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文档简介

技能训练常用培养基的制备 熟悉培养基制备的基本程序会制备常用的培养基 实训目标 高压蒸气灭菌器 电热干燥箱 电炉 天平 量筒 漏斗 试管 培养皿 烧杯 三角烧瓶 等 仪器材料 方法步骤 一 肉汤培养基 二 琼脂培养基 三 半固体培养基 四 血液琼脂培养基 制备培养基方法步骤 计算称量溶化调PH分装灭菌无菌检验备用 一 肉汤培养基 二 琼脂培养基 三 半固体培养基 四 血液琼脂培养基 一 肉汤培养基 1 成分牛肉膏3 5g 蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml 2 制法将牛肉膏 蛋白胨 氯化钠加蒸馏水后 加热溶解 矫正pH至7 4 7 6 过滤分装 置高压蒸气灭菌器内 121 3 灭菌20min即成 3 用途可供一般细菌生长 同时也是制作一般培养基的基础原料 供营养要求较高的细菌分离培养 亦可供溶血性的观察和保存菌种 二 固体琼脂培养基1 计算 1000ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31 3g 再根据培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量 营养琼脂粉的量 31 3 15 n 1000 g 其中 15代表一个平板需要营养琼脂约15ml n代表要做的培养基平板的数量 2 称量 用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量 用量筒量出相应的蒸馏水的量 要尽量准确 3 溶化 将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中 于电炉上加热溶化 边加热边搅拌 沸腾时立即从电炉上拿下 等泡沫消失后再放在电炉上加热 注意不能让琼脂溢出 煮沸2 3次 4 分装 倒平板或倒试管 若做平板培养基应倒于培养皿中 每板约15ml左右 以刚好覆盖平皿底为易 若做斜面培养基应倒入试管中 量为试管的1 3 包扎 加塞后 试管通常每7支一起 包上一层牛皮纸或两层报纸 用线绳扎紧 三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎 以活结形式扎紧 以便使用时容易解开 用记号笔注明培养基名称 配制日期 配制人或实验组 灭菌时包牛皮纸 5 灭菌 用高压灭菌器灭菌 包扎好 直立放入内筒中 在121 3 灭菌20 30min 灭菌完毕后 将平板培养基拿出平放于桌面 凝固前勿动 将试管培养基摆成斜面 凝固前勿动 6 无菌检验 随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时 若无菌生长则为合格 7 备用 将合格的培养基放入冰箱 在0 4 中保存备用 三 半固体培养基 肉汤培养基中加入0 3 0 5 琼脂粉制成 用于菌种的保存或观察细菌的运动性 四 血液琼脂培养基 将灭菌的营养琼脂冷至45 50 以无菌操作 加入5 10 的无菌血液
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