莪术油注射液研究论文

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/6莪术油注射液研究论文1材料与仪器细胞株人卵巢癌SKOV3细胞购自中国医学科学院肿瘤研究所,由广西肿瘤防治研究所临床中心实验室传代保存。细胞用含有10灭活小牛血清、100U/ML青霉素、100G/ML链霉素的RPMI1640培养液于37、5CO2条件下培养。MR300酶标仪为美国产,倒置显微镜为日本产。MTT噻唑蓝购自SIGMA公司,RPMI1640和小牛血清为GIBCO公司产品，其余均为国产分析纯试剂。莪术油注射液购自黑龙江瑞格制药有限公司（生产批号051101,国药准字H20023314）。2方法噻唑蓝MTT法确定莪术油注射液对卵巢癌SKOV3细胞的存活抑制作用取对数生长期的卵巢癌SKOV3细胞,浓度为5103个/ML，加入到96孔板，每孔加含细胞的培养液180L,置37,5CO2培养箱孵育24H后,以依次加入终浓度为，125，250G/ML莪术油注射液,同时以1640培养液作为空白对照组,每孔的终体积均为200L，分别培养12，24，36，48H后加入20LMTT2GL1,37,5CO2培养箱孵育4H后,弃上清液,每孔加入DMSO200L,于492NM波长处测定吸光度OD值，每个精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/6浓度平行测定3孔。按下列公式求出生长抑制率IR，通过由IR对浓度作图,求出半数抑制浓度IC50。实验重复3次取平均值。生长抑制率IR（）（1实验组平均A值/空白对照平均A值）100细胞形态学观察倒置显微镜观察细胞爬片后,分别加入，125G/ML浓度的莪术油注射液作用48H后，倒置显微镜观察，摄片。统计学处理所有数据用SPSS软件进行单因素方差分析分析，计量资料结果以S表示，当P认为差异有显著性意义。3结果MTT法检测结果MTT法检测不同浓度、不同时间莪术油注射液对SKOV3细胞抑制效果，见表1。结果表明，莪术油注射液对SKOV3细胞体外生长具有明显的抑制作用，其抑制作用随时间、浓度的增加而不断加强，呈现一定的时效、量效关系，其中各浓度药物作用48H后的抑制效果最好,计算出IC50G/ML。A0，B6，R1。倒置显微镜结果（细胞形态学变化）细胞培养48H精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/6后观察，空白对照组SKOV3细胞生长旺盛，分裂相较多，细胞透明，细胞间连接紧密，密度较大呈复层性生长，部分重叠成簇状，形态多样，多角形或短梭形,胞核圆形或椭圆形,多突起，具有较好的折光性，胞浆丰富透亮,部分细胞内可见分泌颗粒，细胞为梭形或短梭形，细胞内颗粒较少，细胞核隐约可见，培养液中极少见悬浮的死亡细胞以及细胞碎片（见图12）。选择，125G/ML浓度的莪术油作用细胞48H后观察,大体可见细胞密度明显减少，胞体变长,细胞内颗粒感增强，细胞界限模糊,细胞间隙逐渐增宽，细胞质减少,胞浆减少,细胞脱落呈悬浮状,存活细胞减少，细胞核碎裂，可见细胞碎片，随着莪术油作用浓度的增加，上述现象更加明显（具体见图38）。表1莪术油注射液对SKOV3细胞增殖的抑制率（略）不同浓度之间比较的方差分析结果为F，组间均为P；不同时间各组之间的方差分析结果为F，组间均为P图1人卵巢癌SKOV3细胞100,细胞镶嵌排列,呈栅栏状或成腺趋势生长（略）图2人卵巢癌SKOV3细胞200，显示瘤细胞形态（略）图3浓度G/ML莪术油作用后卵巢癌SKOV3细胞显精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/6微镜观察图100，部分细胞核开始变形，颗粒感增强（略）图4浓度G/ML莪术油作用后卵巢癌SKOV3细胞显微镜观察图200，部分细胞体积增大，胞浆减少，培养液中出现死亡细胞（略）图5浓度G/ML莪术油作用后卵巢癌SKOV3细胞显微镜观察图100，细胞损伤明显加重，细胞核变形明显（略）图6浓度G/ML莪术油作用后卵巢癌SKOV3细胞显微镜观察图200，多数细胞体积增大，胞浆明显减少，培养液中死亡细胞增多（略）图7浓度125G/ML莪术油作用后卵巢癌SKOV3细胞显微镜观察图100，核浆比例增大,细胞排列极性消失，颗粒感明显（略）图8浓度125G/ML莪术油作用后卵巢癌SKOV3细胞显微镜观察图200，细胞损伤非常明显，细胞质颗粒脱落，胞浆溶解，培养液中大量死亡细胞和细胞碎片（略）4讨论精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/6莪术油作为一种具有良好应用前景的抗癌药物,其方便、快捷、经济，日益引起人们的重视,成为研究的热点。本实验以莪术油注射液5种浓度,分别作用于卵巢癌SKOV3细胞12，24，36，48H后,发现随药物浓度增加、作用时间延长,抑制率也增加。实验表明，药物作用48H效果最明显,利用中效方程式计算出48H的IC50值为G/ML；小剂量莪术油G/ML对SKOV3细胞的抑制作用并不明显。用浓度为，125，250G/ML莪术油作用SKOV3细胞48H后，其抑制率有明显的量效关系；250G/ML的莪术油抑制率高达，但是在倒置显微镜下观察可见满视野的细胞碎片，绝大多数细胞坏死，几乎找不到贴壁细胞。因此，选择浓度为，125G/ML的莪术油作用SKOV3细胞48H后，主要从细胞体积、细胞质感、细胞浆、细胞质等方面，通过倒置显微镜进行形态学观察与对照组比较，G/ML浓度莪术油作用后可见部分细胞核开始变形，颗粒感增强，细胞体积增大，胞浆减少；G/ML浓度莪术油作用后可见细胞损伤明显加重，细胞核变形明显，多数细胞体积增大，胞浆明显减少，细胞界限模糊；125G/ML浓度莪术油作用后可见核浆比例增大,细胞排列极性消失，颗粒感明显，细胞损伤非常明显，细胞