氨基酸类神经递质含量测定

氨基酸类神经递质含量测定 一 样品处理 方法1 高效液相色谱法检测小鼠脑组织中氨基酸类神经递质 脑组织称重 加入9倍体积的甲醇 水 冰浴匀浆 离心 上清液低温保存 衍生化反应 小脑组织液加入乙睛 混匀离心 取上清液加入NaHCO3和2 4 二硝基氟苯 混匀 暗中衍生 水浴65 进样 方法2 反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质 脑组织称重 加入生理盐水 冰浴匀浆 离心取上清液 加高氯酸 同时加内标 混匀离心 取上清液 加K2CO3溶液 离心 上清液备用 衍生化反应 预处理好的样品加入OPA衍生液混匀 室温静置 进样 由于氨基酸荧光衍生产物不稳定 尤其是Gly和GABA 故在衍生化时需严格控制反应时间 方法3 高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 脑组织称重 加入高氯酸匀浆 精确加入内标液 混匀低温离心 上清液备用 衍生化反应 上清液加入KHCO3和丹酰氯丙酮溶液 混匀置于80 水浴下30min 取出后加醋酸丙酮溶液终止反应 冷却进样 方法4 发育期大鼠海马氨基酸类神经递质的研究 脑组织称重 加入无水乙醇冰上匀浆 离心两次 将上清液过滤分装 70 保存 衍生化反应 加入异硫氰酸苯酯 乙腈溶液 超声震荡摇匀 70 水浴10min 低温高速离心20min 上清液尽快进样检测 方法5 高效液相色谱 质谱 质谱法测定脑组织中氨基酸类神经递质 脑组织称重 加入HCl 冰浴超声粉碎 匀浆液加入内标 离心取上清加入甲醇 振荡30s 离心 上清液备用 衍生化反应 组织液60 加热并N2吹干 取出后加入盐酸正丁醇 60 衍生化反应30min 60 加热并N2吹干 残渣用甲醇 醋酸铵水溶液溶解 过滤后待用 二 测试方法 方法1 高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质 液相色谱仪系统 购自日本岛津 RF 10AXL荧光检测器色谱条件 色谱柱为AgilentZORBAXC18柱 4 6mm 150mm 5 m 采用梯度洗脱 流动相A为甲醇 流动相B为醋酸钠缓冲液 柱温30 进样量20 L 荧光检测波长 激发光波长为340nm 发射光波长为450nm 0 625 5 mol L浓度范围内线性关系良好 方法2 高效液相色谱法检测小鼠脑组织中氨基酸类神经递质 美国waters2695高效液相色谱仪 UV检测器及色谱数据处理系统 色谱条件 DiamonsilC18色谱柱 4 6 200nm 5 m 流动相A为醋酸钠缓冲液 B为乙睛 水 柱温 28 进样量20 L 采用外标法定量 紫外检测波长为350nm 0 01 1的 g mL范围内线性关系良好 方法3 高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 检测限Asp Glu和Gly为0 2 g LGABA为0 5 g LLC 10AD高效液相色谱仪 RF 530荧光检测器 色谱条件 色谱柱为KromasilC18 4 6 250mm 5 m 流动相为甲醇 醋酸钠 进样量20 L 柱温为室温 荧光检测波长 激发波长为360nm 发射波长为500nm 1 200mg L范围内各组分线性关系良好 方法4 发育期大鼠海马氨基酸类神经递质的研究 检测限Glu 10 5 g mL Asp 16 3 g mL GABA 10 6 g mL Gly 8 8 g mLVARIANProstar210高效液相色谱仪 VARIANProstar325紫外检测器 色谱条件 反相色谱柱 ZORBAXXDBC184 6 250mm 5 m Agilent 流动相A 醋酸钠 乙腈溶液 流动相B 乙腈 水溶液 进样量20 L 紫外检测波长254nm 氨基酸含量在0 027 0 6312mg ml线性关系良好 方法5 反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质 检测限Asp Glu和GABA为0 01 mol L Gly为0 02 mol L Agilent1100高效液相色谱仪 荧光检测器配备3D色谱工作站 色谱条件 色谱柱为HypersilODSC18 4 6 250mm 5 m 日本GL公司 流动相 磷酸二氢钾缓冲液 甲醇 乙腈 柱温40 荧光检测波长 激发波长为340nm 发射波长为455nm 在0 5 40 mol L浓度范围有较好的线性关系 方法6 大鼠脑纹状体微透析法研究天王补心方剂中桔梗的应用 检出限 Asp Glu为0 46 gGABA Gly为0 23 gAgilent1100型高效液相色谱仪 Agilentl046A荧光检测器色谱条件 色谱柱为HypersilODSC18柱 流动相为磷酸缓冲液 甲醇 梯度洗脱 柱温20 荧光检测器 激发波长340nm 发射波长450nm Asp Glu含量小不在线性内 主要测定GABA Gly在0 08 1 28mg L线性关系良好 方法7 柱前在线衍生 反相高效液相色谱内标法快速测定饲料中氨基酸 Agilent1100高效液相色谱仪 G1321A荧光检测器色谱条件 ZorbaxEclipseAAAC18柱色谱柱 75 4 6mm 3 5 m 流动相A为NaH2PO4 H2O缓冲液 流动相B为乙腈 甲醇 水 梯度洗脱 DAD检测波长 紫外波长338nm FLD检测波长 激发波长340nm 发射波长450nm 线性范围为4 5 1000 mol L 方法8 高效液相色谱 质谱 质谱法测定脑组织中氨基酸类神经递质 Agilent1100高效液相色谱仪 美国ABIQTRAP质谱仪色谱条件 预柱为ZORBAXSB C8 2 1 12 5mm 3 5 m 连接Waters公司SymmetryC18 2 1 50mm 3 5 m 色谱柱 流动相为乙腈 甲醇 醋酸铵水溶液 进样量为5 L 质谱条件 电喷雾电离源 正离子方式检测 扫描方式为多反应监测 GABA及Asp在0 1 0 8 mol mL Glu在0 4 1 2 mol mL线性关系良好 方法9 气相色谱质谱法 1 检测到甘氨酸 基于气相气谱 质谱的代谢组学方法研究四氯化碳致小鼠急性肝损伤 6890N 5973N气相色谱 质谱联用仪 AgilentZB 5MS毛细管柱 进样口270 进样2 L 接口270 离子源230 电离电压 70eV 四级杆150 氦气载气 全扫描 2 检测到甘氨酸 谷氨酸 气相色谱 质谱联用法分析手印残留物中氨基酸的研究 GCMS QP5050 日本岛津公司 色谱柱为DB 5MS 进样口温度280 连接口温度230 氦气载气 分流比20 l 进样1 L 桂莉 田洪 郑健高 等 高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质 J 第三军医大学学报 2009 31 8 675 678刘萍 何新荣 周文斌 等 大鼠脑纹状体微透析法研究天王补心方剂中桔梗的应用与抑制性神经递质变化的相关性 J 中国中药杂志 2008 33 23 2830 2833宋泰 高效液相色谱法检测小鼠脑组织中氨基酸类神经递质 J 吉林农业科技学院学报 2009 81 4 18 20吴强恩 郑力行 谢芳 等 反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质 J 复旦学报 医学版 2005 32 3 355 358黄晓 康学军 肖静 等 高效液相色谱法快速测定氨基酸类神经递质 J 检验医学2006 21 3 215 218谭来勋 孙圣刚 王细林 等 发育期大鼠海马氨基酸类神经递质的研究 J StrokeandNervousDisease