1次，连续3w，分别在第2周末和第3周末随机选取各组大鼠lO只，取材检测相应指标。每日观察大鼠的一般症状、进食。本课题造模采用灌胃脂肪乳剂的方法造模，保证了实验条件的一致性。于造模更加有利。本造模方法与人类酒精性脂肪肝病变类似，实验周期较短，造模方法简单易行，一般实验室均可进行，为今后酒精性脂肪肝的研究提供了较有价值的动物模型。4. 造瘘法、酒精灌胃法制作酒精性肝病及高脂营养饮食复制非酒精性肝病的三种动物模型制作方法和优点和缺点。用刚断乳雄性SD大鼠。胃造瘘法克服了酒精灌胃模型的缺点，是适合我国国情的简便易行、经济可靠、死亡率低的酒精性肝病动物模型，值得推广应用。5. 福建中医学院学报标题：脂肪肝的动物模型研究进展6、中华肝脏病杂志2010年1月第18卷高脂饮食诱导幼鼠脂肪肝模型的建立及其相关代谢研究目的：通过高脂饮食诱导幼龄大鼠建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型。方法：3周龄刚离乳SD大鼠30只，雌雄各半，随机分为正常(N)组、20高脂饮食组(HFI组)、30高脂饮食组(HF2组)。无特定病原环境下饲养6周，第6周末处死大鼠，分别进行如下检测：(1)身长、体质量、肝脏质量测量，计算肝指数；(2)采血测空腹ALT、AsT、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、胰岛素、血糖水平，计算HOMA胰岛素抵抗指数；(3)肝组织匀浆，检测肝脏TG水平；(4)肝组织切片苏木素一伊红染色观察肝组织病理形态，油红O染色显示脂质沉积；(5)免疫组织化学EnVision法染色，显示肝组织固醇调节元件结合蛋白一1、瘦素的表达。组间均数比较采用One-wayANOVA、两两比较采用LSD方法进行统计学分析。结论： 30高脂饲料饲养6周，可以诱导幼龄大鼠建立NAFLD模型，高脂饮食导致幼鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白一l表达增加，脂肪合成增加，瘦素表达增加。7、中国医学创新小鼠非酒精性脂肪肝实验模型建立最佳饲料配比方案目的：探讨建立小鼠非酒精性脂肪肝动物模型的最佳饲料配比方案，为进一步开展脂肪肝及其治疗的相关研究提供有价值的实验数据。方法：80只KM小鼠随机分为4组，甲、乙、丙为模型组，丁组为对照组。模型组给予不同梯度的高脂饮食，对照组给予正常饮食。在造模后每1周分别取模型组动物各5只处死，观察其病理模型形成情况，做血液指标检测及病理切片；采用全自动生化分析仪检测生化指标；取肝脏，制肝匀浆，测定LTG/LTC。 结论：适当的高脂高胆固醇配比饮食是一种快速有效的脂肪肝模型制作方法。8、非酒精性脂肪肝模型小鼠的建立l 目前文献报道非酒精性脂肪肝小鼠模型建立常用方法为：通过高脂和/或高胆固醇饲料喂养，但该方法成模周期长；l 禁食后摄入髙糖、高淀粉诱发脂肪肝，主要缺点是不符合临床上脂肪肝的发病过程；l 全胃肠外营养造成的脂肪肝模型，该模型与人类相似，但由于操作复杂限制了其推广应用；l 通过胆碱和蛋氨酸缺乏饲料喂养制备模型，但该方法饲养成本较贵7-9。此外，高脂饮食是形成NAFLD的最主要因素，也是NAFLD模型制备的常用方法，目前动物实验中采用的高脂饲料的配方是在基础饲料的基础上添加胆固醇、猪油、胆酸钠，胆酸钠可以乳化脂肪，促进吸收。喂养812周后可以形成肝脏脂肪变性，但形成效果不稳定，并且很难进展到肝纤维化、肝硬化阶段。为此，实验对造模方法加以改进，方法为：高脂饮食的配方中添加0.2%丙基硫氧嘧啶，抑制胆固醇分解，增加脂质在肝脏中沉积12。在采用复合高脂饲料2周后，腹腔注射5%CCl4植物油溶液，缩短脂肪肝形成时间。腹腔注射50%的CCl4，2次/周，是常用的制备肝纤维化模型的方法13-15，CCl4进入体内后，在肝脏内经肝细胞色素P450激活，生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基3,16。这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子发生共价结合，使酶的功能丧失，细胞膜脂质过氧化，胞浆钙离子浓度升高，导致肝细胞损伤坏死。实验改进的方法仍以复合高脂饮食为基础，在高脂饲养的基础上加用十分之一浓度的CCl4腹腔注射，加速肝脏损伤过程3,16这更符合NAFLD形成的致病因素。非酒精性脂肪肝动物模型1.动物选择常用雄性或SD大鼠（140200克）Wistar（140200克），也可选用家兔、小鼠、豚鼠。国外也有特殊种系动物的先天性遗传性脂肪肝模型，但实用性有限。2.非酒精性脂肪肝动物模型2.1营养性脂肪肝模型2.1.1高脂饲料诱发肥胖、高脂血症性脂肪肝常用高脂饲料的组成有以下几种：（1）普通饲料加1%胆固醇、5%猪油、10%玉米油。大鼠食用该饲料3个月时出现轻度肝脂肪变性，6个月脂肪肝进展至中度，但未出现肝纤维化。配方中添加玉米油是因为它是一种多不饱和脂肪酸，能加重脂质过氧化损伤1。（2）普通饲料加0.5%胆固醇、5%猪油、0.3%胆盐。大鼠食用该饲料8周后出现中至重度肝脂肪变性2。（3）普通饲料加1.5%胆固醇、10%猪油、0.5%胆盐。大鼠食用该饲料8周后出现中度以上肝脂肪变性，肝内MDA显著升高，S0D、VitE 降低，肝细胞CYPE1在腺泡3区表达增强，且从3区移至2区3。（4）普通饲料加1.5%胆固醇、0.5%猪胆盐、5%猪油。大鼠食用该饲料3月肝脏出现轻到中度脂肪变，血清ALT、AST、ALP、GLU呈上升趋势，但与正常组无显著性差异。血清TC、TG和肝组织TG显著升高4。（4）普通饲料加2%胆固醇、10%猪油、0.5%胆酸钠、5%蛋黄粉。大鼠食用该饲料第4周时血脂已明显升高，第12周时肝湿重、肝指数明显高于对照组，HE染色显示弥漫性肝脂肪变性5。（5）普通饲料加2%胆固醇、10%猪油、0.5%甲基硫氧嘧啶、5%蔗糖。大鼠食用该饲料14天后，血甘油三酯是正常组的5倍，病理学检查显示肝小叶内充满大小不等的脂滴6。（6）普通饲料加2%胆固醇、10%猪油。大鼠食用该饲料12周后，病理学示肝细胞中至重度脂肪变性，肝脂变复制率100%，血清ALT、AST、FFA显著升高，免疫组化示CYPE1 表达增强，且以中央静脉周围最为明显。由于几乎所有高脂饮食大鼠均出现了小叶内炎症和（或）汇管区炎症，严重者还有碎屑样坏死，所以亦可认为是肥胖性高脂血症性脂肪性肝炎的动物模型7。但该模型不存在胰岛素抵抗8。（7）普通饲料加2%胆固醇，减少VitC量至正常量的一半（300mg/kg）。豚鼠食用该饲料21天后即可形成胆囊胆固醇性结石和肝细胞脂肪变性9。（8）Wistar大鼠每天经胃管灌入360kcal/kg的高脂高热量液体饲料。造模组28天后出现明显脂肪肝，尚存在高血糖、高胰岛素血症，发生了胰岛素抵抗。但每天灌胃较为繁琐10。2.1.2高淀粉、高糖摄入诱发的脂肪肝模型。（1）雄性Wistar大鼠禁食48小时后，予高糖饲料（40%双糖、40%淀粉）两天后肝细胞脂肪变性，但无炎症，Western 印迹定量测定CYPE1仅为正常组的20%11。（2）成年鸭子喂饲玉米（含75%淀粉）14天后，肝总脂含量从正常组的44mg/g上升至362mg/g，细胞色素P450含量亦显著减少11。2.1.3全胃畅外营养（TPN）和其他特殊饲料（如缺乏蛋氨酸-胆碱的饲料）造成的脂肪肝模型：由于操作复杂，限制了其推广应用。 2.2药物中毒性脂肪肝模型常用的药物有：CCL 4、四环素、乙硫氨酸、地塞米松等，均可在一周内造成脂肪肝模型，但与临床差别大。3.关于药物干预时间3.1造模同时给予药物干预阎明等造模同时给予辛伐他汀治疗4，发现用药组ALT、AST、GLU、体重、肝重、肝指数与未用药组均无显著性差异；刘菲等给予茴三硫（胆维他）治疗12，发现预防性用药并无明显的降低ALT、AST和肝指数作用，但可减轻肝脂变的程度；钟岚等给予UDCA、降脂复肝方（柴胡、桃仁、泽泻、生牡蛎、制大黄、炒白术）治疗13，用药组ALT、AST与模型组比较，有下降趋势，但无显著性差异。3.2造模后给予药物干预刘菲等给予雄性SD大鼠普通饲料加2%胆固醇、10%猪油12周后给予茴三硫（胆维他）治疗12，4周后ALT、AST明显降低，但肝指数无变化，肝脂变的程度减轻50%；阎明等给予雄性Wistar大鼠普通饲料加1.5%胆固醇、0.5%猪胆盐、5%猪油3月后给予非诺贝特治疗