大小鼠眼眶取血方法(附图)ppt课件

大小鼠眼眶取血方法交流 附图 2014 5 5 交流提纲 实验环境实验材料 动物处理 取血容量时间安排 具体操作 血样处理 问题讨论 环境材料 B毛细管 0 9mm 100mm 看个人习惯使用 经常一管三断 30mm 管 弃去中间段 EP管加入0 1 肝素钠 150U mg 0 1mL 均匀润湿 50 以下干燥 适用1mL全血的抗凝 效果良好 取血时必须提前检查管的质量 标号分组 适当多备 C抗凝EP管 D计时工具 A通风台面 长时间操作 透气通风宽敞台面 便于多组多步骤同时操作 Page 3 Page 4 动物处理 实验期间 补充体液 目前常规为 取血后灌胃给予等统计生理盐水 葡萄糖溶液 动物体重要求一般不低于250g 给药前禁食12 24h 给药前提前0 5 1 0h按0 5 1 0 V W 给水 实验之后 外用消炎药涂布眼部 Page 5 容量时间 注射一般呈现降低趋势 给药后较短时间内采集的点数适当增加 灌胃存在Cmax tmax 需通过考察tmax 根据一般原则 适当调整时间间隔 取血容量时间安排 选点一般原则 预实验建立 药物性质 给药途径 分布相3 4个点 吸收相3 4个点 吸收相3 4个点 一般12h内取血不超过动物质量2 0 v w 每次0 25 0 5mL Page 6 大鼠眼眶取血流程 6样品摇匀 1 将大鼠按压在鼠笼上 拇 中 食指固定住头部 3 右手持毛细管从眼内眦部 与鼠面成45 夹角 旋转刺入 2 紧握颈部 压迫颈两侧 使眼突出 眶后静脉丛充血 4 固定身体 压住后肢 放松手指 调整毛细管 流畅出血 5 取血完成 立即除去颈部压力 将采血器拔出 按压止血 6血样管轻轻混匀 防止凝血 溶血 2压迫颈部 3旋转刺入 4固定采血 5去管止血 1左手保定 Step1A建议笼子内放置重物防止摇晃 B一定要带手套 C开始必须牢牢固定住头部头部乱动 扎位置容易得偏离 且易被咬伤 D可在此时将大鼠取血侧的胡须剪掉 防止接触凝血 Page 7 大鼠眼眶取血流程 Step2A可用管试探性触碰眼球是否已经突出 B此时大鼠反抗挣扎最厉害 保证抓紧的同时 不能太过 使其窒息死亡 Page 8 大鼠眼眶取血流程 Step3A针头斜面先向眼球 刺入后再转一定角度使斜面对着眼眶后界 B刺入深度 小鼠约2 3mm 大鼠约4 5mm 当感到有阻力时即停止推进 同时 管退出约0 1 0 5mm 边退边旋转 C不要使用管的尖锐锋利端插入 易留玻璃碎片在眼内 造成持续伤害 使得下次反抗增加 D拿管的手要保持干净 带血渍的手指不要接触管的两端 易造成凝血 可用醇水擦洗 Page 9 大鼠眼眶取血流程 Step4A一般血流速度快 证明插破了眼眶动脉 如果血流速度慢 证明要调整毛细管的位置 血液都流到组织中了 没顺毛细管流出来 B出血过程中如遇到出血不畅不用着急拔毛细管可以调整一下毛细管的扎入位置或深或浅的挑正一下血会重新流出 C如看见血液已经在毛细管中凝固必须迅速拔除毛细管 再搽干净眼睛 重新换管扎针 D等到出血后将力道转移到大鼠的身体上大鼠出现乱动的情况很大的一部分力是他的后肢使出来的保证她的后肢无法乱蹬就能很好的保定大鼠 然后将中指和食指处解除一半的力道 可以保证血液的顺畅 Page 10 大鼠眼眶取血流程 Step5A当得到所需的血量后 即除去加于颈部的压力 同时 将采血器拔出 以防止术后穿刺孔出血 B尽量把眼睛周围的血渍搽干净 避免结块影响下次取血 Page 11 大鼠眼眶取血流程 大鼠眼眶取血流程 Page 12 大鼠眼眶取血流程 Page 13 大鼠眼眶取血流程 Page 14 Page 15 大鼠眼眶取血流程 Page 16 Page 17 大鼠眼眶取血流程 Page 18 大鼠眼眶取血流程 Page 19 大鼠眼眶取血流程 大鼠眼眶取血流程 Page 20 大鼠眼眶取血流程 Page 21 血样处理 血样处理 血清不抗凝 血浆肝素钠抗凝 A全血37 水浴0 5 1h 短时间内 30min 低速 4000 离心 10min 离心 取上清液 低温保存 B全血室温静置0 5 1h 低温冰箱过夜 离心