实验八 花粉活力及花粉管伸长的测定.doc

时间就是金钱，效率就是生命！实验八 花粉活力及花粉管伸长的测定实验目的通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。熟悉测定花粉活力的几种方法。 碘-碘化钾（I-KI）染色测定法实验原理禾谷类植物花粉成熟时积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。器材与试剂1.实验仪器 显微镜，镊子，恒温箱，载玻片，盖玻片2.实验试剂 I-KI溶液（取KI 2g溶于510mL蒸馏水中，然后加入1 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL。（贮于棕色瓶中备用）凡被染成蓝色的为发育好、活力强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。 过氧化物酶测定法实验原理具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉的活性强弱。器材与试剂1实验仪器 显微镜，载玻片，盖玻片，镊子2实验试剂 0.5%联苯胺将0.5g联苯胺溶于100mL50%乙醇中（有毒，注意安全），0.5%-萘酚（将0.5g -萘酚溶于100mL50%乙醇中）， 0.25%碳酸钠（将0.25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中），实验前将上述三种溶液各取10mL混合均匀成试剂，0.3%过氧化氢。3、实验材料 花粉实验步骤1干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上玻片。30下经10min后在低倍显微镜下观察。如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。2.观察23个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。 氯化三苯基四氮唑法（TTC）实验原理 见实验7种子活力的快速测定中的TTC法。器材与试剂1.实验仪器 显微镜，镊子，载玻片，盖玻片，2.实验试剂 0.5%TTC溶液（参阅实验7-1）实验步骤1.取少数花粉于载玻片上，加12滴TTC溶液，盖上盖玻片。2.将制片于35恒温箱中放置15min。然后置于低倍显微镜下观察。凡被染为红色的活力强，淡红的次之，无色者为没有活力的花粉或不育花粉。3.观察23个制片，每片取5个视野，统计100粒，然后计算花粉的活力百分率。注意事项注意需将花粉完全浸于药液中。实验作业1.用3种方法统计不同植物花粉的发芽率。2.试比较3种方法，同一花粉的发芽率是否相同，分析其原因。 IV 花粉管生长的测定实验目的熟悉测定花粉管生长的方法及影响生长的主要因素。实验原理 成熟花粉具有较强的生活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长。花粉的萌发和生长情况与植物种类、花粉成熟度、气候和培养条件等有关。实验中通过改变培养条件，利用正交实验法测定花粉管长度，可以找出促进花粉生长的最佳培养条件。器材与试剂 1.实验仪器 恒温箱，显微镜，目镜测微尺，物镜测微尺，花粉培养小室，镊子，载玻片，盖玻片。 2.实验试剂 培养基（内含琼脂0.5%，硼酸、蔗糖浓度按表7-2进行配制）附 培养基的配制 在配制培养基时，琼脂浓度不变，硼酸、蔗糖的浓度改变，pH和培养温度也改变，用以观察何种组合更适于花粉萌发和生长。若培养基不是当天使用，则需要高压灭菌。（1） 确定硼酸、蔗糖、温度、pH 4种因子的水平值。实验中对每种因子选择低、中、高3种水平（以1，2，3表示，见表7-2）。（2） 按表7-2配制培养基。 3、实验材料 刚开放或将要开放的成熟花朵表1:因子水平表因子水平A 蔗糖含量/%B 硼酸浓度/（g/mL）C 温度/D pH1510236。021025286。531550337。0表2:培养基配制方案实验组号A 蔗糖含量/%B 硼酸浓度/（g/mLC 温度/D pH15（1）10（1）23（1）6.0（1）25（1）25（2）28（2）6.0（2）35（1）50（3）33（3）7.0（3）410（2）10（1）28（2）7.0（3）510（2）25（1）33（3）6.0（1）610（2）50（3）23（1）6.5（2）715（3）10（1）33（3）6.5（2）815（3）25（2）23（1）7.0（3）915（3）50（3）28（2）6.0（1）注：括号内数字表示因子水平实验步骤1.采取刚开放或将要开放的成熟花朵（取自丝瓜、南瓜、烟草、凤仙花、金莲、白花三叶草及葫芦科的其他植物。酷热天气中午前后不能采，最好现采现用）。2.制备培养小室 在干洁的载玻片上放一只直径15mm，高5mm的玻璃环，环口需用金刚砂磨平，外面涂少许凡士林（或石蜡）使之固定和防止水分蒸发，环内放2滴水3.在干洁盖玻片中央滴1滴培养基溶液，然后将花粉粒少许散放于培养基上。4.将盖玻片放于培养室的玻璃环口上，有花粉粒的一面朝下（必要时在玻璃环口上涂上少许凡士林，以防水分蒸发和盖玻片移动。5.在培养4560min后，即用 0.1mol/L NaOH（含0.4mol/L蔗糖）终止生长，置于低倍显微镜下观测，并用测微尺计算花粉管长度。每种处理观测50个花粉管长度，然后求其平均值，将结果记入表中，并