洗涤剂中大肠菌群检测方法探讨与分析.doc

洗涤剂中大肠菌群检测方法探讨与分析摘要：大肠菌群是洗涤剂产品关键的卫生指标，表明产品被粪便污染的程度。本文对洗涤剂样品中大肠菌群按三种不同的检测方法进行检测，分析讨论不同检测方法对结果的影响。关键词：大肠菌群 洗涤剂 检测方法1、前言大肠菌群是一类需氧及间性厌氧菌,在37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。食品或洗涤剂中大肠菌群数的高低,表明物品被粪便污染的程度,也反映对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道的排泄物,粪便中除含有正常细菌外,也可能含有肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺氏菌等)。因此食品或者洗涤剂如被粪便污染，则有被肠道致病菌污染的可能性,即潜伏着引起人类食物中毒和流行病的威胁。当前，洗涤剂中大肠菌群的最新检验标准是食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数GB/T4789.3-2010，但洗涤剂卫生标准为食品工具、设备用洗涤剂卫生标准GB14930.1-1994，前者单位是“MPN/g(mL)” 或“CFU/g(mL)”,后者单位是“个/100g”,如果洗涤剂按GB/T4789.3-2010标准检测将无法对结果进行判定。同时根据卫生部关于规范食品中大肠菌群指标的检测工作的公告（2009年 第16号）规定，现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定GB/T4789.3-2003进行检测。另外考虑到洗涤剂本身是一种化学产品，实验过程中可能产生化学反应而影响发酵管中产气的结果判断，我们对一组大肠菌群超标的抽检样品分别用三种不同检测方法进行验证并分析讨论，其中后两种方法是平板计数法避免了产酸产气对结果的影响。三种检测方法分别是：大肠菌群MPN计数法GB/T4789.3-2003、大肠菌群PetrifilmTM测试片法GB/T4789.3-2008和大肠菌群平板计数法GB/T4789.3-2010。2、 实验部分2.1实验设备及材料恒温培养箱 恒温水浴锅 天平 振荡器 菌落计数器 显微镜 无菌吸管（1 mL） 无菌锥形瓶 无菌培养皿 灭菌试管 高压灭菌锅乳糖胆盐发酵管 伊红美蓝琼脂平板 乳糖发酵管结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA） 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤 革兰氏染色液 无菌生理盐水0.85% 无菌1 mol/L NaOH 无菌1 mol/L HCl 大肠菌群PetrifilmTM测试片2.2检测样品抽检某公司洗涤剂样品2.3检测方法样品的稀释：称取25 g 样品,放入盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，用振荡器充分混匀，制成1:10 的样品匀液。用1 mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液面），使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按上述操作，依次制成1:1000,1:10000的样品匀液2.3.1大肠菌群MPN计数法：检测步骤按GB/T4789.3-2003标准中大肠菌群MPN计数法进行。2.3.2大肠菌群PetrifilmTM测试片法：检测步骤按GB/T4789.3-2008标准中大肠菌群PetrifilmTM测试片法进行。2.3.3大肠菌群平板计数法：检测步骤按GB/T4789.3-2010标准中大肠菌群平板计数法进行。3、 结果与讨论3.1检测结果3.1.1大肠菌群（MPN计数法）接种管数3333接种量（相当于原样品量）0.1g0.01g0.0010.0001乳糖发酵实验阳性管数2330分离培养和革兰氏染色233/证实试验阳性管数233/根据证实实验阳性管数，查MPN表，大肠菌群结果：5.3103个/100g3.1.2大肠菌群（PetrifilmTM测试片法）稀释度1：1001：10001：10000空白接种量1mL1mL1mL/菌落数不计其数不计其数360388263000平均菌落数/280大肠菌群检测结果：2.8105CFU/g3.1.3大肠菌群（平板计数法）稀释度1：1001：10001：10000空白接种量1mL1mL1mL/菌落数不计其数不计其数318359182000平均菌落数/190证实试验大肠杆菌阳性管数/8/大肠菌群检测结果：19（8/10）104= 1.5105CFU/g3.2讨论与分析3.2.1大肠菌群三种检测方法的结果分别为5.3103个/100g、2.8105CFU/g、1.5105CFU/g，三种检测方法的结果都表明该洗涤剂产品大肠菌群严重超标，避免了洗涤剂中可能存在的化学反应造成发酵管产气而对结果判定的影响.其中三种检测方法的结果存在一定相关性，“MPN计数法”与“PetrifilmTM测试片法”和“平板计数法”单位不一致无法直接比较，“PetrifilmTM测试片法”和“平板计数法”两种方法检测的结果在一个数量级上。3.22分析此样品中大肠菌群超标原因，可能是洗涤剂生产用水受到粪便污染，生产工艺环节没有得到有效控制，产品受到严重污染。因此洗涤剂生产者要严格检测生产用水，保证生产用水不能受到粪便污染，对生产用水以及生产环境采取有效杀菌方法，应从进入配料罐的管道口处定期取样测定，以考察各原料储罐及输送管道的情况。若有发现微生物超标，应及时检查原因并进行相关的分析改进。同时产品要加品质好的防腐剂，防腐剂具体的用量要结合需要的保质期、防腐剂的含量、水质的干净程度、生产工具与包装物的清洁程度、四季气候的变化等各种因素来综合确定。3.2.3洗涤剂卫生标准为食品工具、设备用洗涤剂卫生标准GB14930.1-1994 ，而大肠菌群最新的检测标准是食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数GB/T4789.3-2010，由于结果单位表示的不同以及根据卫生部关于规范食品中大肠菌群指标的检测工作的公告（2009年 第16号）规定，洗涤剂中大肠菌群检测只能用GB/T4789.3-2003 ，GB/T4789.3-2010与GB/T4789.3-2003相比，最主要的差别为初发酵试剂不同。GB/T4789.3-2010为月桂基硫酸盐胰蛋白胨，GB/T4789.3-2003为乳糖胆盐。月桂基与乳糖胆盐相比，稳定性好、可抑制革兰氏阳性菌增长、对损伤的大肠菌群有修复作用。GB/T4789.3-2010提高了灵敏度和检测率。而GB14930.1-1994如今还是现行的，与最新的大肠菌