论醋酸杆菌最佳诱变剂的筛选

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/4论醋酸杆菌最佳诱变剂的筛选文章标题论醋酸杆菌最佳诱变剂的筛选摘要以野生型醋酸杆菌为出发菌株经紫外线，亚硝酸，5溴尿嘧啶，吖啶橙，2氨基腺嘌呤，盐酸羟胺六种诱变剂进行诱变，用青霉素测定醋酸杆菌对各种诱变剂的敏感性，进而筛选出对此菌种诱变效果显著的最佳诱变剂。试验结果最佳诱变剂为盐酸羟胺，诱变后其产酸能力比野生型的菌株有明显提高。关键词醋酸杆菌；诱变剂；盐酸羟胺；突变；青霉素醋酸杆菌在自然界中分布较广，例如醋醪、水果、蔬菜表面都可以找到，它是重要的工业用菌之一，能氧化酒精为醋酸，发酵调味品食醋，葡萄糖及维生素C的生产就是利用醋酸杆菌。目前国内醋酸生产菌株以中科141和沪酿101为主1。目前水果醋以其食用及保健美容之功效，倍受大众青睐，为了找到适合水果醋发酵所用的优良菌种，有必要对醋酸杆菌进行诱变，诱变是遗传育种常用来培育优良菌种的方法，它主要包括物理因素如紫外线射线、X射线等，化学因素如5BU、芥子气、亚硝酸、烷化剂等，不同的诱变剂其诱变机理2,3不同，有的是改变了DNA的化学结构或是导致碱基替换、移码突变或结合到DNA分子上等。本试验就精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/4主要依据各种诱变剂的不同诱变机理2,3，选用了前述六种诱变剂对醋酸杆菌进行诱变处理和结果分析。1材料和方法11材料111菌种醋酸杆菌，从苹果皮上自行分离的野生型菌种。112仪器设备手揿计数机、血球计数板、SWCJIF超净工作台、YWQGO2型高压蒸汽消毒器、WC1型微型涡旋混合仪。113试剂紫外线波长为2537NM,15W的紫外灯，作用距离为20CM；亚硝酸、吖啶橙、5溴尿嘧啶中国医药上海化学试剂公司生产；2氨基腺嘌呤CHEMCALCOMPANY；盐酸羟胺上海建新试剂厂生产；青霉素80万单位华北制药股份有限公司生产。114培养基分离培养基葡萄糖03G酵母膏1G碳酸钙1G琼脂2G酒精4加水至100ML；试管斜面培养基葡萄糖03G酵母膏1G碳酸钙2G琼脂2G酒精4加水至100ML；种子培养基葡萄糖03G酵母膏1G酒精3加水至100ML；发酵培养基葡萄糖03G酵母膏1G酒精6加水至100ML。115培养条件分离培养条件3042H；液体酵条件30160H12试验方法121测定野生型醋酸杆菌液体发酵产酸能力将冷藏菌种活化，分离培养，进行液体发酵，用酸碱滴定法测其酸度。122诱变处理将培养好的试管用085的无菌盐水洗下，倒入带有玻璃珠的的大试管振荡1015分钟，配成菌悬液，十倍稀释，涂平板4，培养，与同步培养的野生型菌株进行比较，计算致死率。紫外线诱变处理将上述精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/4菌悬液置于紫外灯下照射，采用不同的照射时间，避光十倍稀释,用黑布包住培养42H,然后记数5。亚硝酸诱变处理取2ML一定浓度的菌悬液于一个已灭菌的空试管中，加2ML已水浴灭菌过1MOL/L的醋酸缓冲液和不同体积的已过灭菌的02MOL/L亚硝酸钠溶液作用十分钟，然后用07MOL/L磷酸氢二钠稀释,分别涂平板记数4。吖啶橙诱变处理用电子天平称取适量的诱变剂水浴灭菌。取2ML一定浓度的菌悬液于一个已灭菌的空试管中，加入不同体积的诱变剂分别涂平板记数5。5溴尿嘧啶诱变处理用电子天平称取适量的诱变剂水浴灭菌。取2ML一定浓度的菌悬液于一个已灭菌的空试管中,加入不同体积的诱变剂分别涂平板记数4。2氨基腺嘌呤诱变处理用电子天平称取适量的诱变剂水浴灭菌。取2ML一定浓度的菌悬液于一个已灭菌的空试管中，加入不同体积的诱变剂分别涂平板记数4。盐酸羟胺诱变处理用电子天平称取适量的诱变剂水浴灭菌。取2ML一定浓度的菌悬液于一个已灭菌的空试管中，加入不同体积的诱变剂分别涂平板记数。153青霉素测醋酸杆菌对诱变剂的敏感性用电子天平称取适量的青霉素溶解，稀释，水浴灭菌。以不同的浓度加入到诱变后的菌悬液中，将未加青霉素的菌悬液与加青霉素的菌悬液分别涂平板记数，计算相对突变率，找出突变率最高的诱变剂。154液态静止发酵试验用筛选出的最佳诱变剂诱变醋酸杆菌后涂精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/4于含有碳酸钙的平皿中，挑取透明圈与菌落直径之比较大的菌落接种试管斜面培养，24H左右后接入液体试管中，且酒精体积分数调到3,培养24H后接入液体三角瓶中，最后酒精体积分数调到6，培养7D,测其酸度，