基因工程2(精品)

基因工程强化训练（精品）1(2018全国卷，38)回答下列问题：(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了_(答出两点即可)。(2)体外重组的质粒可通过Ca2参与的_方法导入大肠杆菌细胞；而体外重组的噬菌体DNA通常需与_组装成完整噬菌体后，才能通过侵染的方法将重组的噬菌体DNA导入宿主细胞。在细菌、心肌细胞、叶肉细胞中，可作为重组噬菌体宿主细胞的是_。(3)真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用_的大肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添加_的抑制剂。2、(2018天津卷，10)甲型流感病毒为RNA病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下。(1)改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板，逆转录成对应DNA后，利用_技术扩增，并将其中某些基因(不包括表面抗原基因)内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的_，因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原基因等其他基因分别构建重组质粒，并保存。(2)构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物的反密码子能与(1)中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸(Uaa)。将该基因与_连接后导入宿主细胞。提取宿主细胞的_进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。(3)利用转基因宿主细胞制备疫苗。将(1)中的重组质粒导入(2)中的转基因宿主细胞，并在补加_的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA，翻译出改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。特殊tRNA基因转录时，识别其启动子的酶是_(单选)。A病毒的DNA聚合酶 B宿主的DNA聚合酶C病毒的RNA聚合酶 D宿主的RNA聚合酶(4)上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖，没有致病性，因此不经灭活或减毒即可制成疫苗。与不具侵染性的流感病毒灭活疫苗相比，该病毒活疫苗的优势之一是可引起_免疫，增强免疫保护效果。3、(2018衡水中学)乙烯具有促进果实成熟的作用，ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的关键酶。转反义ACC合成酶基因番茄具有耐储存、宜运输的优点。下图为反义ACC合成酶基因表达载体的结构示意图，请据图回答。(1)提取ACC合成酶的mRNA时，宜选用成熟番茄的果实组织，原因是：_。以mRNA为模板合成DNA所需的酶是_，原料是_。(2)将图中表达载体与农杆菌菌液混合后，加入含有_的培养基中，可筛选出转化了反义ACC合成酶基因的农杆菌。将ACC合成酶基因反向接在35S后构成反义ACC合成酶基因，在检测反义ACC合成酶基因是否整合到番茄植株的染色体DNA上时，_(填“能”或“不能”)用放射性物质标记的ACC合成酶基因片段做探针进行检测，理由是_。(3)图中35S为特异启动子，推测35S应在番茄的_(器官)中启动转录过程。转录启动后，检测发现番茄果实中乙烯含量显著降低，推测反义ACC合成酶基因的作用机理可能是：_。4、基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。通过人工改造能使某种DNA病毒失去自我繁殖能力，但其DNA还能成功整合到宿主细胞染色体上，从而达到使用病毒做载体治疗某些疾病的目的。下图表示用这种病毒做载体治疗白血病的过程。请分析回答问题：(1)治疗过程用到的生物技术有_。(2)用病毒作载体，必须保证病毒核酸为_结构。人工改造这种病毒载体时，通常要加装_以及启动子和终止子，启动子的作用是：_。(3)图示基因治疗方法_(填“能”或“不能”)解决后代遗传问题。(4)鉴定目的基因是否整合到细胞染色体上的方法是采用DNA分子杂交技术，即将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用_等作标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交。5、为了提高菊花抗冻能力，研究者从其他生物中克隆出抗冻基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。（1）构建重组质粒时需要用到的工具酶为。为使抗冻基因C在菊花细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的之间。（2）若想了解C基因是否整合到菊花染色体上，检测方法是采用技术。（3）若获得的转基因植株（抗冻基因C已经整合到菊花的基因组中）抗冻能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。（4）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是（答出两点即可）。（5）借助农杆菌将重组质粒导入菊花细胞，在该过程中需添加酚类物质，目的是。抗冻基因C的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是_。（6）科研工作者可以利用PCR技术获得更多的抗冻基因C，那么利用PCR技术获取目的基因的前提是。6、我国一科研团队将小麦液泡膜Na/K逆向转运蛋白基因(TaNHX2基因)转移到水稻细胞内，获得了转基因耐盐水稻新品种。回答下列有关问题：(1)获取目的基因的方法很多。若已知TaNHX2基因序列，可以用_扩增该基因。首先根据序列设计、合成_并投入反应体系，同时，还需要放入dNTP、目的基因、Taq酶等。还可以人工合成TaNHX2基因，如图1表示人工合成的两条若干个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA。从功能看，Klenow酶是一种_酶。(2)图2是3种限制酶的识别与酶切位点示意图，构建基因表达载体的时候，经BamH 酶切割得到的目的基因可以与图3所示质粒被_酶切后的产物连接，理由是_。连接后的重组质粒_(填“能”“不能”或“不一定能”)被BamH 切割。(3)基因表达载体通过农杆菌转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其_，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(4)小麦与水稻差异很大，但却通过基因重组后，水稻能够合成小麦的蛋白质，这是因为_。1、(1)体外重组的质粒可以进入受体细胞；真核生物基因可在原核细胞中表达(2)转化外壳蛋白(或答噬菌体蛋白)细菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶2、(1)PCR多肽(或蛋白质)(2)载体总RNA(3)非天然氨基酸(Uaa)D(4)细胞3、(1)其细胞内ACC合成酶基因的mRNA含量高逆转录酶dNTP(dATP、dTTP、dGTP、dCTP)(2)卡那霉素不能番茄细胞内本来存在ACC合成酶基因，能与ACC合成酶基因探针发生分子杂交(3)果实组织反义ACC合成酶基因转录产生的mRNA可与ACC合成酶基因转录的mRNA结合，使ACC合成酶的合成量下降，导致乙烯的产生量下降4、(1)基因工程技术(转基因技术)和动物细胞培养(2)双螺旋(或双链)标记基因启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA(3)不能 (4)放射性同位素5. （1）限制性核酸内切酶和DNA连接酶（或答：限制酶和DNA连接酶）启动子、终止子（1分）（2）DNA分子杂交技术（3）目的基因的转录或翻译异常（4）目的基因无复制原点；目