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细菌性食物中毒的实验室支持 疾控中心2011年8月 食物中毒的概念 定义 国家标准 GBl4938 中界定了食物中毒 指摄入了含有生物性 化学性有毒有害物质的食品或者把有毒有害物质当作食品摄入后出现的非传染性 不属于传染病 的急性 亚急性疾病 即食物中毒指通过饮料或食物及其盛具 容器 包装材料进入人体的某种致病性微生物及其毒素 有害有毒的化学物质 包括有毒动植物 等引起的 多数是以急性胃肠炎症状为主要特征的一群疾病 但不包括已知的传染病 寄生虫病 人畜共患性疾病 食物过敏和暴饮暴食所引起的急性胃肠炎等食源性疾病 食物中毒的特点 食物中毒常呈集体性爆发 其种类很多 病因也很复杂 一般具有下列共同特点 潜伏期短 在短时间内可能有很多人同时发病 有相似的临床表现 病人都有大致相同的临床表现 与饮食有关 凡进食某种有毒食品的人大都发病 没有进食该种有毒食品的人不发病 发病和食物有明显关系 一旦停止食用这种有毒食品 发病立即停止 发病率高 爆发性 人与人不传染 一般没有传染病流行时的余波或拖尾现象 5 发病季节性强 一般多发于4 10月份 6 9月进入高峰期 食物中毒分类 一般按病原物质 将食物中毒分为五类 细菌性食物中毒 是指由于食入被病原菌或其有毒代谢产物污染的食物后 所引起的以急性肠胃炎为主要中毒症状的疾病 真菌性食物中毒 指食入被真菌及其毒素污染的食物而引起的食物中毒 动物性食物中毒 指摄入动物性有毒食品引起的食物中毒 植物性食物中毒 摄入植物性中毒食品引起的食物中毒 化学性食物中毒 摄入化学性有毒食品引起的食物中毒 细菌性食物中毒 细菌性食物中毒 是指人们吃了大量活菌或活菌产的毒素养污染的食品所引起的种毒现象 细菌性食物中毒按发病机理又分为感染型食物中毒 毒素型食物中毒和混合型食物中毒 感染型食物中毒 指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物 包括病原菌和条件致病菌 如沙 志 金 变形 蜡样 副溶 耶尔森 产气荚膜梭菌 枯草杆菌等 这种含有大量活菌 一般在107 g以上 的食物被摄入机体后 引起一系列消化道症状的现象 称为感染型食物中毒 此类种毒是由细菌本身引起 毒素型食物中毒 食物被能产生毒素的微生物如葡萄球菌 肉毒梭菌 产气荚膜梭菌等污染 并在适宜的条件下生长繁殖 产生了某种毒素 这种毒素同污染的微生物一起或单独随食物被摄入体内 所引起的一系列的中毒现象 称为毒素型食物中毒 混合型食物中毒 有的细菌性食物中毒 有感染型食物中毒的特征 又具有毒素型食物中毒的特征 称为混合型食物中毒 如产气荚膜梭菌 蜡样芽胞杆菌等引起的食物中毒 这种食物中毒在检验时 应得视毒素养的检测 样品采集 及时 准确 有代表性地采集食源性疾病相关样本 是保证实验室检验质量的前提 对食源性疾病病因的明确诊断 病人的急救治疗 查明有毒食品来源及毒性具有重要意义 食物中毒标本的采集原则 1 典型性原则食物中毒标本的采集不同于卫生评价采样 应根据可疑食物的性质采集可能含毒最多的标本 2 适时性原则为了防止可疑食物丢失和被检物质组分发生变化 保证得到正确结论必须尽快采样送检 流调人员到达现场后应及时采样送检 3 适量性原则由于引起食物中毒的毒物种类繁多 有时需实验室检索的项目很多 这要求有一定的样本量 在可能的情况下尽量多采 采样前的准备 1 人员的准备 一般要指派2名以上专业人员赶赴现场 必要时还需要检验人员和其他部门有关人员协作前往 交通工具准备 在接到疑似食物中毒报告后 在城区1小时 郊区2小时内到达现场 采样前的准备 2 调查采样箱准备 属常用的物品 应提前准备 定期检查 及时补充 常备以下物品 1 采样工具 注射器 肛拭子 消毒棉签 消毒纱布 调匙 勺子 夹子 镊子 剪刀 酒精灯 标号用品 75 酒精 其他消毒灭菌器具 吸管 火柴等 2 样品容器 灭菌塑料袋 广口瓶 灭菌试管 灭菌粪便盒 样品冷藏设施等 采样前的准备 3 现场快速检验 测量设备 食物中毒快速检样箱 食品温度测试计 消毒剂浓度检测试纸等 调查用表 食物中毒事故个案调查登记表 调查笔录 样品采集记录表 样品送检单 调查结果汇总表 空白纸等 参考资料 食物中毒诊断标准 有关卫生部规章 参考书籍等 其它有关物品 如便携式电脑 手机或对讲机等通讯设施以及用于保存运送培养基的冰箱 冰块等 取证工具 照相机 摄像机等 采样用容器和试剂要求 1 采样容器应采用洁净 无色 无毒的聚乙烯塑料或硬质玻璃 又称硼硅玻璃 样品瓶必须专瓶专用 切不可用实验室装过试剂的瓶作采样瓶 2 用于微生物检验容器基本要求是选耐高温 无毒 耐用材料制成 容器包装好后可防渗漏 能承受空中或地面运送过程中可能发生的温度和压力变化 所有采样用具 容器需严格灭菌 并且不能存放过长时间 防止污染影响检验结果 采样用的生理盐水 运送培养基及有关试剂等都应该满足新鲜 无菌的要求 同时应符合采样所需要的试剂量 如运送粪便的培养基为5ml 管为宜 细菌性食物中毒标本的采集 1 剩余食物 采集残余食物时应尽量避免采集不相干的标本 残余食物用灭菌工具采取 置于灭菌容器内 如无剩余食物 可用灭菌棉拭在可疑食物容器内涂擦 置于装有少量生理盐水试管内 体积较大的肉及鱼等 应将表面烧灼灭菌后割取内部肌肉 置于灭菌容器内 可凝的罐头可直接送检 如仅剩余空盒 可将空盒送检 炊事用具 如锅 刀 抹布 砧板等 可用棉试大用具上涂擦 置于装有少量生理盐水的试管中 如砧板已洗过 可用刀用力刮取表面层木屑 置于灭菌容器中 细菌性食物中毒标本的采集 2 粪便 肛拭 粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集 同时应采集新鲜粪便 选取有脓血 粘液部分3 5克 水样便取含絮状物的2 5ml 盛于无菌容器中及时送检 若无法获得粪便时 可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门4 5cm深处 小儿2 3cm 轻轻转动一圈 擦取直肠表面的黏液后取出 盛入运送培养基或保存液中送检 注意为保证多个检验项目的开展 同一病人应至少采集2支肛拭 细菌性食物中毒标本的采集 3 呕吐物 直接放入无菌容器中及时送检咽拭样品 采集时应将棉签檫拭咽喉及扁桃体红肿处 特别是白膜处 然后将棉签插入4 5ml生理盐水中 尾部弃去血液 采集患者急性发病期 3天内 和恢复期 2周左右 各3ml全血分离血清送检 检验项目 霍乱弧菌135 副溶血弧菌及其它致病性弧菌P131 金黄色葡萄球菌P133 蜡样芽胞杆菌P134 沙门菌P126 变形杆菌 致泻性大肠埃希菌P128 空肠弯曲菌P130 小肠结肠耶尔森菌P131 志贺菌P127 溶血性链球菌及单核细胞增生李斯特菌P132等引起的细菌性食物中毒样品检验 检验宗旨 竭尽全力尽快找到病原体快速 准确可与传统方法不一定完全相同 检验程序 样品采集 初步检验 活菌数 直接镜检 涂片 染色 镜检 分离培养 包括增菌培养和直接平板培养 初筛试验 纯培养 全面鉴定 生化试验 血清分型 噬菌体试验等 报告 直接涂片染色镜检 观察存在于检品中特种形态的细菌如霍乱弧菌 弯曲菌 球菌等 为进一步的检验提供有用的信息 检样的处理 病源检样因含较多病原菌而一般无须做预增菌处理 但若病源检样为服过抗生素后采集的检样应按检验项目要求而进行预增菌处理以保护和放大目的病原菌直接插入2ml预增管37 预增菌4 6h 直接培养 将无须做增菌处理的病源检样按检验项目要求直接接种于各相应培养基 增菌培养及接种 将预增菌处理后的服过抗生素后采集的病源检样按检验项目要求接种各相应增菌液培养 保证特定的微生物在其中繁殖 增菌培养后接种于各相应培养基 初筛试验 克氏双糖 三糖铁 肠道综合发酵管1 管2PCR 聚合酶链式反应 VIDAS 酶联免疫试验 酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合 此种结合不会改变抗体的免疫学特性 也不影响酶的生物学活性 可疑菌的鉴定 全面生化试验噬菌体试验血清分型毒素或毒素基因测试 毒素或毒素基因测试 霍乱弧菌肠毒素 葡萄球菌肠毒素 EIEC侵袭毒素 ETEC肠毒素按国标方法进行动物试验或酶联免疫试验 VIDAS等 毒素基因测试 霍乱弧菌肠毒素 葡萄球菌肠毒素 致泻性大肠埃希菌的所有毒力基因均可用PCR检测 特别是对致泻性大肠埃希菌的定论应以毒素或毒素基因为准 患者血清的试验 疑似伤寒或副伤寒的患者应取发病一周的血清做肥达氏反应 用作辅助诊断将患者急性期和恢复期的血清做凝集效价的对比 4倍增长可确诊 检验结果的判定 应以找到病原体或其毒素为最终结论 在此之前所有的快速检验方法如PCR VIDAS等得到的结果仅供参考应注意非病源检样与病源检样检出的病原体的统一性 检验结果的判定原则 1 多数患者样品中检出的致病意义明确的细菌在种类 生化和 或血清型 毒素型均一致时 可报告为细菌性食物中毒的病原体 检验结果的判定原则 2 非病源检样与病源检样检出占绝对优势但通常致病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌 溶藻弧菌等 且其在种类 生化和 或血清型均一致 同时本次细菌性食物中毒事件中非患者对照标本中未检出该菌时 应做该菌的毒素 毒素基因或动物试验 阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事件的病原体 检验结果的判定原则 3 样品中检出的生化 血清符合致泻性大肠艾希菌 金黄色葡萄球菌 一定要以毒素 毒素基因测试阳性为最终结论报告蜡样芽胞杆菌在非病源检样中须达到105cfu g ml 以上者才有报告价值 细菌检验重要筛检试验 氧化酶试验 1 盐酸二甲基对苯二胺溶液 再加 萘酚溶液一滴 接触酶试验 过氧化氢酶试验 氧化酶试验 用于分辨G 杆菌中肠杆菌科及弧菌科两类细菌革兰阴性杆菌阳性反应弧菌科 呈现粉红色 再加呈现鲜蓝色 阴性反应肠杆菌科 接触酶试验 用于分辨葡萄球菌及链球菌革兰阳性球菌阳性反应葡萄球菌 产生气泡 阴性反应链球菌 沙门氏菌检测 沙门氏菌食物中毒主要特征 来源 生食和烹饪不完全的食物 主要是肉类蛋品 症状 恶心呕吐 胃痛 腹泻 出冷汗 发烧 38 40 较重者可出现烦躁不安 昏迷 谵语 抽搐等中枢神经系统症状 也可以出现尿少 尿闭 呼吸困难等症状 同时还出现面色苍白 口唇青紫 四肢发凉 血压下降等周围循环衰竭症状 甚至休克 如不及时救治 最后可因循环衰竭而死亡 潜伏期一般为12 36h 短者6h 长者48 72h 概况 1880年发现 至今已有2600种有动力 除鸡 雏沙门菌 大多产H2S 除副甲伤寒沙门菌等 产酸大多产气 除伤寒 鸡 雏沙门菌 靛基质 蔗糖 乳糖 甘露醇 符合肠杆菌科特征 葡萄糖 硝酸盐还原 氧化酶 沙门氏菌检验流程 沙门氏菌菌落形态 BS琼脂 培养40 48h 菌落为黑色有金属光泽 棕褐色或灰色 光滑 边缘整齐 圆形 菌落周围培养基可呈黑色或棕色 有些菌株形态成灰绿色菌落 周围培养基不变 HE琼脂 蓝绿色或蓝色 透明 光滑 湿润 边缘整齐 圆形 多数菌落中心黑色或几乎全黑色 有些菌株为黄色 中心黑色或几乎全黑色 XLD琼脂 菌落呈粉红色 带或不带黑色中心 有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心 或呈现全部黑色的菌落 有些菌株为黄色 带或不带黑色中心 沙门氏菌菌落形态 BS 沙门氏菌菌落形态 XLD 沙门氏菌菌落形态 HE 主要生化试验 五项生化试验H2S靛基质PH7 2尿素酶KCN赖氨酸脱羧酶 主要生化试验 TSI培养基上培养情况典型沙门氏菌 表面 粉红色 底层 黄色 HS 底层有黑色 有动力表面 黄色 HS 的可排除其它情况均有可能是沙门氏菌 主要生化试验 肠道综合发酵管1 甘露醇 上斜面 葡萄糖 下直面 产气肠道综合发酵管2 蔗糖 动力 H2S 靛基质 主要生化试验 典型五项生化试验H2S 靛基质 PH7 2尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶 血清凝集 1 A F多价 OH1H2 血清凝集 2 若生化反应符合 而血清A F多价 考虑 Vi抗原 伤寒 副丙伤寒沙门菌 遮蔽 煮沸后再凝亚利桑那菌 迟缓发酵乳糖 延长Mac平板培养时间至4天可能是A F以外的沙门菌极可能是血清交叉的柠檬酸杆菌 报告方式 A群甲型副伤寒沙门菌1 2 12 aB群乙型副伤寒沙门菌1 4 5 12 b 1 2鼠伤寒沙门氏菌1 4 5 12 i 1 2C群丙型副伤寒沙门菌6 7 vi c 1 5猪霍乱沙门菌6 7 c 1 5D群肠炎沙门菌1 9 12 g m伤寒沙门菌1 9 vi d鸡雏沙门菌1 9 12 志贺氏菌检测 志贺氏菌食物中毒主要特征 来源 被污染的冷盘菜 凉拌菜等 症状 肠炎型 腹痛腹泻为主 水样便 痢疾型 腹痛 腹部痉挛 恶心 发热 里急后重 粘血便 潜伏期 1 3天 平均2天 概况 至今已有4群 A B C D 32种 A 痢疾志贺菌10个血清型 B 福氏志贺菌6个血清型 X Y变种 C 鲍氏志贺菌15个血清型 D 宋内1个血清型 S R两相 无动力乳糖 除宋内迟缓发酵 不产H2S产酸不产气 除F6产极少量气泡 靛基质大多 宋内 蔗糖 甘露醇 痢疾志贺菌为 符合肠杆菌科特征 葡萄糖 硝酸盐还原 氧化酶 志贺氏菌检验流程 志贺氏菌菌落形态 SS琼脂 菌落呈无色透明或半透明 光滑 湿润 边缘整齐 圆形中等大小菌落 宋内志贺菌能延缓发酵乳糖 培养24h后可以出现红色菌落 宋内志贺菌常形成扁平 粗糙的菌落 MAC琼脂 菌落呈灰白色透明或半透明菌落 光滑 湿润 边缘整齐 圆形菌落 HE琼脂 菌落呈淡蓝绿色或无色半透明 光滑 湿润 边缘整齐 圆形菌落 EMB琼脂 菌落呈灰白色半透明 光滑 湿润 边缘整齐 圆形菌落 志贺氏菌菌落形态 志贺氏菌菌落形态 志贺氏菌菌落形态 志贺氏菌菌落形态 初步生化鉴定 从平板上挑取3 4个可疑菌落 接种TSI和葡萄糖半固体培养基各一管 36 培养18 24h 初步生化鉴定 TSI生长结果 现象 斜面产碱仍为粉红色或红色 底层产酸不产气 变黄色 不产硫化氢 不产黑色 半固体培养基 沿线生长 无动力 初步生化鉴定 可弃去地培养物 在TSI表面呈蔓延生长的 18 24h内发酵乳糖 庶糖的 不分解葡萄糖 只在半固体培养基表面生长的 产气的 有动力的 产硫化氢的 血清凝集 先用四种志贺氏菌多价血清检查 如果由于K抗原的存而不凝集 应将菌液煮沸后再检查 如果凝集 再用A1 A2 B多价和D群血清分别试验 如是B群福氏志贺菌凝集 则用群和型因子血清分别检查 四种多价血清不凝集者 可用鲍氏多价1 2 3分别检查 并进一步有1 15各型因子血清检查 如鲍氏多价不凝集 可用痢疾志贺菌3 12多价血清及各型因子血清检查 血清凝集 若生化反应符合 而血清四种多价 考虑 A C群志贺菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽 煮沸后再凝可能是EIEC 再做大生化以鉴别宋内的R相菌 用R相血清凝集可能是蜂窝哈夫尼亚菌 做大生化以鉴别可能是类志贺邻单胞菌 观察动力 氧化酶 报告方式 痢疾志贺菌1型福氏志贺菌2a型福氏志贺菌X变种鲍氏志贺菌13型宋内志贺菌S相 金黄色葡萄球菌 金葡菌食物中毒主要特征 来源 主要存在于人们的皮肤 鼻 喉 耳等部位 进食了被污染的肉类 乳品 定粉制品 症状 恶心 呕吐 频繁而剧烈 腹痛 腹泻 由于剧烈呕吐和腹泻 可引起大量失水而发生外周循环衰竭和虚脱 潜伏期 一般30min 6h 最短为15min左右 很少有超过8h的 概况 典型的金黄色葡萄球菌为球型 直径0 8 m左右 显微镜下排列成葡萄串状 金黄色葡萄球菌无芽胞 鞭毛 大多数无荚膜 革兰氏染色阳性 金黄色葡萄球菌营养要求不高 在普通培养基上生长良好 需氧或兼性厌氧 最适生长温度37 C 最适生长pH7 4 干燥环境下可存活数周 平板上菌落厚 有光泽 圆形凸起 直径1 2mm 血平板菌落周围形成透明的溶血环 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性 可在10 15 NaCl肉汤中生长 可分解葡萄糖 麦芽糖 乳糖 蔗糖 产酸不产气 甲基红反应阳性 VP反应弱阳性 许多菌株可分解精氨酸 水解尿素 还原硝酸盐 液化明胶 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力 对磺胺类药物敏感性低 但对青霉素 红霉素等高度敏感 对碱性染料敏感 十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长 金黄色葡萄球菌检验流程 金黄色葡萄球菌菌落形态 B P琼脂 菌落圆形 凸起 湿润 直径2 3mm 颜色呈灰色到黑色 边缘为淡色 周围为一混浊带 在其外层有一透明圈 接种针接触菌落有似奶油至树胶样硬度 偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落 但无混浊带及透明圈 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些 外观可能粗糙并干燥 血平板 形成较菌落较大 圆形 光滑凸起 湿润 金黄色 有时为白色 菌落周围可见完全透明溶血圈 金黄色葡萄球菌菌落形态 血浆凝固酶实验 可疑菌落1个 计数时取5个菌落分别接种 5mLBHI和营养琼脂斜面 36 培养24h 0 2 0 3mLBHI培养物 0 5mL兔血浆 36 水浴箱或培养箱 每半小时观察一次 观察6小时 凝固为阳性 反之为阴性 同时以血浆凝固酶阳性和阴性葡萄球菌株的肉汤培养物作对照 副溶血性弧菌 副溶血性弧菌食物中毒主要特征 来源 是进食含有该菌的食物所致 主要来自海产品 如墨鱼 海鱼 海虾 海蟹 海蜇 以及含盐分较高的腌制食品 如咸菜 腌肉等 症状 主要的症状为腹痛 优势腹痛在脐部附近剧烈 腹痛是本病的特点 多为阵发性绞痛 并有腹泻 恶心 呕吐 畏寒发热 大便似水样 便中混有黏液或脓血 潜伏期 3 24h 一般10小时左右 概况 副溶血弧菌系弧菌科弧菌属 革兰染色阴性 兼性厌氧菌 为多形态杆菌或稍弯曲弧菌 本菌嗜盐畏酸 最适宜的培养基 温度为30 37 含盐2 5 3 若盐浓度低于0 5 则不生长 pH值为8 0 8 5 本菌对酸较敏感 当pH6以下即不能生长 在普通食醋中l一3min即死亡 在固体培养基上菌落常隆起 圆形 表面光滑 湿润 在3 一3 5 含盐水中繁殖迅速 每8 9min为一周期 对高温抵抗力小 50 20min 65 5min或80 1min即可被杀死 本菌对常用消毒剂抵抗力很弱 可被低浓度的酚和煤酚皂溶液杀灭 副溶血性弧菌检验流程 副溶血性弧菌菌落形态 TCBS琼脂 呈圆形 半透明 表面光滑的绿色菌落 接种环轻触 有类似口香糖的质感 直径2 3mm 涂片镜检 革兰氏阴性 呈棒状 弧状 卵圆状等多形态 无芽胞 有鞭毛 副溶血性弧菌菌落特征 副溶血性弧菌菌落特征 霍乱 副弧 随培养时间的延长霍乱的黄色菌落逐渐变蓝 鉴定 生化性状 葡萄糖 分解葡萄糖产气 甘露醇 H2S 氧化酶 动力 蔗糖 乳糖 赖氨酸脱羧酶 V P ONPG 嗜盐试验 10 氯化钠胰胨水不生长或微弱生长 7 氯化钠胰胨水生长旺盛 变形杆菌 变形杆菌食物中毒主要特征 来源 生 熟食品的工具 容器未严格分开使用 使制成的熟食品受到重复污染 受污染的熟食品在较高的温度下存放较长的时间 细菌大量繁殖 食用前不再回锅加热或加热不彻底 食后引起中毒症状 主要表现为腹痛 多呈脐周围部的剧烈绞痛或刀割样疼痛 腹泻 恶心 呕吐 发冷发热 38 39 头晕 头痛 潜伏期 一般为5 18h 短者1 3h 长者60h 概况 变形杆菌属 Proteus 包括 普通变形杆菌 P vulgaris 奇异变形杆菌 P mirabilis 产粘变形杆菌 P myxofaciens 变形杆菌为革兰氏阴性杆菌 两端钝圆 有明显的多形性 无芽孢无荚膜 有周身鞭毛 运动活泼 为需氧或兼性厌氧 对营养要求不高 生长温度为10 43 不耐热 60 5 30min皆可杀死 变形杆菌可产生肠毒素 此肠毒素为蛋白质和碳水化合物的复合物 具抗原性 变形杆菌检验流程 变形杆菌菌落形态 SS琼脂 形成单个菌落 菌落圆形 扁薄透明或半透明 有的菌落边缘呈扩散状 对光观察 菌落周围淡蓝色中心稍厚 有黏性 打开平皿时有臭味 EMB琼脂 无色透明菌落 普通变形杆菌和奇异变形杆菌在伊红美蓝平板上可呈现片状蔓延生长 变形杆菌菌落特征 普平 变形杆菌菌落特征 SS 变形杆菌菌落特征 EMB 鉴定 生化实验 乳糖反应阴性 TSI斜面红色 葡萄糖产酸 TSI底层黄色 产气或只产酸不产气 硫化氢阳性或阴性 尿素阳性 苯丙氨酸阳性者进行系统生化鉴定 判定种属或群 血清学实验 变形杆菌食物中毒需对来自可疑食物与患者的菌株进行血清型别鉴定 以判定其同源性 方法 将待试菌株分别点种在普通营养琼脂平板的两端 待两侧的菌株蔓延生长到平板中间 菌苔完全融合 说明两株细菌没有拮抗现象 蜡样芽孢杆菌 蜡样芽孢杆菌食物中毒主要特征 来源 米食 乳制品 畜禽肉类制品 等 剩饭 特别是大米饭 其次小米饭 高粱米饭等剩饭 除米饭有时微有发粘 入口不爽或稍带异味外 大多数食品的感官性状正常 症状 呕吐型 主要表现为恶心 呕吐 腹痛 腹泻 此外 头昏 四肢无力 口干 寒战 结膜充血等症亦有发生 该型主要是由剩米饭或炒饭引起的 该菌易在米饭中繁殖并产生耐热性肠毒素 与葡萄球菌食物中毒在潜伏期 中毒表现方面非常相似 易混淆 腹泻型 主要表现有腹泻 腹痛 水样便 一般无发热 可有轻度恶心 但呕吐罕见 病程稍长 16 136h 主要是蜡样芽孢杆菌在食品中产生不耐热肠毒素所致 与产气荚膜梭菌食物中毒相似 应注意鉴别潜伏期 呕吐型 潜伏期一般1 3h 短者0 5h 长者5h 腹泻型 潜伏期长 一般10 12h 短者6h 长者16h 概况 革兰氏阳性 能形成芽孢 需氧或兼性厌氧大杆菌 芽孢不大于菌体宽度 位于中央或稍偏一端 无荚膜 有周身鞭毛 生长温度范围是10 50 最适生长温度为28 35 10 以下不能繁殖 繁殖体较耐热 加热100 经20min被杀死 芽孢能耐受100 30min 干热170 经60min才能杀死 生长的pH值范围为4 9 9 3 蜡样芽孢杆菌检验流程 蜡样芽孢杆菌菌落形态 MYP琼脂 典型菌落为灰白色至微粉红色 不发酵甘露醇 周围有白色至淡粉红色沉淀环 产生卵磷脂酶 营养琼脂 典型菌落在为灰白色 偶有黄绿色 不透明 表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状 边缘常呈扩展状 直径为4mm 10mm 革兰染色菌体形态 革兰氏阳性大杆菌 宽1 m或以上 芽胞呈圆形 不突出菌体 多位于中央或稍偏于一端 蜡样芽孢杆菌菌落形态特征 蜡样芽孢杆菌在甘露醇卵黄多粘菌素琼脂 MYP 上 蜡样芽胞杆菌菌落形态特征 蜡样芽胞杆菌在营养琼脂平板上 蜡样芽孢杆菌菌落形态特征 琼脂平板上蜡样芽胞杆菌菌落为浅灰色 不透明 似白色毛玻璃状 有草绿色溶血环或完全溶血环 苏云金芽胞杆菌和蕈状芽胞杆菌呈现弱的溶血现象 而多数炭疽芽胞杆菌为不溶血 巨大芽胞杆菌为不溶血 蜡样芽孢杆菌 染色形态 鉴定 形态观察 革兰氏阳性大杆菌 宽度为1 m或1 m以上 芽胞呈卵圆形 不突出菌体 多位于菌体中央或稍偏于一端 培养特性 肉汤中生长混浊 常微有菌膜或壁环 振摇易乳化 在普通琼脂平板上生成的菌落不透明 表面粗糙 似毛玻璃状或融蜡状 边缘不齐 生化性状 有动力 能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶 过氧化氢酶试验阳性 溶血 不发酵甘露醇和木糖 常能液化明胶和使硝酸盐还原 在厌氧条件下能发酵葡萄糖 生化分型 分 个型别 与类似菌鉴别 本菌在生化状态上与苏云金芽胞杆菌极为相似 蛋白质毒素结晶试验 取经30 1 培养24h 2h并于室温放置3d 4d的营养琼脂培养物少许于载玻片上 滴加蒸馏水混匀并涂成薄膜 经自然干燥 微火固定后 加甲醇作用30s后倾去 再通过火焰干燥 于载玻片上滴满0 5 碱性复红 放火焰上加热 微见蒸气 勿使染液沸腾 持续1min 2min 移去火焰 再更换染色液再次加温染色30s 倾去染液用洁净自来水彻底清洗 晾干后镜检 蛋白质毒素结晶试验 观察有无游离芽胞 浅红色 和染成深红色的菱形 正方形或其它形状的蛋白结晶体 如发现游离芽胞形成的不丰富 应将培养物置室温2d 3d再行检查 放置3d 4d以上的苏云金芽胞杆菌培养物有大量的结晶体 但是只有在芽胞裂解通过上述染色方法才能见到 然而 除非见到芽胞 否则培养物应在室温继续放置几天以重新检查毒素晶体 其它芽胞杆菌不产生蛋白质毒素晶体 有关应急演练 目的 通过演练 加强急性传染病防控工作 规