特殊染色技术.doc

(一) 过碘酸-希夫氏染色（PAS染色）PAS染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好的显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。1. 需要试剂2. 具体染色步骤(1) 切片常规脱蜡入水。(2) 入1%过碘酸氧化1015min，水洗。(3) 入schiff氏液染1030min，水洗。(4) 苏木素染细胞核12min，水洗。(5) 入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗。(6) 氨水返蓝数秒，水洗。(7) 流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。(8) 梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3. 染色结果PAS阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。4. 注意事项（1） 组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2） Schiff氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色太深，时间过短标本基底膜着色淡。（3） 入1%盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本褪色。（4） 染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。（二）六胺银-马松染色（PAM-Masson染色）PAM-Masson染色能更清晰显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更为准确。1. 需要试剂 1%过碘酸；六胺银液；苏木素染液；氨水；Masson液；1%亮绿液。2. 具体操作步骤（1） 切片常规脱蜡入水。（2） 入1%过碘酸氧化1015min，水洗5min。（3） 入六银胺液72染3050分钟，以显微镜下见基底膜呈黑色即可。（4） 加2%氯化金数滴于组织，5%硫代硫酸钠洗。（5） 苏木素染细胞核12min，1%盐酸乙醇分化，氨水返蓝。（6） 入Masson液约10min，1%醋酸洗。（7） 入1%亮绿58min，1%醋酸洗。（8） 梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 3染色结果 基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。3. 注意事项（1） 组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2） 染色时间与室温和切片厚度有关，室温低、切片厚需染色时间长，反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。（3） 2%氯化金分化时间要短，时间长容易使银染褪色。（4） 染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。（三）马松染色（Masson染色）Masson染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾小管纤维化程度。1. 需要试剂 苏木素染液；氨水；Masson液；1%亮绿液。2. 具体操作步骤（1） 石蜡常规脱蜡入水。（2） 媒染剂（10%重铬酸钾、10%三氯醋酸等量混合）染1030min，水洗。（3） 苏木素染细胞核12min，水洗。（4） 入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。（5） 入Masson液约10min，水洗，1%醋酸洗。（6） 入2.5%磷钨酸约30s，水洗，1%醋酸洗。（7） 入橘黄G约2min，水洗，1%醋酸洗。（8） 入1%亮绿58min，1%醋酸洗。（9） 入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。3. 染色结果 细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。4. 注意事项（1） 组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。（2） 入Masson液染色时间需严格控制。时间过长着色过深，时间过短着色淡。（3） 入亮绿染色时间需要严格控制，时间长容易覆盖Masson液红色。（4） 染色后的组织切片要将组织四周的污染物擦掉。（四）刚果红染色在肾脏病理染色中，刚果红染色能够将dia淀粉样物质染成砖红色，是诊断淀粉样变肾病的常用染色方法之一。1.需要试剂 高锰酸钾-硫酸液；苏木素染液；氨水；碱性刚果红液。2.具体染色步骤（1）切片常规脱蜡入水。（2）高锰酸钾-硫酸混合处理3min，水洗。（3）5%草酸处理3min，水洗。（4）苏木素染核2min，水洗，蓝化。（5）碱性刚果红液染1030min。（6）入100%乙醇脱水，二甲苯透明、树胶封片。3.染色结果细胞核染蓝色，淀粉样物质呈砖红色。5.